藏红花素对冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡的影响

本研究的主要目的是评估藏红花素(crocin)对冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡的影响。试验分对照组和藏红花素处理组(浓度分别为0.5、1、1.5和2 mmol/L),样本冻融处理后分别检测了获能参数、抗氧化相关基因及抗凋亡相关基因mRNA的表达。结果显示:1)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子质量较佳,与对照组无显著差异而与其他处理组相比差异显著;(2)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子获能处理后蛋白磷酸化水平显著高于其他处组(P0.05);3)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子抗氧化相关基因CAT与GPX基因mRNA的表达量显著高于其它组(P0.05);4)0.5 mmol/L处理组冻融牛精子凋亡相关基因Caspase-3,TNF-α基因mRNA表达量显著低于其他组(P0.05)。结论:牛精子冻融前藏红花素处理显著改善冻融牛精子获能参数、抗氧化及抗凋亡能力,添加量0.5 mmol/L藏红花素效果最佳。     

Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子活力的影响

[目的]明确水体介质参数与高体雅罗鱼精子活力的关系,解决高体雅罗鱼人工繁殖受精率低及鱼苗鱼种生产效率低的技术难题.[方法]以快速运动时间(FT)、寿命时间(LT)和精子激活率为评价指标,探究Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子活力的影响.[结果]Na+浓度为135 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为71 s,LT为1020 s,精子激活率为95%;K+浓度为5 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为52 s,LT为280 s,精子激活率为80%;葡萄糖浓度为180 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为78 s,LT为1200 s,精子激活率为95%;甘油浓度为180 mmol/L时高体雅罗鱼精子活力最强,FT为79 s,LT为1380 s,精子激活率为90%.[结论]适宜浓度的Na+、K+、葡萄糖及甘油具有单独提高高体雅罗鱼精子活力的作用,但高浓度Na+、K+、葡萄糖及甘油对高体雅罗鱼精子的激活率呈明显抑制作用.实际生产中,可选择135 mmol/L Na+、5 mmol/L K+、180 mmol/L葡萄糖或180 mmol/L甘油作为高体雅罗鱼精子的激活液,提高其人工繁殖生产效率.     

牛附睾和附睾液分析与牛附睾尾精子在模拟附睾液中存活试验

[目的]新鲜精液在离开生殖腺后存活时间很短.相关研究表明副睾液为精子的存活提供了特殊的环境.试验探讨和研究牛附睾精子在体外模拟附睾液中的存活试验的各因素的影响.[方法]试验对公牛附睾头部和尾部的摩尔渗透压和蛋白质浓度进行了分析,牛附睾尾部精子在不同蛋白浓度的CEP-2溶液中,在4℃条件下孵育120h.每24h做一次精子活力检测.[结果]5 d后精子活力仍然超过60;.附睾头、尾部的渗透压分别为(287.0±13.7)mOsm和(310.8±17.0)mOsm.蛋白浓度分别为(37.43±12.55)mg/mL和(50.58±11.08)mg/mL.[结论]附睾尾精子在蛋白浓度为40mg/mL,渗透压为345 mOsm时,精子存活率最高.     

Effects of two kinds of plant growth regulator on propagation of Curcuma alismatifolia bulbs

[目的]探讨不同植物生长调节剂对姜荷花种球繁育的影响筛选提高姜荷花种球繁育数量和质量的生长调节物质,为姜荷花种球繁育提供参考.[方法]以0.25、0.50、1.00 mmol/L的茉莉酸甲脂(Me-JA)和萘乙酸(NAA)分别喷施姜荷花植株叶片,观察其新生种球的数量和重量、球径以及贮藏根等.[结果]0.25、0.50和1.00 mmol/L的Me-JA和NAA喷施姜荷花植株叶片后,新球数量均高于对照(清水),其中以Me-JA 0.50 mmol/L处理的种球最多,每株均产5.27个,远高于对照(3.60个).不同处理球径≥1.5 cm的数量及比例均高于对照,以NAA 0.25 mmol/L处理最高,为232个,占其新球总数的84.1％;NAA 0.25 mmol/L处理所产新球贮藏根≥3条的个数占总数的比例也最大,为59.4％,高于对照和其他处理组.[结论]综合种球数量和质量、种球直径大小以及贮藏根数量等,Me-JA 0.50 mmol/L和NAA 0.25 mmol/L处理更有利于姜荷花种球繁育.     

加工番茄CAPS遗传标记反应体系的优化

[目的]以加工番茄M82、IL7 1-5为材料,研究加工番茄CAPS分析中PCR反应体系的主要成分对CAPS扩增结果的影响.[方法]以公开发表并检验稳定的CAPS标记c2_at5g20180为引物,PCR反应采用25 μL反应体积,含模板DNA 100 ng,2.5 UTaq DNA聚合酶,1.5 mmol/L MgCl2,0.2 mmool/L dNTPs,0.15μmmol/L引物.在保持其它因素一致的条件下,通过5个梯度,变化单一因子,筛选最优参数.反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性40 s,55℃退火40 s,72℃延伸90 s,共37个循环,最后72℃延伸10 min,4℃保存产物.[结果]通过体系优化,成功扩增出清晰稳定的PCR产物.[结论]在总体积为25 μL的PCR反应中,含50 ng模板DNA,0.75 UTaq DNA聚合酶,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L,dNTP浓度为0.16 mmol/L,引物浓度为0.2 μmol/L时效果最好.     

盐胁迫对玉米幼苗的伤害与盐导致的渗透胁迫的关系

[目的]分析不同浓度的短期盐胁迫对玉米幼苗的生理伤害与盐导致的渗透胁迫的关系.[方法]以华农5号玉米为模式植物,设置5个盐浓度梯度(50、100、150、200、300 mmol/L),以0 mmol/L浓度处理作为对照,处理24h之后开始测量各项生理指标,连续测量5d.[结果]在低浓度盐胁迫下,玉米幼苗的各项生理指标与对照相比并没有明显的下降.当盐浓度达到150 mmol/L时,玉米幼苗出现严重的水分亏缺.玉米叶片叶绿素含量与幼苗水分含量变化基本一致,叶绿素含量在盐浓度达到150 mmol/L时出现明显下降.光系统Ⅱ的明显变化则出现在300 mmol/L盐处理组.[结论]低盐胁迫对玉米水分吸收的影响不大.玉米幼苗对盐的耐受浓度在150mmol/L左右,盐浓度达到150 mmol/L时幼苗开始出现明显的胁迫特征,各种水分生理指标下降,叶绿素含量降低.光系统Ⅱ耐盐能力较强,对盐的耐受浓度高达200 mmol/L,在盐浓度达到300 mmol/L时才出现明显伤害.     

水杨酸对3个品种扶芳藤抗旱性的影响

[目的]研究水杨酸对3个品种扶芳藤抗旱性的影响.[方法]在水胁迫条件下,用0(对照CK)、0.5、2.0、5.0 mmol/L浓度的水杨酸对3个品种的扶芳藤叶面进行处理,通过测定总叶绿素含量、可溶性糖含量、超氧化物歧化酶(SOD)含量、过氧化物酶(POD)活性研究3个品种扶芳藤种质材料的抗旱性.[结果]喷施浓度为2.0 mmol/L水杨酸时大叶扶芳藤的抗旱性最强,喷施浓度为0.5 mmol/L水杨酸时花叶扶芳藤的抗旱性最强,喷施浓度为5.0 mmol/L水杨酸时小叶扶芳藤的抗旱性最强.[结论]该研究为扶芳藤抗旱性提供理论依据.     

CaCl2和GA3对盐胁迫下紫藤花粉萌发的影响

[目的]为探明缓解盐胁迫抑制紫藤花粉萌发的方法.[方法]采用花粉人工培养法,研究了不同浓度的CaCl2和GA3对盐胁迫下紫藤（Wisteria sinensis （Sims） Sweet）花粉萌发的影响.[结果]20 mmol/L NaCl胁迫对紫藤花粉活力和花粉管长度均显著降低（P＜0.01）,且花粉管出现分枝.1.5～ 12.0 mmol/L CaCl2和25 ～ 150 mmol/L GA3对盐胁迫下紫藤花粉萌发率和花粉管长均有一定的促进作用,而且均表现出随浓度的增加先增后降的趋势.[结论] CaCl2和GA3的最适处理浓度分别为2.0和100 mmol/L.     

一氧化氮供体硝普钠对猪腔前卵泡体外培养的影响

研究在培养液中添加不同浓度(0.000、0.001、0.010、0.100、1.000 mmol/L)一氧化氮供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对猪腔前卵泡体外培养的影响.结果表明,SNP对猪腔前卵泡存活、发育和腔的形成、卵母细胞正常发育有一定促进作用,但高浓度会产生抑制作用.体外培养后,各处理组卵泡直径差异不显著(P＞0.05);处理第4天,0.001mmol/L SNP处理组卵泡存活率(85.28%)显著高于1.000mmol/L SNP处理组(70.60%,P＜0.05);0.001 mmol/L SNP处理组卵泡成腔率(79.81%)和卵母细胞正常率(50.93%)显著高于1.000 mmol/L SNP处理组(55.22%,35.00%,P＜0.05);0.001mmol/L SNP处理组COC回收率(23.27%)著高于其余处理组(P＜0.05),其余各处理组差异不显著(P＞0.05);1.000mmol/L SNP处理组颗粒细胞凋亡率显著高于其他各组(P＜0.05),而0.001mmol/L SNP处理组颗粒细胞凋亡率显著低于其他各组(P＜0.05),其余各组间差异不显著(P＞0.05).     

不同钠盐胁迫对德兰臭草种子萌发的影响

[目的]研究不同钠盐胁迫对德兰臭草(Melica transsilvanica)种子萌发和幼苗生长的影响.为德兰臭草对不同种盐胁迫的适应能力以及耐受性提供科学参考.[方法]采用(NaCl、Na2CO3、Na2SO4、NaHCO3)4种盐试验,通过对发芽率、萌发指数、相对萌发率、相对盐害率、根长、芽长、地上部分鲜重以及株重的测定,比较不同钠盐对其生长的影响.[结果]在4种盐胁迫中,随着NaCl浓度的增加,发芽率相关指标均呈显著下降,NaC1在200 mmol/L时就不再萌发;Na2CO3浓度小于10 mmol/L时,种子萌发和生长均受到促进,20 mmol/L时就不再萌发;NaHCO3在小于10 mmol/L时,促进种子萌发和生长,在70 mmol/L时就不再萌发;NaSO4对德兰臭草种子萌发的影响最小,150 mmol/L时为种子萌发的半致死浓度,在200 mmol/L时种子就不再萌发.[结论]不同盐处理对德兰臭草种子萌发的抑制作用表现为Na2CO3＞ NaHCO3＞ NaCl＞ Na2SO4.     

精子与慢病毒共孵育条件的优化以及转基因猪的制备

【目的】探索慢病毒与精子共孵育的方法,并制备转基因猪。【方法】采用正交试验分析精子密度、病毒量、精子与慢病毒共孵育时间、精子与慢病毒共孵育温度对精子活力的影响,采用PCR和Southern blotting检测转基因。【结果】①优化慢病毒与精子共孵育条件为：100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min;②与病毒孵育后的精子（109个/mL）给母猪人工授精时,经PCR检测49头仔猪中有14头呈阳性;③Southern blotting结果表明,8头PCR阳性仔猪中,4头融合了外源基因。【结论】优化了精子与慢病毒共孵育的条件（100 µL慢病毒原液（5×105cfu）与1.0×107个/mL精子在17℃下孵育30 min）,成功制备了转基因猪,并检测有外源基因的融合。     

1-MCP处理对巴仁杏冷藏期间生理特性的影响

[目的]研究1-MCP(1-甲基环丙烯)处理对巴仁杏冷藏期间生理特性的影响.[方法]设置0、0.1、1.0和5.0 μL/L1-MCP溶液对巴仁杏杏果进行处理,置于0℃条件下冷藏,测定巴仁杏果实冷害率、冷害指数、细胞膜渗透率、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性、过氧化物酶(POD)活性、多酚氧化酶(PPO)活性.[结果]1μL/L处理能够较好地降低杏果的冷害率和冷害指数,抑制MDA含量的上升;0.1μL/L处理对于保持CAT活性效果较明显;1和5 μL/L处理可以有效降低冷藏期间POD活性和PPO的活性,对减轻果实褐变效果较好.[结论]1-MCP处理巴仁杏可以有效降低杏果的冷害情况,而以1μL/L处理效果较好.     

新疆哈密瓜SRAP反应体系建立和优化

[目的]研究新疆哈密瓜SRAP反应的最佳体系,为进一步研究新疆哈密瓜分子标记辅助育种提供基础.[方法]采用均匀实验设计法对新疆哈密瓜SRAP - PCR反应体系的5个主要因子进行优化.[结果]优化后的SRAP - PCR反应体系扩增多态性高、带型清晰、稳定性好,是新疆哈密瓜SRAP扩增的最佳条件.利用该优化体系,对12个新疆哈密瓜地方品种基因组DNA进行SRAP扩增,大部分材料扩增出来的带清晰可辨、条带丰富、背景无干扰,满足分子标记应用的要求.[结论]20 μL的反应体系中各成分用量或浓度为:模板DNA 36 ng、Taq DNA聚合酶2.5U、dNTPs2.2 5 mmol/L、引物0.6μmol/L、Mg2+ 1.75 mmol/L和2μL10×PCR buffer.     

水培条件下供氮水平对不同棉花品种氮吸收分配与氮效率的影响

【目的】 分析棉花生育前期氮素吸收分配与氮效率将有助于棉花生产中氮肥基施和追施的分配以及氮肥利用率的提高。【方法】 以新陆早45号和新陆早48号为材料,采用营养液培养的方法,设置6个供氮水平(0、7.5、10、15、17.5、30 mmol/L,分别以N₀、N_7.5、N₁₀、N₁₅、N_17.5、N₃₀表示),培育43 d后将其收获。测定棉花各器官干物质量、氮素积累量、氮吸收效率、氮利用效率以及磷素和钾素积累量等指标。【结果】 棉花幼苗各干物质量、单株氮含量、地上部分氮含量、氮积累量、氮吸收效率以及磷素和钾素积累量均随氮浓度的增加呈先升高后降低的趋势;根冠比和氮利用效率均随氮浓度的增加而降低。氮水平在17.5 mmol/L时显著增加了根和地上部干物质量,但降低了棉花根冠比。17.5 mmol/L的氮水平显著提高了棉花地上部分氮含量、单株氮含量、积累量和吸收效率以及磷和钾积累量,但降低了氮的利用效率。新陆早48号各测定指标显著高于新陆早45号。【结论】 营养液中有助于棉苗各生长指标增长的氮素浓度为17.5 mmol/L。适合机采的Ⅰ式果枝新陆早48号较不适合机采的Ⅱ式果枝新陆早45号长势更强。     

丙氨酰-谷氨酰胺对建鲤体外培养淋巴细胞增殖的影响

【目的】探讨丙氨酰-谷氨酰胺（Ala-Gln）对免疫抑制和应激建鲤体外培养淋巴细胞增殖的调控作用。【方法】通过对建鲤注射环磷酰胺和皮质醇来建立免疫抑制和应激模型,以注射生理盐水为对照,分离头肾、脾脏和外周血淋巴细胞进行体外培养,测定培养液中不同浓度Ala-Gln（0.0,2.0,4.0,6.0,8.0和10.0 mmol/L）对淋巴细胞转化率的影响。【结果】免疫抑制模型及应激模型中,建鲤头肾、脾脏和外周血的淋巴细胞转化率均显著低于对照组（P<0.05）,Ala-Gln浓度在0.0～8.0 mmol/L时,可以促进免疫抑制建鲤的淋巴细胞增殖（P<0.05）,在0.0～6.0 mmol/L 时,可以促进应激建鲤的淋巴细胞增殖（P<0.05）,随着Ala-Gln浓度的进一步增大,淋巴细胞转化率不再继续增大（P＞0.05）。【结论】Ala-Gln对离体培养免疫抑制和应激条件下的建鲤淋巴细胞增殖具有明显的促进作用,是有潜力的鱼用抗应激免疫增强剂。     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]建立适合该地区部分葡萄品种RAPD扩增反应体系.[方法]采用阿克苏地区部分葡萄品种(系)为试材,采用改良的CTAB法提取葡萄基因组DNA,对影响葡萄RAPD反应的Mg2+、Taq酶、dNTPs、引物、模板DNA浓度进行优化.[结果]其最佳反应体系为:模板DNA 100 ng,dNTPs 0.1 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3 μmol/L,Taq酶1.5 U,反应体系总体积为20 μL.[结论]改良的CTAB法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于葡萄基因组 DNA的提取.优化后的体系,扩增产物稳定,条带清晰,重复性好.     

铜绿假单胞菌algL基因在毕赤酵母中的表达及其性质研究

 【目的】通过构建毕赤酵母工程菌株,以期获得重组海藻酸裂解酶,并对其性质加以研究。【方法】采用PCR的方法,以铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）基因组DNA 为模板,克隆出约1.0kb的海藻酸裂解酶基因algL的成熟蛋白编码序列,并将其插入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-algL。重组质粒线性化后用聚乙二醇（PEG）法导入毕赤酵母菌株GS115中表达。【结果】用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,表达得到40 kD的目的蛋白,酶活力达540 U•ml-1左右。经测定,该重组酶的最适反应pH为8.5,最适反应温度为40℃,并且在20～45℃,pH 3.0～12.0具有较好的稳定性。50 mmol•L-1的Co2+和Ca2+对酶活力均有显著的促进作用,Zn2+、Cu2+和Fe2+在不同浓度下对酶活力均有不同程度的抑制作用。在重组酶的辅助作用下,抗生素的抑菌效果明显提高。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源海藻酸裂解酶,为其今后在工农业中的应用奠定了基础。     

盐生植物灰绿藜对NaCl和NaHCO3胁迫的生理响应

[目的]应对日益严重的土壤盐渍化问题,开发新的具有生态效益和经济价值的盐生植物.[方法]以具经济价值的新疆盐生植物灰绿藜为材料,采用分光光度法测定了不同浓度NaCl和NaHCO3胁迫后植株的日相对生长率(RGR)、丙二醛(MDA)、多种渗调质、抗氧化剂含量变化及几种重要的抗氧化酶活力变化,探讨了其对盐碱胁迫生理响应机制的差异性.[结果](1)在0～300 mmol/L,NaCl对植株生长的抑制作用较小,300 mmol/L NaHCO3对植株生长产生了一定程度的抑制;(2)150和300 mmol/L NaCl和NaHCO3处理后植株叶片丙二醛含量均显著增加;叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)活力均无显著变化;抗氧化剂ASA显著升高.(3)随盐碱处理浓度增加,叶片脯氨酸(Pro)、甜菜碱(BADH)、可溶性糖含量显著升高,其中脯氨酸在较高浓度NaCl处理下升高幅度显著高于相同浓度的NaHCO3.[结论]植株体内抗氧化剂和渗调质ASA和脯氨酸Pro积累的差异可能是造成灰绿藜对高浓度盐碱胁迫耐受差异的原因之一.     

正交组合对库尔勒香梨贮期病害的影响

【目的】研究控制库尔勒香梨采后贮藏期间萼端黑斑病发病的钙和l-甲基环丙烯(1-MCP)正交组合方式。【方法】采前喷施0.014%、0 .017%、0 .020%钙肥和采后1.0、2.0、3.0 μL/L 1-MCP处理的正交组合,分析各处理对贮期果实品质和萼端黑斑病发病率的影响。【结果】低浓度的采前喷钙结合采后1-MCP处理,能使果实保持较高的硬度和鲜亮的果皮色泽。采前给树体喷钙,能增强采后果实抵御萼端黑斑病等病害发生的能力。【结论】(0.017% 液钙 + 2.0 μL/L 1-MCP)处理能使果实保持较高的硬度和较好的果皮色泽;(0.014% 液钙 + 2.0 μL/L 1-MCP)处理能明显降低贮藏期间果实的萼端黑斑率及其腐烂率,对果实萼端黑斑病的抑制效果最好;(0.020%液钙 + 1.0 μL/L 1-MCP)处理能使果实保持细胞膜的完整性。