浅析利用种子贮藏蛋白鉴定品种纯度

1种子贮藏蛋白电泳技术 贮藏蛋白是种子的主要成分，也是基因表达的产物，几乎所有作物种子贮藏蛋白都具有特异性，且容易分离和提取。此技术就是根据种子贮藏蛋白的这些特点利用电泳中谱带的多态性来鉴定品种的真实性和纯度。通常种子中所含蛋白质可分为4类，即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。每一类蛋白质的比例因作物种类不同而有差异，如水稻含有高水平的谷蛋白，     

利用A-PAGE研究谷子籽粒蛋白质多态性

研究谷子贮藏蛋白多态性对谷子品种选育和鉴定评价具有重要的意义。本文利用A-PAGE方法对来自不同生态区的24份谷子品种籽粒的水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白和醇溶蛋白的多态性进行了研究。结果发现,不同谷子品种之间籽粒水溶蛋白、酸溶蛋白谱带相似,基本没有差异;每个谷子品种的盐溶蛋白谱带有20多条,仅有4个品种出现多态性谱带,多态性也较低。说明谷子品种水溶蛋白、盐溶蛋白和酸溶蛋白A-PAGE谱带不适用于谷子鉴定研究。谷子醇溶蛋白谱带存在一定的异质性,每个品种有7~10条醇溶蛋白谱带,其中5条为公共条带,2~5条为多态性谱带,醇溶蛋白A-PAGE谱带可以作为谷子品种鉴定评价的依据。结果说明,和玉米、小麦等禾谷类作物相比,不同生态区谷子栽培品种蛋白质变异较小,遗传背景变化较小,因此需要不断丰富谷子品种的遗传基础,为谷子品种选育提供更加丰富的材料。     

几个水稻品种的种子蛋白超薄等电聚焦谱带的差异

利用超薄等电聚焦技术对6个水稻品种种子贮藏蛋白进行了分析，发现供试水稻品种间的谱带有差异，据此差异，能有效区别6个水稻品种。     

应用AFLP技术检测水稻遗传多样性的研究

利用扩增片断长度多态性（Amplified fragment lenth polymorphism简作AFLP)分子标记技术研究了23个水稻品种的遗传多样性从49对AFLP引物中筛选出4对多态性高，分辨能力强的引物。4个AFLP引物组合分别扩增出43、37、49、33条多态性带，平均每个引物组合扩出40．5条多态性带，4个引物组合共扩增出246条带。利用AFLP数据进行聚类分析，将23个品种聚为10个类群，结果表明，AFLP在水稻类群划分的应用是可行的。     

中国江、浙地区栽培大麦遗传资源的RAPD研究

采用随机扩增多态性（RAPD）标记，探讨了我国部分栽培大麦品种的遗传背景。结果表明：200个随机引物中，有30个引物扩增出的产物具有多态性，30个引物共扩增出223条谱带，其中130条谱带具有多态性，每个引物可扩增出2~9条多态性谱带，平均4.19条。67个大麦品种平均表型多样性值0.369，裸麦的表型多样性高于皮麦的表型多样性     

AFLP分子标记鉴别大白菜品种

本试验采用AFLP技术,研究了90份来自7个不同栽培地区的大白菜品种材料。共筛选了20对引物,不同引物组合检测多态性谱带的能力有很大的差异,多态性谱带的数量从9条到32条不等。其中E—ACA／M—CTG是大白菜品种十分高效的引物组合,共产生7l条清晰的扩增带,其中有32条多态性谱带,多态性谱带的百分率为45．7％。通过该引物组合,能将90个品种全部区分开来。同时应用该引物组合检测2个大白菜杂交品种(北京新2号,京夏王)各10株,其中有1株北京新2号的谱带异常,其余同一品种不同单株的带型完全一致。表明AFLP标记用于研究品种指纹图谱,并鉴别品种是完全可行的。     

利用SDS-PAGE鉴定不同地区谷子籽粒醇溶蛋白差异

醇溶蛋白是谷子籽粒主要的贮藏蛋白,研究谷子醇溶蛋白的差异对于谷子品种选育及种质鉴定评价有重要的意义。本研究利用SDS-PAGE方法对来自不同省份的46份谷子材料进行醇溶蛋白谱带分析,结果表明,单个品种可分离出14~24条醇溶蛋白谱带,平均每个品种18.74条带,46份品种共分离出32条醇溶蛋白谱带,其中7条为共有带,25条为多态性带,多态性带数占分离出总带数的78.1%。根据迁移率大小将醇溶蛋白谱带分为A、B、C、D四个区段,四个区段内分别有6、16、15、4种带型。在B、C区段醇溶蛋白有较丰富的多态性,A、B区段弱带较多,C、D区段强带较多。醇溶蛋白分子量在13.0~55.0 kDa之间,在29,25 kDa(第23条带)、22.5 kDa(第26条带)、17.5 kDa(第28条带)位点附近醇溶蛋白表达丰富且品种之间存在较大差异。品种之间醇溶蛋白谱带存在较大的差异,可作为品种鉴定与评价的重要依据。聚类分析表明,在GD值为0.45时,46个品种可以分为5类,其中34个品种聚为一类,其他四类所包含的材料较少,这表明大部分材料醇溶蛋白相似度较高。     

AFLP在水稻类群划分研究中的应用

利用AFLP分子标记技术研究了22个水稻品种的遗传多样性，从49对AFLP引物中筛选出了4对多态性高，分辨能力强的引物，4个AFLP引物组合分别扩增出43、37、49、33条多态性带，平均每个引物组合扩出40．5条多态性带，4个引物组合共扩增出246条带。利用AFLP数据进行聚类分析，将22个品种聚为8群，结果表明，AFLP在水稻类群划分的应用是可行的。     

不同抑制物质处理对杂交水稻种子活力和胚贮藏蛋白的影响

本文研究了穗萌抑制剂（ＩＳ）、比久（Ｂ９）、多效唑（ＰＰ３３３）三种抑制物质田间处理对杂交水稻组合协优４６（Ｘ４６）和汕优１０号（Ｓ１０）种子生活力和胚贮藏蛋白的影响。结果表明,抑制物质处理有利于保持杂交水稻种子的生活力和活力,其中以ＩＳ处理效果最为明显,经常温贮藏２０个月后,ＩＳ处理的Ｘ４６和Ｓ１０种子发芽率分别比对照高１９．０％和１２．５％,发芽指数分别比对照提高６．７和６．５。不同生活力的杂交水稻种子,吸胀２４小时后的胚贮藏蛋白电泳图谱有显著差异,在分子量为４５．０～２０５．０ＫＤ之间最为明显,生活力和活力较高的种子,其胚贮藏蛋白谱带条数和浓度皆多于或高于代生活力和低活力种子。     

用SRAP标记分析黄瓜品种遗传多样性及鉴定品种

利用相关序列扩增多态性（SRAP）分子标记技术对35份不同类型的黄瓜品种进行了指纹图谱遗传多态性分析，从38对引物组合中筛选出3个多态性高的引物组合，此3对引物扩增得到的图谱可将35份黄瓜品种完全区分开来。依据SRAP指纹图谱聚类分析结果确定了品种之间的遗传距离以及鉴别的难易程度。用SRAP分子标记技术得到了两个黄瓜品种杂交组合F1与亲本的指纹图谱中的鉴别条带，可以用于黄瓜杂交种的纯度检测。     

超薄等电聚焦电泳技术在水稻品种鉴定上的运用

利用超薄等电聚焦电泳技术对20个水稻品种进行了鉴定,发现10条蛋白质带在不同品种间表现出多态性。利用这19条蛋白质带和种子外观形态上的差异,可将20个品种中的11个品种完全区分开,另外9个品种可分为两组。     

河南省水稻中晚粳新品系遗传多样性的SRAP分析

利用SRAP分子标记技术对16个河南省中晚粳新品系进行了遗传多样性研究。从70个引物组合中筛选出了10个用于PCR反应,共扩增出104个条带,平均每个引物扩增的条带数为10.4个,多态性条带66个,多态性比率为63.46%,显示了较高的多态性。其中,有9个引物具有单一标记条带或特异缺失条带,共可鉴别8个品种。应用SPSS11.5分析软件对16种供试材料进行了聚类分析,结果显示:16种供试材料可分为5类,其中新丰039和豫粳6号各单独聚为一类。16个品种间的遗传相似系数在0.186~0.808之间,其中信粳03260和新稻03G43的亲缘关系最近,而3优121和豫粳6号的遗传差异最大。这些结果可为水稻种质资源的鉴定、遗传多样性分析和水稻育种工作中杂交亲本的选择提供科学依据。     

利用SSR分子标记构建‘太湖糯’、‘苏御糯’及部分优质糯稻的DNA指纹图谱

为了探明国内部分优质糯稻资源的遗传背景,从分子水平揭示其遗传多样性,同时为优质糯稻资源的种质鉴定和创新利用提供理论依据,以太湖稻区地产优质糯稻太湖糯、苏御糯和国内其他地区部分糯稻共14个品种为研究材料,利用SSR分子标记进行了DNA指纹图谱的构建,并进行聚类分析,研究其亲缘关系。结果表明,从35对国标中公布的水稻SSR引物中筛选出17对核心引物,在这14个糯稻品种中共检测到63个多态性片段。利用这17对核心引物进行聚类分析,发现供试14个品种的遗传相似系数在0.619以上,表明14个糯稻品种具有较丰富的遗传变异;并利用其中6个引物,经PCR扩增获得的23条清晰、稳定、重复性好的多态扩增条带,建立了14个糯稻品种的DNA指纹图谱。     

杂交稻部分不育系与恢复系的SSR分类

选用分布于水稻(Oryza sativa L.)12条染色体上的36对SSR(simple sequence repeats)引物，分析了5个光温敏核不育系、7个细胞质雄性不育系及54份来自不同生态类型恢复系或品种的遗传差异。在供试材料中共检测出300条多态性片段，平均每对SSR引物检测到8.33条。分析结果表明，(1) SSR标记明确地把供试的66份水稻材料中的65份区分开来，和已知系谱的亲缘关系多数吻合，与表型性状聚类结果也有一定的相似性。(2) 以GD=0.73为标准，可准确地将籼稻、粳稻、野生稻三大类区分开；以GD=0.63为标准，又可区分出籼稻大类中带有粳稻或野生稻血缘的品种。表明SSR标记对籼稻、粳稻、野生稻品种的分类灵敏度高、结果可靠；并筛选出可用于鉴别水稻籼粳类型的10对特异性引物。(3) 以GD=0.56为标准，将供试材料划分在8个生态类型中，为生产上杂优组合亲本的选配提供了一些有益的参考。同时，生产上常用的一些杂交稻亲本划分在不同的生态类型中，表明强优势组合亲本间的遗传差异一般较大。     

30个中国甘薯主栽品种的RAPD指纹图谱构建及遗传变异分析

研究以中国30个甘薯主栽品种为材料,对甘薯RAPD指纹图谱的构建进行了探讨。从102个RAPD引物中筛选出26个多态性丰富的引物用于PCR扩增,共扩增出255条多态性条带,平均每个引物扩增的多态性带数为9.8条。其中S32和S39多态性最高,仅用其中1个引物即能将这30个甘薯品种完全区分开,且由此构建的指纹图谱出现的概率很小,分别为4.77×10^-7（1/221）和1.91×10^-6（1/219）。结果进一步表明,这30个甘薯品种的遗传距离变异幅度较大,为0.0390～0.4306,平均遗传距离为0.3086。RAPD聚类分析表明,地域分布相近的甘薯品种和具有同一亲本的甘薯品种聚在一起,与这些甘薯品种的系谱图一致。     

DNA polymorphisms in Oryza sativa L. and Lactuca sativa L. amplified by arbitrary primed PCR

Summary Thirty-five rice (Oryza sativa L.) varieties, including 18 japonica, 5 javanica and 12 indica subspecies and 12 lettuce (Lactuca sativa L.) varieties were identified taxonomically, using PCR with originally designed 21 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) primers and 8 sequence-specific primers, used for amplifying four specific DNA fragments. Use of these primers revealed polymorphisms among varieties in rice and lettuce and facilitates DNA fingerprinting. Dendrograms of both species based on polymorphisms were constructed and genetical relationships were established. In rice, half the number of amplified bands were polymorphic and almost all varieties differentiated. However, differentiation of minor genetic alterations among somaclonal variants or mutants and their mother varieties was not feasible. In L. sativa, 47% of the amplified fragments were polymorphic and all 12 varieties were differentiated. Some of the PCR fragments were variety or type specific, which could be used for indicators for type-selection. The dendrogram obtained showed differentiated clusters of crisphead, leaf and butterhead type, findings in good accord with the classification based on the genetic background.     

水稻与玉米远缘杂交改良籼稻温敏两用核不育系之SSR分析

选用7对SSR引物对7个水稻×玉米远缘后代不育株系及其双亲进行SSR分析。与母本扩增带型相比,共扩增出18条特异带,即表现为多态性。在检出的18条特异带中,13条的带型与父本相同,另5条的带型不同于双亲,即为变异带型。7个参试后代不育株系都检测到了SSR多态性标记,但各株系间检出多态性位点的数量存在差异,最多的一个株系ys-2同时检测到3个多态性标记。试验结果表明通过远缘杂交技术很可能将玉米的某些DNA片段成功地导入了水稻两用核不育系,表明研究在籼稻两用核不育系的改良上取得了初步的成果。     

谷子品种遗传差异的RAPD标记分析

利用RAPD标记对来自春、夏谷区不同育种单位的23份谷子品种进行了多态性和聚类分析。结果表明,23份品种的RAPD标记的多态性较低,13个引物共扩增出56条多态性带,平均每个引物扩增多态性带为4.31条,引物S30和S45都有7条多态性带,能够鉴别的品种最多为13个。聚类分析表明,当遗传相似性系数为0.75时,23个品种可分为4类,不同生态区的品种可以归为一类,而同一生态区的品种也可以归为不同的类,基于RAPD的遗传相似性和品种来源地没有必然的一致性。