草莓“达斯莱克特”的离体再生

本文研究了基因型、植物生长调节剂及配比、基本培养基、外植体和苗龄等因子对草莓离体再生不定芽的影响。结果表明：草莓不同基因型再生能力差异很大,再生频率为0-94％,在4个供试草莓品种中以“达斯莱克特”再生能力最强。基本培养基MS＋B5大大促进草莓“达斯莱克特”叶片不定芽的分化,以MS＋B5＋6-BA3．0mg／L＋2,4-D0．1mg／L诱导效果最佳;同时,低浓度的2,4-D有利于不定芽再生,IAA、IBA、NAA分别以浓度1．0mg／L、0．5mg／L、0．1mg／L诱导较好,TDZ的诱导效果不明显,且不及6-BA。另外,叶片再生能力远大于叶柄和根,根未诱导出不定芽,以继代28～35d的试管苗幼嫩、平展叶片作为接种外植体为宜,获得了草莓高效的离体再生体系。     

菊苣高效不定芽直接发生及其植株再生

本研究以菊苣无菌苗叶片为外植体,建立了高效不定芽直接发生及其植株再生体系。在附加不同浓度N-6-benzyladenine(6-BA)或与低浓度α-naphthaleneacetic acid(NAA)组合的MS培养基上,5~7d外植体表面不经过愈伤组织诱导阶段,直接形成不定芽。组织学观察表明,不定芽起源于叶片维管束薄壁细胞,且其微管组织系统与叶片外植体内微管组织系统紧密相连。6-BA是不定芽直接发生所必需的,外植体的发育时期、取材部位和培养基蔗糖浓度对不定芽直接发生有重要影响。在附加2.0mg/L 6-BA,0.5mg/L NAA,100mg/L Vc,100mg/L VB1,300mg/L脯氨酸和40g/L蔗糖的MS培养基上,培养20d龄基部叶片15d时,不定芽直接发生频率最高为100%,每块外植体上产生的不定芽数量也最多,平均为36~38个。在1/2 MS+IBA 0.5mg/L培养基上,再生苗诱导生根频率为97.58%,再生植株移栽于盆土中,100%存活且生长良好,未见形态异常。     

雪樱子组织培养及植株再生体系的研究

以雪樱子无菌苗叶片及茎段为外植体,研究了不同激素及不同浓度激素配比的培养基对雪樱子愈伤组织的诱导、不定芽分化及其生根的影响。结果表明,愈伤组织诱导以及芽分化最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+ IAA 0.2 mg/L,出愈率为87.5%,分化率为65.0%;生根最适培养基为MS+ IAA 0.2 mg/L。     

百合农杆菌介导的遗传转化受体系统的建立

以麝香百合"素雅"(white-Elegance)作为供试材料建立了百合农杆菌介导的受体系统。鳞茎片的诱导分化以MS培养基中添加0.5mg/L6-BA 0.2mg/LNAA为最好;再生苗鳞茎片的不定芽分化以MS培养基中添加1.0mg/L6-BA 0.2mg/LNAA为最好;再生苗小叶柄的诱导以MS培养基中添加1mg/LNAA为佳。确定了再生苗不同部位适宜的抗生素筛选浓度,卡那霉素的筛选浓度小鳞茎块确定为125mg/L,而小叶柄确定为75mg/L;头孢霉素抑菌浓度确定为250mg/L。     

土三七不定芽直接发生与遗传稳定性的RAPD分析

以土三七叶片为外植体,在MS+6-BA2mg/L+NAA1mg/L培养基上直接生成不定芽,经MS+IBA0.2mg/L培养基诱导生根,多次继代培养、移栽,建立了土三七不定芽植株再生体系。用RAPD分析了野生土三七、连续3次继代试管苗和移栽苗的遗传稳定性。结果显示:用选取的20条随机引物共扩增出清晰的88个条带,条带数在2～8条之间,平均4.4条。不同植株扩增获得的条带数目和带型一致,表明在所检测范围内继代培养和移栽未影响土三七DNA序列。所建立的直接再生程序可用于土三七试管苗大量生产。     

草莓茎尖组织培养技术研究

为建立完善的草莓组培快繁体系,解决种苗退化问题,以当地草莓主栽品种红颜茎尖为试材,设置0.1%升汞和0.1%升汞+2%吐温-80溶液2种外植体消毒处理,以MS为基本培养基,分别添加不同浓度6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的6个诱导和继代增殖培养基、5个生根培养基,研究草莓茎尖外植体消毒最佳方式与时间, 筛选诱导、继代增殖及生根培养的最佳培养基。结果表明,0.1%升汞+2%吐温-80溶液处理8 min时草莓茎尖污染率及褐化率较低,萌发率最高,可达82.3%,为最佳的消毒方式。外植体在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基中,可诱导出更多的健壮不定芽,萌发率为83.3%,为最佳诱导培养基;适宜的继代增殖培养基为 MS+1.0 mg/L 6-BA +0.02 mg/LNAA,增殖系数为4.5%;1/2MS+0.01 mg/L NAA为最佳生根培养基,生根率高达100％。     

红掌的离体组织培养与快速繁殖

本研究从红掌组培的实用化生产出发,在不同激素成份及浓度水平下,以MS为基本培养基,红掌的叶片或叶柄为外植体进行组培快繁试验。实验结果表明：MS＋6-BA1mg/L＋2.4-D0.1mg/L为最佳诱导培养基,诱导率可达89%以上,红掌的叶片诱导效果比叶柄较为理想。最适分化培养基为：MS＋BA1.5mg/L＋NAA0.1mg/L,其分化率为93%;继代增殖培养基为MS＋6-BA2mg/L＋NAA0.2mg/L,增殖系数达7.1;适合生根诱导培养基为l/2MS＋NAA0.2mg/L,生根率达96.5%以上。生根苗田间移栽后成活率可达95%以上。     

观赏羽衣甘蓝高频再生体系的建立

观赏羽衣甘蓝是一种赏食兼用的耐冻优良景观植物。为了通过基因工程手段赋予其抗虫性,并进一步提高其低温耐受性,获得新的抗性种质,本研究以优良育种品系为试材,详细探讨了影响离体培养不定芽再生的因素,建立了高效再生体系。以8份不同类型羽衣甘蓝基因型的带柄子叶、子叶、下胚轴为外植体,研究了不同基因型、不同外植体、不同的培养基激素浓度配比及添加AgNO3对不定芽诱导的影响。结果表明:无论基因型及使用的培养基,带柄子叶均为最佳外植体;不同的基因型、不同外植体其最佳的芽诱导培养基不同;筛选出两份材料,其带柄子叶分别在L6(MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L)及L3(MS+6-BA1.5mg/L)培养基中不定芽诱导率为100%,下胚轴诱导率最高也能达88.33%;培养基中添加4mg/L AgNO3不利于羽衣甘蓝的不定芽诱导;再生株生根以MS+NAA0.1mg/L效果好,生根率可达100%。     

农杆菌介导的洋桔梗遗传转化体系的建立

以洋桔梗叶片为外植体,建立了植株再生体系,并在此基础上,用根癌农杆菌介导法,研究了影响洋桔梗转化的若干因素。结果表明,诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.15mg/L,不定芽诱导率达74.5%;不定芽生根培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg/L,生根率达90%。不定芽分化阶段和生根阶段的Km筛选浓度分别为45mg/L和15mg/L;根癌农杆菌菌液浓度OD600值为0.6,侵染时间10min,共培养时间3d,有利于抗性芽的产生。Km筛选得到的抗性植株经过PCR和Southern检测表明,八氢番茄红素合成酶基因(PSY)已经整合到洋桔梗基因组中。     

朝天罐的离体培养与植株再生

以朝天罐（Osbeckia opipara）的茎段为外植体进行离体培养植株再生研究,结果表明：茎段在适宜的培养基上可形成愈伤组织,并分化成再生植株。培养基MS + 6-BA 2 mg/L  + NAA 0.2 mg/L + 蔗糖30 mg/L+ 琼脂7 mg/L,既适合于愈伤组织的诱导,也适合于愈伤组织的增殖和分化,诱导率为83.3％;丛生芽增殖的最佳培养基为MS + 6-BA 0.2 mg/L+ NAA 0.1 mg•L-1 + 蔗糖 50 mg/L + 琼脂 7mg/L,增殖系数为 7.2; 试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS + NAA 0.5 mg/L + IBA 0.2 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L + 蔗糖 20 mg/L + 琼脂 7 mg/L,生根率为100％。     

东方百合“甜梦”花器官组织培养再生植株研究

研究东方百合"甜梦"品种花器官的组织培养,为"甜梦"百合种球生产产业化提供技术支持。以"甜梦"花器官为外植体诱导愈伤组织,以MS添加不同浓度6-BA为愈伤组织分化培养基,MS添加不同浓度6-BA及NAA配比为诱导叶片产生不定芽的培养基,MS添加不同浓度糖为结鳞茎培养基,进行组织培养。结果表明:花器官不同部位诱导愈伤组织从易到难为:子房花柱花药花托;愈伤组织分化以MS+6-BA 3.0 mg/L培养基较适宜;无菌叶片诱导不定芽以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基为好;添加60 g/L糖的培养基利于不定芽结鳞茎生根;带鳞茎组培苗可直接移栽于大田菜园土。通过"甜梦"花器官的培养,得到可用于生产的组培苗,该技术可应用于"甜梦"百合种苗工厂化生产。     

金线莲组培快繁技术研究

以金线莲植株茎段为外植体,MS为基本培养基,附加不同浓度的植物生长调节剂组合进行组织培养与快繁研究,结果表明不定芽诱导与继代增殖的较适宜的培养基分别为MS＋6-BA1.0mg/L＋KT1.0mg/L,MS＋6-BA1.0mg/L＋NAA0.5mg/L;生根培养基以MS＋IBA0.5mg/L＋活性炭0.5g/L＋香蕉泥20g/L为宜。     

重瓣大岩桐离体培养优化的研究

以重瓣大岩桐为试材进行离体培养,结果表明:MS 6-BA 2.0mg/L NAA0.2mg/L培养基上能形成愈伤组织;MS 6-BA 1.0mg、L NAA0.1 mg/L培养基上能形成愈伤组织和较少的不定茅;在MS 6-BA0.5 mg/L NAA0.1 mg/L培养基上少或不形成愈伤组织,而直接形成不定芽.生根培养用1/2MS培养基,10～15天内可长出10～15条毛细根.     

香水百合组织培养中外植体和培养基配方的选取

研究探讨香水百合(Lilium casa Blanca)的离体培养过程,结果表明,(1)香水百合最佳外植体为子房和花瓣,茎段次之,花药和叶片几乎不启动;(2)启动最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA;(3)丛生芽分化的最佳培养基为MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA;(4)生根诱导最佳培养基为MS+0.1mg/LIBA+0.2mg/LNAA。     

大白菜子叶段高频再生体系的建立

为获得大白菜高效再生体系,研究了不同的6-BA和NAA浓度、供体苗态、外植体切割和接种方式对6种大白菜子叶段不定芽再生的影响。结果表明:当大白菜苗期为两片子叶绿色将展平、第一片真叶未露出、小苗直立生长时(播种5~6 d)为最佳苗态;以保留单片子叶,在生长点处(即子叶柄基部和下胚轴交接处)先横切,然后纵切,去除顶芽,切除子叶顶端1/3竖直插入培养基为最佳切割和接种方式;在MS+7.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基上启动培养2~3d,再转入MS+5.5mg/L 6-BA+0.5mg/LNAA芽诱导培养基培养时再生频率最高;在供试的6种基因型材料中,橙色大白菜06J28子叶段再生频率最高,为90.4%,每块外植体再生芽数最高达1.14个,这一研究结果为大白菜转基因奠定了良好基础。     

垂吊型矮牵牛叶片培养不定芽发生和微繁研究

以垂吊型矮牵牛叶片为材料 ,建立了垂吊型矮牵牛叶片高效不定芽发生、植株再生和微繁的技术体系。研究了不同激素及其组合对叶片不定芽发生、壮苗和生根的效应。结果显示 ,MS +BA 2mg L +NAA 0 1mg L是叶片不定芽发生的适宜培养基 ;MS +BA 0 5mg L +IBA0 1mg L +GA 0 5mg L是不定芽形成壮苗的适宜培养基 ;MS +IAA 0 1mg L是壮苗生根的适宜培养基 ;草炭珍珠岩基质是生根苗移栽的适宜基质     

滇黄芩器官发生与不同继代次数遗传稳定性的RAPD分析

本研究以滇黄芩不带腋芽茎段为外植体,采用不同配比激素的MS培养基建立了滇黄芩器官发生,植株再生体系。结果表明,茎段在MS＋6-BA 2mg／L＋NAA 0.5mg／L培养基上培养时,愈伤组织诱导率达到100％;以相同培养基进行分化,并在MS＋6-BA 2mg／L＋NAA 0.2mg／L培养基上扩繁丛生芽。在1／2MS＋IBA 0.2mg／L培养基诱导生根,扦插继代。利用RAPD分析不同继代次数再生植株,所用的39条随机引物中只有1条引物带型发生变化。说明经组织培养获得的再生植株遗传稳定,可多次继代培养,为滇黄芩进一步遗传操作和扩大药材资源奠定基础。     

牛角瓜的组织培养

以牛角瓜的叶片为外植体,进行牛角瓜的组织培养。结果表明,培养基MS 2,4-D 2 mg/L利于愈伤组织的诱导;培养基MS 6-BA 0.5 mg/L NAA 0.1 mg/L有利于芽的分化和增殖;生根壮苗的培养基为1/2 MS NAA 0.5 mg/L,其生根率100%;试管苗生根培养30 d后移栽,成活率可达85%以上。     

安祖花愈伤组织诱导及其分化的正交试验设计

用正交设计法研究了不同激素处理及不同外植体对安祖花愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明,在本试验设计中,外植体是诱导安祖花愈伤组织的主要因素;以茎段为外植体诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+1.0mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA;愈伤组织不定芽诱导的主要因素是6-BA;不定芽诱导分化的最佳培养基为1/2MS+0.5mg/L 2,4-D+1.0mg/L 6-BA。     

Thidiazuron对草莓外植体再生不定芽的影响*

采用TDZ(thidiazuron，N—phenyl-N’-l，2，3-thiadiazol-5’-ylurea)与生长素的不同组合诱导离体草莓(Fragaria ananassa Duch．)新星2号、Honeoye、Tudla和Darselect的叶盘和叶柄再生不定芽，建立了草莓高效再生系统。实验结果表明：新星2号和Tudla在MS TDZ2．0mg/L IAA0．1mg／L上再生频率分别为94．2％和87．9％，每叶盘平均再生不定芽为1．9和1．7个；Honeoye在MS TDZ2．0mg／L 2，4-D0．1mg／L上再生效果好(89．1％)；Darselect在MS TDZ8．0mg／L IAA0．1mg／L上叶盘再生频率较高(79．6％)；同一基因型草莓叶盘再生效果比叶柄好。