鸡肝脏胆汁酸结合蛋白(L-BABP)抗血清制备及组织表达特性分析

制备鸡(Gallus gallus)肝脏胆汁酸结合蛋白(L-BABP)的多克隆抗血清,并分析L-BABP的组织表达特性.利用RT-PCR扩增L-BABP基因的CDS区,构建鸡L-BABP基因的GST融合蛋白表达质粒pGEX-4T/L-BABP.将重组表达质粒转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中,经IPTG诱导后产生GST/L-BABP融合蛋白,利用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化目的蛋白,将纯化的GST/L-BABP融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗血清.诱导得到了1个38 kD(12 kDL-BABP+26 kD GST)的融合蛋白,经间接ELISA方法测定制备的抗血清效价为1:100 000.利用此抗血清分析鸡L-BABP的组织表达特性,结果表明该基因仅在肝脏组织中特异性表达,在肾、肺、腿肌、腺胃、胸肌、心脏、脂肪、脾、回肠、肌胃、空肠和十二指肠等12种组织中没有检测到表达信号.本研究制备的高效价、高特异性的鸡L-BABP抗血清,为从蛋白水平上深入研究L-BABP的生物学功能提供了良好的基础.     

转基因大豆GTS40-3-2对子代雄性大鼠主要器官和生殖机能的影响研究

为探讨长期饲喂转基因大豆GTS40-3-2对雄性大鼠器官和生殖机能的影响,本研究将雌、雄大鼠随机分为2组,分别饲喂含转基因和非转基因大豆成分的饲料90 d后,亲代大鼠组内交配获得子代大鼠;子代雄性大鼠断乳后继续饲喂对应饲料30、60和90 d后,摘取子代大鼠睾丸、附睾、脑、心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏和肾上腺,检测脏器系数;选取睾丸、附睾、肾、肺制备石蜡切片,观察各器官的组织结构变化;运用实时荧光定量PCR检测睾丸雄性激素合成限制性蛋白葡萄糖转运蛋白8(GLUT8)基因的表达变化;用蛋白酶联免疫反应法进一步验证GLUT8蛋白含量。结果表明,与对照组相比,饲喂30、90 d后9种器官脏器系数均无显著差异(P>0.05);饲喂60 d后,仅肺、附睾脏器系数存在显著差异(P<0.05)。组织切片镜检结果显示,睾丸、附睾、肾、肺未发现明显结构改变;睾丸GLUT8基因转录水平和蛋白水平均未受到显著影响(P>0.05)。综上所述,转基因大豆GTS40-3-2饲料在试验周期内未对子代雄性大鼠各重要器官产生不良影响,对雄性大鼠生殖器官及其生理机能未显示毒性作用。本研究结果进一步拓展了转基因大豆安全评价研究深度,对转基因大豆的推广应用具有重要意义。     

Collagen1和Collagen3在牦牛肺纤维化组织中的表达研究

为探讨Collagen1和Collagen3在牦牛肺纤维化组织中的表达，阐明Collagen1和Collagen3在牦牛肺纤维化进程中发挥的作用，采集牦牛正常肺组织和发生纤维化的肺组织，将其分为对照组和试验组，通过HE染色、Masson染色及透射电镜观察肺超微结构的病理变化及纤维化状态；利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白免疫印迹（WB）、免疫组化和免疫荧光染色法检测和定位Collagen1、Collagen3基因和蛋白的表达情况。结果显示，试照组牦牛肺组织结构完整，肺泡隔无增厚，支气管管腔和肺泡腔内均无炎性渗出物；试验组肺组织可见片状坏死，胞核碎裂溶解，重度出血，大范围肺水肿。Collagen1在试验组中的表达量高于对照组，而Collagen3在对照组中的表达量高于试验组。在试验组中，Collagen1和Collagen3蛋白大量增生，在肺泡隔中有大量分布，其余分布位置与肺对照组基本一致，但表达都高于对照组。综上所述，Collagen1和Collagen3在牦牛发生肺纤维化的过程中发挥着重要作用，Collagen1和Collagen3的相对表达量在诊断牦牛纤维化肺炎中具有一...     

拟南芥snc2-1D通过WRKY70激活受体类蛋白介导的免疫反应

植物在长期的自然进化过程中形成了两种抵御病原菌的策略方法:一种是由植物细胞膜受体感受病原菌相关分子模式激活的免疫反应(PTI),主要的识别受体包括FLS2、EFR和CERK1等;另一种是抗性蛋白特异性识别某些病原菌的效应蛋白激活免疫反应(ETI),这类的抗性蛋白统称为R蛋白。研究表明,植物体内主要存在三类R蛋白,最大的一类是包含核苷酸结合位点     

基于iTRAQ质谱分析技术筛选南方型紫花苜蓿根部响应盐胁迫差异表达蛋白

为了从蛋白质水平上揭示南方型紫花苜蓿(Medicago sativa ‘Millennium’)适应盐胁迫的分子机制,本研究以30 d苗龄的南方型紫花苜蓿实生苗为材料,分析正常培养和250 mmol/L NaCl处理72 h后根中的蛋白表达变化,采用同位素相对标记与绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)结合双向液相色谱与串联质谱(2-dimensional liquid chromatography-tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)定量蛋白质组技术鉴定南方型紫花苜蓿根部响应盐胁迫差异表达蛋白,对所获得差异蛋白进行生物信息学分析,筛选出可能耐盐潜在靶标蛋白.同时,选择5个差异表达蛋白进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证.结果表明,共鉴定3 857种定量蛋白,534种差异蛋白(变化倍数≥1.2,P＜0.05),其中表达上调的281种,表达下调的253种.基因本体(Gene Ontology,GO)分子功能提示这些差异性蛋白主要参与转运活性、催化活性和酶调控活性.京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路显著性富集于代谢途径、次生代谢产物生物合成、苯丙氨酸代谢和核糖体等(P＜ 0.05,错误发现率(false discovery rate,FDR)＜ 0.05).成功鉴定的差异蛋白分别涉及到信号传递(8.99％)、抗氧化物(7.68％)、防御(5.61％)、蛋白质合成、加工和降解(14.79％)、能量产生与转运(5.81％)、代谢(26.97％)、膜与胞内运输(5.62％)和细胞结构、分裂和细胞骨架(2.06％)等.差异表达蛋白中与信号传递、抗氧化物和防御等相关的蛋白表达量总体上调,而与代谢和能量产生与转运相关蛋白表达量总体下调.qRT-PCR实验发现,mRNA与蛋白质表达水平并不一致.研究发现组氨酸磷酸转移蛋白、丝裂原活化蛋白激酶、h类硫氧还蛋白、蛋氨酸亚砜还原酶基因、鸟苷二磷酸(guanosine diphosphate, GDP)解离抑制因子、脂质转移蛋白、β-1,2-木糖基转移酶和H2A/H2B/H3/H4核心组蛋白等可能是紫花苜蓿耐盐潜在靶标蛋白.本研究采用iTRAQ结合2D-LC-MS/MS技术,有效地筛选出南方型紫花苜蓿根部响应盐胁迫差异表达蛋白,为深入认识紫花苜蓿盐胁迫的应答分子调控机制奠定了坚实的基础.     

辅助和正常出壳鸭胚肝脏差异蛋白质组学分析

本研究应用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术结合质谱鉴定与生物信息学方法,研究鸭(Anas platyrhynchos domestica)胚胎(鸭胚)孵化过程中出现弱胚现象的分子调控机理,筛选辅助出壳鸭胚肝脏组织差异表达的蛋白.结果表明,共鉴定获得136个差异蛋白,与正常出壳组相比,辅助出壳组有76个蛋白表达上调,60个蛋白表达下调.基因本体(Gene Ontology,GO)注释和通路富集分析表明,这些差异蛋白主要与糖代谢、氧气运输、细胞骨架、应激反应以及氧化还原代谢等生物过程相关,其中辅助出壳组糖酵解通路中的4种酶和细胞呼吸通路中的3种酶表达均显著上调(P＜0.05),参与肌动蛋白丝生物过程的7种蛋白也均表达上调,而参与氧气运输的3种血红蛋白和应激保护的3种热休克蛋白表达显著下调(P＜0.05).利用qRT-PCR检测顺乌头酸酶1(cytoplasmic aconitate hydratase 1,ACO1)、醛缩酶B(fructose-bisphosphate aldolase B,ALDOB)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶1 (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 1,G3P1)和热休克71 kD同源蛋白(heat shock cognate 71 kD protein,HSPA8)4个基因mRNA水平的表达,结果仅ACO1 mRNA和蛋白质水平表达模式一致.结果表明,弱胚可能与糖代谢和呼吸代谢等生物过程变化有关,辅助出壳组能量和代谢率较低.研究结果为更好理解鸭胚孵化过程中出现弱胚现象的分子调控机理提供了蛋白质组学信息.     

猪乳上皮黏蛋白（MUC1）和一组高分子量蛋白遗传多态性的研究

为了从乳特异蛋白水平上研究猪的生物多样性,采用电泳方法对大约克猪(Sus scrofa)乳上皮黏蛋白MUC1和一组高分子量蛋白(HMWP)的多态性进行了检测.结果在42头猪中检测到3种MUC1类型,分子量大于普通牛(Bos taurus),依次为230 kD、217 kD、212 kD,形成5种蛋白表型;检测到4种HMWP类型,分子量依次为123 kD、109 kD、107 kD、101 kD,形成5种蛋白表型.猪乳中的MUC1和HMWP表达量在1～3 d的初乳中明显低于常乳;猪常乳中MUC1的浓度高于牦牛(Bas grunniens)和山羊(Capra hircus)乳.研究结果表明,猪乳MUC1和HMWP均存在多态性,但他们的基因杂合度和有效等位基因数相对较低.     

犬瘟热病毒磷蛋白的表达及抗体制备

犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)是一种急性高度接触性传染病病原,可引起犬(Canis)、猫(Felis)等多种属动物发热、腹泻、肺炎和中枢神经系统紊乱,其磷蛋白(phospho-protein,P)在病毒复制和致病中具有重要作用。本研究根据犬瘟热病毒P蛋白基因(GenBank No.AF164967)设计引物,RT-PCR扩增得到CDV-P基因片段,亚克隆到原核表达载体pET-28(a)上,构建重组原核表达质粒pET-28(a)-CDV-P,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株,异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达重组his-CDV-P蛋白,His-band纯化后获得高纯度重组蛋白,纯化蛋白免疫balb/c小鼠,制备了小鼠抗CDV-P抗体,检测CDV感染细胞内P蛋白的表达和细胞定位,检测不同感染时间细胞内P蛋白的表达。SDS-PAGE电泳结果表明,获得重组蛋白的分子量大小为65 kD,表达的蛋白以包涵体形式存在,占总菌体蛋白的35%以上,纯化后占总蛋白60%以上;Western blot检测表明,小鼠抗CDV-P抗体能特异性识别原核表达产物和病毒感染表达产物,CDV-P在感染细胞内具有两种表现形式(磷酸化和非磷酸化);间接免疫荧光结果显示,该蛋白在胞浆和胞核中都存在;CDV-P在病毒感染的早期和晚期都有表达,随着感染时间延长表达逐渐增加,并且其磷酸化水平也逐渐增加。本研究制备了重组P蛋白和多克隆抗体,检测了P蛋白在感染细胞内的表达和定位,为P蛋白功能和CDV致病机理研究提供基础资料。     

两种剂量重离子辐照绵羊精子差异蛋白质组学研究

为检测和分析0.5和3.0Gy 2种剂量重离子辐照绵羊精子差异表达的蛋白质,用二维凝胶电泳分离精子蛋白,凝胶用硝酸银染色,PDQuest8.0检测分析差异表达蛋白斑点并经高效液相色谱串联离子阱质谱鉴定,结果显示:2种剂量凝胶图谱分析后得到8个共同差异蛋白斑点,鉴定为3种表达上调的蛋白质(谷氧还蛋白1、转录因子AP-2α...     

橘小实蝇蛋白饵剂中氨基酸的HPLC分析及生物测定

采用生物测定的方法比较Prima蛋白饵剂和自行研制蛋白饵剂的引诱效果。结果表明,两者对橘小实蝇(Bactrocera dorsalis(Hendel))引诱效果相当,但水解后的同种蛋白饵剂引诱效果高于水解前。采用柱前衍生高效液相色谱法(Acc Q·Tag法)测定以上两种蛋白饵剂中氨基酸的种类和含量,结果表明,这两种蛋白饵剂中均含有游离氨基酸17种,总氨基酸18种。其中Prima蛋白饵剂总氨基酸含量为52.847 6mg/m L,游离氨基酸含量为5.736 4 mg/m L,多肽含量为4.711 12 mg/m L;自行研制的橘小实蝇蛋白饵剂总氨基酸含量为65.624 3 mg/m L,游离氨基酸含量为6.301 0 mg/m L,多肽含量为59.323 3 mg/m L。通过比较两者氨基酸的差别,为蛋白饵剂的工业化生产质量监控提供方法依据。     

加热法提取叶蛋白的工艺研究

该文对加热法提取苜蓿叶蛋白的工艺进行了深入研究,以提高其蛋白质含量。分别进行了提取液加盐量和絮凝温度对蛋白质含量影响的单因素试验研究,还进行了不同加水、加盐量和ｐＨ值的提取液及不同絮凝温度对蛋白质含量影响的多因素试验研究,得到了提高蛋白质含量的可靠工艺条件。     

Shift of grain protein composition in bread wheat under summer drought events

Climate change bears the risk of more frequent drought stress in the northern hemisphere with more frequent early summer drought events affecting main grain crops. Winter wheat (Triticum aestivum L.) is susceptible for such drought events at the flowering and grain filling stages. After drought, the grain yield decrease of three hybrids was about 20% lower compared to three wheat lines analyzed. Wheat grain proteins are classified into four main components such as albumin and globulin, gliadin, and glutenin. The latter two are closely related to the baking quality of flour and might be affected by drought. However, detailed knowledge about the influence of drought on the synthesis of specific storage protein fractions is scarce. By analyzing the grain protein fractions by means of SDS‐PAGE technique, we detected an increase in grain protein content as well as in HMW and some LMW glutenin sub‐fractions. The glutenin fraction seems to be most variable in gene expression under different environmental scenarios such as drought. However, the protein yield as well as the grain yield may be strongly decreased, which might be not acceptable in practice.     

DELLA蛋白在植物中的研究进展

DELLA蛋白是GRAS蛋白家族中的一个亚家族,在赤霉素(gibberellin,GA)信号转导通路中起负调控作用.DELLA不仅参与了GA信号转导,也参与其他激素如生长素、脱落酸(abscisic acid,ABA)、乙烯、茉莉酸(jasmonic acid,JA)等信号转导和生物合成,在植物生长发育过程中扮演了重要角色.本文综述了DELLA蛋白编码基因的克隆、表达情况,并阐述了DELLA蛋白参与的激素信号转导和与其他因子的互作,以便更好地揭示DELLA信号网络系统及其作用机制.     

马氏珠母贝肌肉提取蛋白热变性动力学

为进一步了解水产蛋白的受热影响规律,更好利用它们的机能特性,该文研究热处理过程中马氏珠母贝肌肉提取蛋白(水溶性蛋白和盐溶性蛋白)的变性动力学,水溶性蛋白和盐溶性蛋白可分别用反应级数为1.1和1.3的方程较好地描述。研究结果表明,在60、70、80、90和100℃条件下水溶性蛋白变性的D值(90%蛋白变性所需时间)分别为33333、12500、3333、1667和769s,而盐溶性蛋白热变性D值为50000、12500、5000、2000和1250s;水溶性蛋白和盐溶性蛋白的Z值(D值降低90%的温度变化)分别为24.1和25.0℃,变性活化能分别为101.83和112.78kJ/mol,盐溶性蛋白比水溶性蛋白更为耐热。研究结果为进一步开发利用马氏珠母贝肌肉蛋白提供参考。     

Effect of sulfur on yield and amino acids of soybeans

Abstract

In a greenhouse study on Morrison Sandy Loam an increase in yield, protein, percent lysine and methionine was observed in soybeans when 10 ppm and 20 ppm of sulfur were applied.     

传统风干牦牛肉加工中肌原纤维蛋白氧化与体外消化性变化

为了评价传统风干牦牛肉在加工过程中肌原纤维蛋白消化率的变化,并探讨蛋白质氧化影响其消化性的潜在机制。在牦牛肉自然风干加工过程中(40 d)采集样本,测定肌原纤维蛋白羰基、巯基、二硫键、二聚酪氨酸、粒径分布、体外消化率及脂质氧化等指标,并分析脂质氧化和蛋白质氧化对蛋白质消化性的影响。结果显示,脂质初级氧化产物(Primary Oxidation Value, POV)、硫代巴比妥酸反应物(Thiobarbituric Acid Reaction Substrates, TBARS)和蛋白质羰基化合物随加工时间的延长而显著增加(P0.05),并且相互间存在极显著相关性(P0.01)。此外,二硫键和二聚酪氨酸含量显著增加(P0.05),这是蛋白质交联的主要形式。蛋白质被胃蛋白酶和胰蛋白酶总的水解率在整个加工过程中降低了19.58%(P0.05),蛋白质的水解率与羰基、二硫键、二聚酪氨酸和蛋白质粒径呈现极显著负相关性(P0.01)。综上所述,在风干牛肉加工期间,脂质氧化产物促进了蛋白质氧化,蛋白质的羰基化和交联导致蛋白酶对蛋白质的水解率降低。研究结果对了解风干牦牛肉传统加工方式和进一步改进加工工艺具有积极的促进作用。     

复合组织蛋白挤压加工工艺的初步研究

该文利用FTS-50型双螺杆食品挤压机，进行了复合组织蛋白挤压加工工艺的研究。试验研究了各个工艺参数对产品组织化的影响，得出了较佳的工艺条件。结果表明：适量的油脂(2%～10%)可以降低主机功耗，并稳定组织化结构；原料的pH为6.5～7.5时，产品的纤维强度较好；淀粉添加量在10%以内，产品的纤维化结构明显而且口感适中；含水率和螺杆转速对挤压产品组织化质量有着复杂的影响；挤压变性段温度提高，产品的组织化程度提高。     

脱脂麦胚蛋白粉的持水能力和蛋白溶解度试验研究

脱脂麦胚蛋白粉是一种优质植物蛋白资源,采用均匀设计方法研究了ｐＨ值（４．０～８．０）、加热温度（２０～７０℃）和加热时间（１０～３０ｍｉｎ）对其持水能力和蛋白溶解度的影响。随着温度的升高,持水能力显著增强,ｐＨ值的影响相对较小,而温度的影响可以忽略。ｐＨ值为４．０,温度为７０℃时,持水能力最强。ｐＨ值对蛋白溶解度的影响显著,时间的影响可以忽略。ｐＨ值为８．０,温度为２０℃时,蛋白溶解度最大。研究结果还表明,脱脂麦胚蛋白粉可作为食品添加剂以改善食品的营养和品质。     

Upregulation of the genes for ferritin,RNase, and DnaJ in leaves of rice plants in response to sulfur deficiency

Microarray analysis was carried out with mRNAs isolated from aerial portions of rice plants subjected to sulfur deficiency. Among the candidate clones regulated by sulfur deficiency, three genes were identified by northern analysis that showed altered levels of mRNA accumulation. Genes similar to those for ferritin, S-like ribonuclease, and DnaJ-like protein were down-, down-, and upregulated by sulfate deficiency, respectively. These genes were found for the first time to be responsive to sulfur nutrition in the present study.