(木奈)基因组DNA的提取与纯化

以(木奈)嫩芽为材料,对Dellaporta等用CTAB制备植物基因组DNA的方法进行改良,结果表明,加入质量分数ω=10% PVPP与材料充分研磨,将提取缓冲液的β-巯基乙醇体积分数降低为1%,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿/异戊醇(24∶ 1)抽提裂解液2次所获得的上相,加入1/10体积的65 ℃的NaCl/CTAB溶液混匀,再用氯仿/异戊醇(24∶ 1)连续抽提2次,并在DNA粗提液中加入适量高浓度NaCl和无水乙醇沉淀DNA,可以有效地去除多糖的干扰,获得比较纯净的DNA样品;PCR特异性扩增的结果表明,以改良法的DNA为模板可获得PPO基因保守区约600～800 bp特异条带,且扩增条带较亮、无引物二聚体出现.     

樟树干叶DNA提取方法的研究

利用硅胶干燥的樟树幼叶为材料,用改良的CTAB法进行DNA提取实验,并以樟树新鲜嫩叶为对比。结果表明,加入质量分数为3%可溶性PVP粉与材料充分研磨,在提取缓冲液中加入体积分数为2%的β-巯基乙醇,能有效地去除材料中的多酚类物质;用氯仿/异戊醇(24∶1)提取裂解液2次所获得的上清,加入1/20体积5 mol/L的NaC l,并用无水乙醇沉淀DNA,可以有效地去除多糖的干扰,所提取的DNA产率和纯度均较高。尽管干叶提取的DNA的平均产率(373 ug/g)和纯度(A260/A280比值为1.54~1.92)比鲜叶提取的DNA的平均产率(467 ug/g)和纯度(A260/A280比值为1.6~1.9)略低,但两者的RAPD-PCR扩增的条带都清晰、稳定、明亮,完整性好。     

麻疯树(Jatropha curcas L.)种子总DNA提取方法的建立和优化

用种子提取DNA可省却培育幼苗过程而加快实验进度,为此建立了麻疯树(Jatropha curcas L.)种子DNA提取方法.针对麻疯树种子富含蛋白质、多酚及多糖等次生物质的特点,基于CTAB法进行优化,在研磨种子时加入抗氧化剂PVP去除多酚,接着用核分离缓冲液去除多糖,再通过酚-氯仿-异戊醇(体积比=25:24:1)抽提去除蛋白质.所提取的麻疯树种子总DNA浓度和质量均较高,经琼脂糖凝胶电泳和ISSR-PCR扩增得到了非常清晰的DNA条带.     

改良CTAB法对山茶属植物基因组DNA提取的比较研究

山茶属植物体内酚类、多糖等次生代谢物质含量较高,获得高纯度的总DNA比较困难。为筛选出适宜山茶属植物基因组DNA的较优提取方法,并研究不同材料处理方法的差异,采用四因素三水平的正交设计,对山茶属植物基因组DNA的提取方法 CTAB法进行优化。最后确定较优提取方法为:老叶用CTAB-free去除多糖并防止酚氧化,用2%CTAB、2%PVP、24∶1抽提2次;嫩叶用2×CTAB去除多糖并防止酚氧化,用1%CTAB、2%PVP、24∶1抽提1次,并用ISSR-PCR检测。结果显示采用优化方案提取的DNA质量更好,能较好地溶于TE,可用于ISSR-PCR扩增,且扩增出清晰的条带。     

用于SSR分析的大豆干种子DNA提取条件的优化

[目的]探讨适于SSR分析的大豆干种子DNA提取的最佳方法。[方法]以2个大豆品种的干种子为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取大豆基因组DNA,用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定其DNA在A230、A260和A280下的吸光值,根据A260／A230和A260／A280的比值检测DNA的纯度和浓度,并分别以两种DNA为模版进行SSR—PCR扩增。[结果]相同DNA提取条件下,SDS法提取DNA样品的纯度和浓度均高于CTAB法,SDS终浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时所提取大豆种子DNA的纯度及浓度最高,其DNA的0D260／0D280值为1．86,SDS法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足SSR扩增模板的需求。[结论]SDS浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时提取大豆干种子DNA的浓度和纯度都较高,可以满足后续的各种分子生物学操作的要求。     

中药天冬叶片DNA的提取方法比较研究

为了能利用ISSR技术在分子水平上研究贵州天冬种质资源的遗传多样性,对天冬叶片DNA的提取方法进行了研究.结果表明:提取液中使用CTAB比SDS所得DNA质量好.研磨时加氯仿可以有效抑制DNA酶的活性和去除蛋白质杂质;用氯仿/异戊醇(24/1)抽提1次可获得质量好、浓度高的DNA,可以满足ISSR分析的需要.     

黄瓜DNA的提取研究

报道提取黄瓜DNA的新方法以满足制备黄瓜DNA传感器之需要．提取黄瓜DNA的最优条件：细胞提取液为4．0mL，饱和KCl溶液为1．0mL，0．6倍样液体积的酚／氯仿／异戊醇溶液，0．6倍体积的氯仿／异戊醇溶液，0．55倍体积的异丙醇，黄瓜DNA的得率为0．36mg／g．     

改良CTAB法提取鸢尾属植物DNA

鸢尾属植物中酚类、多糖含量较高,DNA提取较为困难。在前人工作基础上,改进了提取植物DNA的CTAB方法,通过延长水浴时间、氯仿/异戊醇(24∶1)2次抽提、适当延长氯仿/异戊醇与提取液接触时间等一系列改进,简化了提取步骤,大大缩短了提取时间。所提取的DNA纯度高,可满足以PCR扩增为基础的试验需要。     

柰嫩芽总RNA的提取与纯化

以嫩芽为材料，对Trizol法进行改进提取总RNA，试验结果表明，加入10％PVPP与材料共研磨，并在Trizol提取液中加入1％β-巯基乙醇，可以完全排除酚类物质、色素等杂质的干扰；采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖、在裂解液抽提的上相中加入终浓度为3mol／L LiCl沉淀RNA、在RNA的粗提液中加入适量的3mol／LNaAc(pH5．2)和低浓度的无水乙醇沉淀多糖等方法相结合，可以有效地去除多糖的干扰，获得纯净、完整的RNA样品，用它为模板进行RT-PCR反应，获得PPO基因保守区约600～800bp的cDNA条带；而单独采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖的方法，不能将样品中的多糖去除干净，这些残留的多糖会抑制逆转录酶的活性，导致逆转录反应的失败。     

小麦DNA提取方法的比较

以小麦幼叶为材料,采用CTAB法1、CTAB法2、CTAB法3和NaOH法提取小麦基因组DNA,通过对小麦DNA提取方法的比较,为满足大批量材料进行SSR分子标记的检测寻找最优方法.结果表明,NaOH法提取DNA用时短、方法简单,但常有DNA样品扩增不出PCR产物的情况;CTAB法提取的DNA质量较高,而且CTAB法3省略了65℃温浴,并将两次氯仿:异戊醇抽提改为1次抽提,既缩短了试验时间和降低了成本,提取的DNA又可以满足进行分子标记检测的需要.     

A Genetic Linkage Map of Brassica carmpestris L.ssp.pekinensis (syn. B.rapa L.ssp.pekinensis )

A molecular genetic map of Chinese cabbage was constructed with a 102 recombinant inbred(RI) population from a cross of two cultivated Chinese cabbage lines 177 and 276, using AFLP and RAPDmarkers. 352 markers including 265 AFLP markers and 87 RAPD markers were integrated into 17 linkagegroups. It covered a total of 2 665.7 cM with an average interval of 7.6 cM. AFLP marker is efficient formap construction while it easily forms clusters to cause big gaps in map. A total of 13. 92% abnormal segrega-tion markers distributed in the map. The molecular genetic map is fundamental for gene localization, compar-ative genomics, and QTL mapping of important agronomic traits.     

壳聚糖对番茄枯萎病菌的拮抗作用

采用含毒介质法研究了壳聚糖对番茄枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用.结果表明,浓度大于1 mg/mL的壳聚糖能明显抑制菌丝生长,各设定浓度均可在一定程度上抑制孢子萌发,而且抑制效果随着处理浓度的增大而增强;浓度大于0.1 mg/mL的壳聚糖处理可诱导初生菌丝发生肿胀、分枝增多且茵体分隔增加及体细胞变短等形态学变化.壳聚糖的抑菌作用机制与其增加茵丝细胞膜的透性有关.     

栽培大豆、野生大豆和半野生大豆酯酶同工酶的研究

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分析了栽培大豆、野生大豆和半野生大豆的酯酶同工酶．结果表明，栽培大豆幼苗期的酯酶同工酶共出现了１７条酶带。栽培大豆和野生大豆既有共同的酶带，又有各自独特的酶带，是亲缘关系较近的两个种。半野生大豆有类似野生大豆的酶谱，表现了野生种的特点．不同进化类型的大豆酯酶同工酶有明显不同。随着进化程度增高，酶带数目有增多的趋势．研究表明，大豆幼苗酯酶同工酶酶谱比较稳定，酶带明确，具有较为明显的种的专一性，可以做为大豆分类学和研究大豆进化关系的一个生化指标。     

广丰千金薯和铁棍山药脱毒微型块茎的转录组分析

为探究广丰千金薯和铁棍山药在分子水平的差异,以广丰千金薯(QJS)和铁棍山药(TGSY)试管苗的微型块茎为试验材料进行转录组分析。结果表明:QJS组和TGSY组样本间相关系数为0.42。QJS组和TGSY组表达量FPKM的对数值在0~1.5,表达量密度在0~1.0。与TGSY组相比,QJS组有4 765个基因下调,有5 112个基因上调。QJS组和TGSY组表达的共有基因有25 207个,QJS组单独表达的基因有5 261个,TGSY组单独表达的基因有3 571个。QJS组和TGSY组共发现611 498个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点和12 056个简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)。与TGSY组相比,QJS组的淀粉合成酶3、α-淀粉酶3、β-淀粉酶、类黄酮3'-单加氧酶、类黄酮3'-羟化酶、花青素合酶等基因上调,而颗粒结合淀粉合酶2、蔗糖合酶1、扩展蛋白2和苯丙氨酸解氨酶等基因下调。这可能是广丰千金薯微型块茎肉质绵密粉嫩、软糯爽口、胁迫防御、食后易胀的内在原因。结果可以为广丰千金薯的品种鉴定和分子育种提供参考。     

谢君魔芋染色体数目的观察研究

谢君魔芋(AmorphophallusxieiH.Li,F.GaoetZ.L.Dao,sp.nov)是近年来新发现的极具生产潜力的魔芋新种,其染色体数目目前尚无报道。对谢君魔芋染色体数目采用常规压片法进行了观察研究,表明谢君魔芋染色体数目为26条。     

金铁锁地膜覆盖栽培研究

为了研究金铁锁应用地膜覆盖栽培的效果,笔者采用白色农膜覆盖、黑色农膜覆盖、不覆盖任何农膜(CK)研究了金铁锁种子直播栽培的效果。结果表明：用地膜覆盖栽培比不盖膜栽培第1 年可明显提高保苗率,增加根重;第2 年保苗率明显降低,根重无明显差异;第3 年保苗率和根重都明显降低。种植第1年可用农膜覆盖,种植第2、第3年不能再盖膜。3年连续盖膜栽培可导致金铁锁最终产量降低。     

乌天麻有性繁殖块茎发育性状-产量-天麻素相关性研究

从四川天麻主产区采集不同发育阶段的乌天麻块茎,测定其性状、产量和天麻素含量,并建立鸟天麻不同类型块茎性状-产量-天麻素的相关回归方程。结果表明,与乌天麻块茎产量和天麻素积累呈正相关的因素主要有块茎干重（y2）、鲜块茎长度（x1）、鲜块茎直径（x3）、鲜块茎系数（y6）、鲜块茎周长（x2）,呈负相关的因素主要为块茎数（x5）。     

冬枣、临猗梨枣果实发育期K、Ca、Fe、Zn含量变化

对冬枣和临猗梨枣果实发育期K、Ca、Fe、Zn含量的变化规律进行研究,进一步明确矿质元素对枣果实品质的影响,旨在为枣树施肥和品质调控提供依据,结果表明:果实发育期间果实内4种矿质元素含量大小顺序为K>Ca>Fe>Zn;K在整个枣果的发育过程中维持较高水平,在开花坐果期含量最高,之后缓慢下降;Ca、Fe、Zn含量在果实发育前期较高,随果实发育呈下降的趋势。     

金镶玉竹、黄秆乌哺鸡竹和黄纹竹在北京地区冬季的耐寒生理和叶片结构比较

对移栽到北京6 a的金镶玉竹、黄秆乌哺鸡竹和黄纹竹冬季越冬期的叶片结构、光合荧光特性、相对电导率等进行研究.结果表明:(1)3个竹种叶片上表皮无显著变化,下表皮黄秆乌哺鸡竹和黄纹竹的机械损伤程度大于金镶玉竹,黄秆乌哺鸡竹和黄纹竹气孔器宽度下降幅度显著小于金镶玉竹,黄纹竹叶片致密度、气孔密度下降幅度最大;(2)黄秆乌哺鸡竹净光合速率(P_n)、蒸腾速率(T_r)和气孔导度(G_s)变化幅度大于金镶玉竹,而黄纹竹的却小于金镶玉竹,F_v/F_m值降幅表现为金镶玉竹黄秆乌哺鸡竹黄纹竹;(3)金镶玉竹和黄秆乌哺鸡竹叶片的相对电导率变化幅度差异不显著,黄纹竹的叶片和鞭根相对电导率的变化幅度差异显著.     

华南虎、金钱豹、云豹血清蛋白和LDH同工酶的电泳研究

本文报道了华南虎、金钱豹、云豹的血清蛋白和LDH同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱和扫描曲线。分析结果表明:华南虎、金钱豹和云豹的血清蛋白电泳可分辨的区带数分别为13、14、13。在各区带的相对迁移率及含量方面显示出动物体蛋白在物种间存在着差异。3种动物血清LDH同工酶谱带均为5条,但仍各具特征性电泳图谱,且LDH同工酶表型分析结果提示,华南虎与金钱豹的电泳图谱较为接近。