鸽痘病毒DNA限制性内切酶分析

利用蔗糖密度梯度离心纯化鸽痘病毒，以蛋白酶K法抽提病毒DNA，提取到分子量病毒DN、病毒DN经EcoRI、SalI,PstI酶切后各产生17、8和13个片段，病毒DNA的大小约为289．32kb。     

影响鸡新城疫和减蛋综合征血凝试验因素的探讨

以鸡新城疫病毒和减蛋综合征病毒的鸡胚和鸭胚尿囊液为被检材料，针对红细胞浓度，稀释液种类和pH值等因素进行试管法，V型和U型96孔微板法的血球凝集试验。结果表明：鸡新城疫病毒以pH值7．0的生理盐水为稀释液，红细胞浓度为0．75％时V型板法血凝价最高；微量法比试管法反应快速、更加敏感；出现反应时间V型板法早于U型板法。     

新型鸭瘟病毒的提纯方法研究

将分离的新型鸭瘟病毒(暂定名)毒种接种12日龄番鸭胚传代，收集病毒尿囊液，用不同方法将病毒粗提、纯化。通过病毒蛋白含量测定和病毒纯度鉴定，证实以50%饱和度(NH4)2SO4法或10％聚乙二醇6000沉淀法粗提，再经葡聚糖G-200层析纯化，可获得纯度较高的病毒。     

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原，制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体，经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体，兔抗AIVIgG为第二抗体，建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL，兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL；对已知的阳性样品，用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上，且能检出其它亚型的禽流感病毒；与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应，说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测，结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。     

鸡减蛋综合征病毒分离株AA－2基因组Hind Ⅲ酶切部分片段的分子克隆

以非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），经差速离心法纯化，电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。以蛋白酶Ｋ法抽提病毒基因组，琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量约３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。ＨｉｎｄⅢ酶切ＥＤＳＶＤＮＡ可见１０条片段，以ｐＵＣ１９质粒为载体，采用鸟枪法对病毒基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段进行分子克隆，获得１７个重组质粒，通过酶切、斑点杂交鉴定，证实已经成功地克隆到ＥＤＳＶ的５．２４ｋｂ、２．０２ｋｂ、１．６５ｋｂ、１．４７ｋｂ、１．４１ｋｂ等５个ＤＮＡ片段。     

免疫鸡羽毛根中火鸡疱疹病毒的分离与鉴定

用常规剂量的商用火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）冻干苗经腹腔免疫１日龄非免疫鸡，于第３周采集羽毛根，分别采取直接法和间接法（即经过滤获取脱细胞的游离物）接种次代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），以进行病毒的分离。结果显示，在免疫后第３、４、５、６周，２种方法都分离到病毒，第７周仅直接法分离到病毒，而第８周２种方法都没有分离到。根据分离到病毒的细胞病变（ＣＰＥ）特征，结合地高辛标记的Ⅰ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ－１）核酸探针检测结果，表明ＨＶＴ免疫鸡羽毛根中含有可脱离细胞的、具有感染性的疫苗株ＨＶＴ粒子，且其可检出时间具有阶段性。     

口蹄疫病毒结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位的预测

以口蹄疫病毒OLZ02株基因组序列为材料，采用Garnier—Robson法、Chou-Fasman法和Karplus—Schulz法预测了其结构蛋白的二级结构，用Kyte-Doolittle法分析了各结构蛋白的亲水性，Emini法预测了各结构蛋白的表面可能性，Jameson—Wolf法预测了各蛋白的抗原指数，综合评价了口蹄疫病毒结构蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，VPl蛋白含有的B细胞优势抗原表位最多，是研制口蹄疫基因工程疫苗的首选免疫原，但其他结构蛋白也含有少量的B细胞抗原表位，有的甚至有可能成为优势抗原表位。     

CpG ODN对猪繁殖障碍与呼吸道综合征疫苗免疫影响的研究

以猪繁殖障碍与呼吸道综合征（蓝耳病．PRRS）病毒为模式病毒．以CpG ODN联合猪繁殖障碍与呼吸道综合征灭活疫苗免疫仔猪．通过ELISA法检测猪血清中抗猪繁殖障碍与呼吸道综合征病毒抗体水平，并用MTT法检测猪淋巴细胞白介素-2（IL-2）诱生活性以及淋巴细胞增殖指数（SI）．试验结果表明：CpG ODN能显著提高仔猪的特异性抗体滴度、淋巴细胞IL-2诱生活性以及淋巴细胞增殖反直．证明CpG ODN能显著增强猪对常规灭活病毒疫苗的免疫应答能力。     

传染性法氏囊病病毒（IBDV）人工感染SPF鸡的病理学观察

取３２０只３０～４０Ｈ龄ＳＰＦ鸡，经滴鼻和点眼接种传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），接种后２４～７２ｈ出现死亡，病死率５１．２５％，死亡鸡剖检变化主要为法氏囊肿胀、出血，甚至呈紫葡萄样，脾脏肿大、出血，骨骼肌出血，腺胃肌胃交界处出血。病理组织学变化，呈现以法氏囊淋巴滤泡内髓质淋巴细胞坏死为主的特征性病变，并可在巨噬细胞浆内发现病毒包涵体。电镜观察，在法氏囊内淋巴细胞、异染性细胞、巨噬细胞浆内，见大量晶格状排列的病毒粒子和包涵体，表明ＩＢＤＶ首先损害法氏囊淋巴滤泡髓质内未成熟的Ｂ淋巴细胞，病毒在淋巴细胞内以包涵体方式增殖。     

利用PCR检测鸭瘟病毒

参照文献，设计和合成了1对引物，用这对引物，以标准毒DPVF34 DNA为模板，经PCR扩增出1个特异的DNA片段，经序列测定，该DNA片段由420bp组成。与文献报道的序列比较，该片段为鸭温病毒UL6基因DNA的一部分，与美国毒株Lake Andes(LA)的同源性达99％，用该PCR方法扩增小鹅瘟病毒，细小病毒和禽巴氏杆菌，结果为阴性，以该PCR方法检测6份送检病料，5份为阳性，检出率与病毒的分离一致。另外，该方法检测DPV DNA的敏感性达到1pg水平。     

美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立

参照美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）M基因序列，设计引物和探针，并建立其荧光RT-PCR检测方法，以检测严重危害我国养猪业的此型PRRSV。该法能检测到1 TCID50的PRRSV。用此法检测猪瘟病毒、乙脑病毒、伪狂犬病毒、马动脉炎病毒、圆环病毒Ⅱ型和MARC145细胞的RNA，结果均为阴性。对126份临床样品进行检测应用，检测结果（7份阳性，119份阴性）与病毒分离完全符合。此法中的阳性对照为体外转录的dsRNA，具有高度的稳定性，解决了此类检测方法所用的RNA阳性对照所普遍存在的易于降解的难题。     

鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗病毒释放工艺探索

在鸡痘鹌鹑化弱毒细胞苗生产中，一般将收获的细胞培养物反复冻融释放细胞结合病毒，然后进行配苗冻干，为了确定合适的冻融次数和测定冻融对病毒的影响，我们以超声波裂解的细胞毒液为对照，通过对不同处理方法的原苗冻干前后毒价的多重比较，发现冻融对鸡痘病毒影响较大，因此试验确立了新的释放病毒方法（即超声波裂解法），现总结如下。     

单抗捕获ELISA检测PRRSV抗体的方法的建立

以国内刚刚研制出的ＰＲＲＳＶ单克隆抗体为基础，建立了检测ＰＲＲＳ病毒抗体的单克隆抗体辅获抗原的ＥＬＩＳＡ法，其单抗包被浓度为１．１６μｇ／ｍＬ，粗提病毒反应浓度为１６．５０μｇ／ｍＬ，血清稀释度为１：４０。经与中和试验以及进口ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，证明该法敏感性高，特异性良好，是一种有应用前景的方法。     

澳大利亚研制出新的低成本口蹄疫检测方法

英联邦科学和工业研究组织（CSIRO）澳大利亚动物卫生实验室的研制出一种新的低成本的口蹄疫检测方法，这种方法使用非传染性病毒材料，可以区分口蹄疫病毒的所有7的毒株和区分感染动物与接种动物。该法使用重组抗体区分感染动物与接种动物，重组抗体可以以低成本大量生产。     

单克隆抗体捕捉法ELISA检测DHV抗体的研究

以ＤＨＶ单克隆抗体包被反应板，以粗提病毒作为抗原，建立了检测ＤＨＶ抗体的单抗捕捉法ＥＬＩＳＡ，经与间接ＥＬＩＳＡ作平行试验，二者检测符合率为１００％。     

单克隆抗体捕捉法ELISA检测DHV抗体的研究

以ＤＨＶ单克隆抗体包被反应板，以粗提病毒作为抗原，建立了检测ＤＨＶ抗体的单抗捕捉法ＥＬＩＳＡ，经与间接ＥＬＩＳＡ作平行试验，二者检测符合率为１００％。     

抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用

鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化，电镜观察。以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６、９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞。特异性试验表明它们与鸡的传染性支气管炎、痘病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得的三株单抗建立单抗夹心－ＥＬＩＳＡ法基础上，首次建立了快速检测喉气管炎感染的ＥＬＩＳＡ试剂盒，对ＩＬＴＶ纯病毒的最小检出量为３１．０ｎｇ／ｍｌ病毒蛋白。以该试剂盒对黑龙江省哈尔滨地区、辽宁省沈阳、大连地区、山东省济南及上海等地６５６５份喉部株拭样品进行检测，共检出阳性１１５４头份。对部分ＥＬＩＳＡ阳性和阴性样品进行平行病毒分离，结果阳性符合率为１００％（１１２／１１２），阴性符合率为９５％（３８／４０）。研究表明，该试剂盒特异性强，重复性好。该方法的建立为鸡群疫病监测，免疫鸡群抗体水平检测提供了新的可靠方法。     

抗鸡传染性腺胃炎酶标抗体的制备和应用

在前期从患病鸡腺胃内分离到呼肠孤病毒的基础上，以该病毒为免疫原对兔进行免疫制备高免血清，分离纯化IgG，进行辣根过氧化物酶（HRP）标记，并用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测，结果表明制备的抗鸡传染性腺胃炎呼肠孤病毒的酶标抗体检测传染性腺胃炎特异性强、灵敏度高、较简便。     

鸡痘病毒基因组酶切片段的克隆及酶谱分析

以鸡胚成纤维细胞培养的中国鸡痘病毒鹌鹑化弱毒株，经蔗糖密度梯度离心法纯化，电镜观察示所得病毒为典型鸡瘟病毒颗粒。以蛋白酶Ｋ法抽提病毒基因组，电泳结果为典型的大分子量ＤＮＡ特征，经ＥｃｏＲＩ或ＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄⅢ酶切，插入ｐＵＣ１９载体相应位点，经转化、筛选、鉴定后得相应酶切片段的基因组文库。对其中２３个克隆片段用双酶法进行酶谱分析，绘制出了相应克隆片段的酶切图谱，每个克隆片段中均有１～６个可以利用的插入位点。基因组文库的构建及部分克隆片段的酶谱分析为进一步筛选病毒复制非必需片段以构建重组疫苗表达载体乃至鸡痘病毒分子生物学的研究打下了坚实的物质基础。     

抗鸡传染性喉气管炎病毒单克隆抗体的研制及在诊断上的应用

鸡传染性喉气管炎王岗株病毒（ＩＬＴＶ）经ＳＰＦ鸡肾细胞增殖，差速离心及蔗糖密度梯度离心纯化；电镜观察，以纯化的病毒４次免疫ＢＡＬＢ／ｃ鼠，按常规方法进行细胞融合，采用有限稀释法克隆，经ＥＬＩＳＡ筛选出３株（８Ｅ２、１３Ｇ６，９Ｃ４）分泌抗ＩＬＴＶ特异ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞，特异性试验表明经闪与鸡的传染性支气管炎，痘病毒，新城疫病毒马立克氏病病毒，白血病病毒及鸡肾细胞均无交叉反应。在获得三株单抗建立单