不同浓度Ca2+对塔里木马鹿冻融精子体外获能及蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同浓度Ca²⁺对马鹿精子体外获能的影响,本研究以塔里木马鹿冻融精子为试验材料,将精子分别悬浮于含不同浓度Ca²⁺（0、1.1、2.2、3.5、5.0 mmol/L）的台氏液（sp-TALP液）中,在培养0、2、4 h时,采用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用SDS-PAGE分离精子膜蛋白,进行免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,Ca²⁺浓度为1.1、2.2 mmol/L有利于精子活力的维持（P<0.05）,精子获能率极显著高于对照组和高浓度组（3.5、5.0 mmol/L;P<0.01）,精子存活时间最长（P<0.01）,但高浓度Ca²⁺（5.0 mmol/L）对精子活力具有显著抑制作用（P<0.05）,精子获能率极显著低于低浓度组（P<0.01）,精子存活时间最短（P<0.01）;另外,随着培养时间的推移精子发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平有所不同,培养2、4 h时,1.1 mmol/L组精子蛋白磷酸化水平极显著高于其他各组（P<0.01）,高浓度Ca²⁺（3.5、5.0 mmol/L）组酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平极显著下降（P<0.01）。结果表明,塔里木马鹿精子体外获能所需的适宜Ca²⁺浓度为1.1 mmol/L,且获能过程中Ca²⁺的存在是必要的。     

不同浓度Ca~(2+)对塔里木马鹿冻融精子体外获能及蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同浓度Ca~(2+)对马鹿精子体外获能的影响,本研究以塔里木马鹿冻融精子为试验材料,将精子分别悬浮于含不同浓度Ca~(2+)(0、1.1、2.2、3.5、5.0mmol/L)的台氏液(sp-TALP液)中,在培养0、2、4h时,采用金霉素(CTC)染色法评价精子获能状态,采用SDS-PAGE分离精子膜蛋白,进行免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平。结果表明,Ca~(2+)浓度为1.1、2.2mmol/L有利于精子活力的维持(P0.05),精子获能率极显著高于对照组和高浓度组(3.5、5.0mmol/L;P0.01),精子存活时间最长(P0.01),但高浓度Ca~(2+)(5.0mmol/L)对精子活力具有显著抑制作用(P0.05),精子获能率极显著低于低浓度组(P0.01),精子存活时间最短(P0.01);另外,随着培养时间的推移精子发生酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平有所不同,培养2、4h时,1.1mmol/L组精子蛋白磷酸化水平极显著高于其他各组(P0.01),高浓度Ca~(2+)(3.5、5.0mmol/L)组酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平极显著下降(P0.01)。结果表明,塔里木马鹿精子体外获能所需的适宜Ca~(2+)浓度为1.1mmol/L,且获能过程中Ca~(2+)的存在是必要的。     

猪精子获能前后细胞亚组分蛋白分离及酪氨酸磷酸化蛋白的鉴定

本研究对猪精子获能前后细胞亚组分蛋白进行分离以及对酪氨酸磷酸化蛋白进行鉴定,旨在为哺乳动物精子受精生物学研究奠定理论基础。利用动物精子体外获能培养、细胞亚组分分离技术及蛋白免疫印迹的方法,分离猪精子细胞亚组分蛋白及酪氨酸磷酸化蛋白鉴定。结果表明,猪精子经过获能培养后各项活力指标均得到显著提高,且与精子蛋白发生酪氨酸磷酸化修饰密切相关;获能精子中126、108、79ku的高分子量蛋白磷酸化程度明显高于未获能精子;分子质量约为25、47、50ku的膜蛋白及47ku胞浆蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中25、47ku的膜蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05);分子量约为23、37、42～50ku的核蛋白发生酪氨酸磷酸化,获能精子中23ku的核蛋白酪氨酸磷酸化程度显著高于未获能精子(P<0.05)。结果提示,猪精子细胞不同亚组分中,发生酪氨酸磷酸化修饰的蛋白以膜蛋白及核蛋白为主,同时有少量的胞浆蛋白。     

冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂对梅花鹿冻融精子质量的影响

【目的】 探究在冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂代替10%卵黄对梅花鹿精液冷冻保存效果的影响,为梅花鹿人工授精体系的完善提供参考。【方法】 采用电刺激法采集梅花鹿精液,以精液冷冻稀释液中分别添加1%、2%、3%、4%和5%大豆卵磷脂代替10%卵黄作为试验组,添加20%卵黄作为对照组,分别进行各组精液冷冻保存。5 d后,进行精液解冻,检测解冻后各组精子的活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、存活时间,筛选合适浓度的大豆卵磷脂。选取4~5岁健康雌性梅花鹿,肌肉注射300 IU孕马血清促性腺激素（PMSG）和0.4 mg氯前列醇钠进行同期发情处理,发情后第20 h用20%卵黄组与筛选出的大豆卵磷脂组冻精进行人工输精,输精后30 d使用B超检测仪检测妊娠情况,统计妊娠率。【结果】 与对照组相比,1%大豆卵磷脂组冻融后的精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率及线粒体活性均显著提高（P<0.05）;随着稀释液中大豆卵磷脂浓度的增加,其冻融后精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率以及线粒体活性呈下降趋势,精子存活时间也随浓度的增加而减少。1%大豆卵磷脂组冻融精子人工授精梅花鹿的妊娠率为61.11%,高于对照组、2%和3%大豆卵磷脂组,但差异均不显著（P>0.05）。【结论】 在梅花鹿精子冷冻稀释液中添加1%大豆卵磷脂替代10%卵黄,能有效提高梅花鹿冻融精子的质量,为进一步筛选新型梅花鹿精液冷冻稀释液提供理论基础。     

不同稀释液及绵羊品种对冷冻精液保存效果的影响

本文利用计算机精子辅助分析仪和姬姆萨染色方法评价无卵黄稀释液OPTIXcell和有卵黄稀释液Optidyl冷冻保存湖羊、白头杜泊、黑头杜泊和澳洲白绵羊精液的效果。选用湖羊、白头杜泊、黑头杜泊和澳洲白绵羊的种公羊各5只,通过假阴道方法采集精液,合格精液分别用OPTIXcell和Optidyl稀释液稀释并冷冻。结果表明:Optidyl冷冻保存白头杜泊羊和澳洲白绵羊精液的精子在活精子比例(MR)、直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、曲线轨迹的直线性(LIN)、空间平均路径的直线性(STR)和尾部鞭打频率(BCF)上优于OPTIXcell,同样的,湖羊在MR、曲线速度(VCL)、精子头侧摆幅度(ALH)、VSL和VAP上高于OPTIXcell无卵黄稀释液,而黑头杜泊羊使用OPTIXcell在MR、VSL、VCL、ALH和BCF的平均值上效果更好。无论哪个品种使用Optidyl有卵黄稀释液,其绵羊精子畸形率的比例都低于使用OPTIXcell无卵黄稀释液。综上,冷冻保存湖羊、白头杜泊羊、澳洲白绵羊精液适合采用Optidyl,而黑头杜泊羊精液适合采用OPTIXcell。     

陕北白绒山羊精液冷冻稀释液配方优化

为筛选陕北白绒山羊精液冷冻保存稀释液中最适的甘油及卵黄浓度,试验以三羟甲基氨基甲烷(Tris)6.057 0 g,蔗糖5.134 6 g,果糖1.500 0 g,柠檬酸钠3.318 6 g,青霉素10万IU,双蒸水200 m L配制成基础液,采用双因素正交试验研究不同浓度甘油、卵黄对精液冷冻保存的影响;采用一步稀释法冷冻保存陕北白绒山羊精液,复苏后检测活率、畸形率等确定精液冷冻稀释液最佳配方。结果表明:最佳冷冻稀释液配方为基础液80.5%+甘油6%+卵黄13.5%,精液冷冻、复苏后精子活率达到(37.2±0.5)%,精子畸形率为(11.2±0.5)%,质膜完整率为(64.2±0.5)%,均优于其他组,冷冻效果达到最佳,是保存山羊精液的冷冻稀释液最佳配方。     

添加BAM15对英纯血马精液低温及冷冻保存的影响

为研究在马精液稀释液中添加BAM15(一种新型线粒体解耦联剂)对英纯血马精液低温及冷冻保存效果的影响,并探讨低温及冷冻保存马精液时添加BAM15的最适浓度,选取6匹英纯血种公马作为试验动物,以新疆畜牧科学院研发的FZS马鲜精稀释液及冷冻保护液作为基础稀释液(对照组),添加不同浓度BAM15(0、0.05、0.15、0.45、1.50μmol/L)配制低温保存及冷冻保存稀释液,将浓缩处理后的马精液分别置于上述稀释液中进行低温保存及冷冻保存。检测低温保存0、24、48及72 h四个时间段和冻融后的精子运动参数,评价不同浓度的BAM15对马精液低温及冷冻保存效果的影响。结果表明:随着保存时间的延长,在马精液稀释液中添加1.50μmol/L的BAM15对英纯血马的精液低温保存具有最好的效果,可以显著增加精子活力;但在冷冻保存中,添加BAM15与对照组之间相比无明显差异。     

解冻稀释液中添加精浆对冻融猪精子品质的影响

【目的】 探究冷冻前添加热休克蛋白A8(heat shock protein A8, HSPA8)和解冻后添加不同浓度精浆(seminal plasma, SP)对冻融猪精子的影响。【方法】 采用手握法采集长白猪精液, 添加0.5 μg/mL HSPA8到猪精液冷冻保护剂中进行细管分装, 投入液氮中保存3周后进行解冻, 解冻后添加不同浓度精浆(0、10%、30%和50%), 对冻融后长白猪精子的运动能力、质膜完整性、顶体完整性、细胞凋亡、线粒体膜电位、鱼精蛋白缺乏及体外获能水平等进行评估。【结果】 与对照组相比(无HSPA8和精浆), 添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)的精子直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)、平均路径速度(VAP)和前向性运动(STR)均显著提升(P<0.05), 精子直线性运动(LIN)和运动的摆动性(WOB)均无显著差异(P>0.05);精子质量参数中活力、质膜完整性和顶体完整性均显著升高(P<0.05), 细胞凋亡水平与线粒体膜电位均显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。之后在解冻液中添加不同浓度的精浆, 与添加0.5 μg/mL HSPA8处理组(无精浆)相比, 精浆添加量达到50%时, 精子VSL、VCL、VAP、LIN、STR和WOB均显著提升(P<0.05);精子活力、质膜完整性、顶体完整性和线粒体膜电位均显著提高(P<0.05), 细胞凋亡水平显著降低(P<0.05);精子鱼精蛋白缺失率显著降低(P<0.05);精子蛋白酪氨酸磷酸化水平显著提高(P<0.05)。【结论】 在冷冻基础液中添加0.5 μg/mL HSPA8和解冻稀释液中添加50%精浆联合使用可以有效改善冻融精子质量, 将会对猪精液的冷冻保存及商业化生产提供一定的参考。     

保存温度和不同种类稀释液对猪精液品质的影响

猪精液在室温保存时,含庆大霉素的稀释液保存效果优于含青、链霉素的稀释液,两种稀释液在保存72h时,精子活率、顶体完整率、GOT和LDH活性以及存活指数差异极显著(P<0.01).低温保存时,含蜂蜜和卵黄的稀释液对防精子冷刺激、维持精子活率的效果比含葡萄糖、奶粉的稀释液理想.在冷冻保存条件下,以含2%甘油的稀释液保存效果最佳.液态保存(室温、低温)的猪精液,LDH活性随精子活率下降而下降;pH值则都呈先上升后下降的变化趋势.室温保存主要是引起精子顶体脊膨大和保存后期的顶体前端膨大;低温保存主要引起顶体前部膨大和保存后期的少数顶体脱落;冷冻保存主要是造成顶体的膨大程度加大和顶体脱落.3种保存条件都造成精子线粒体透性增强.液态保存和冷冻保存精液的精清GOT活性与顶体完整率无显著相关性(P>0.05).     

陶赛特羊精液品质和冷冻精液保存稀释液的研究

对两只1～2岁新西兰陶赛特羊的精液品质、冷冻精液保存稀释液和制作冻精技术进行了研究.结果表明:[1]引进陶赛特羊的精子密度、活率、畸形率、冻精的平均菌落数、射精量、pH值、颜色均属正常范围,但个体间有差异.[2]在果糖-卵黄-柠檬酸-甘油(一号)、葡萄糖-卵黄-柠檬酸钠-甘油(二号)以及果糖-卵黄-柠檬酸钠-甘油(三号)三种稀释液中三号稀释液的冷冻保存效果极显著地(P<0.01)优于一号和二号.     

癸氧喹酯干混悬剂含量测定的改进

采用高效液相色谱法测定癸氧喹酯干混悬剂的含量,在2-250μg/mL范围内,峰面积的常用对数与进样量浓度的常用对数呈良好的线性关系,R^2=1(n=5),平均回收率为99.24%~99.51%,RSD在0.05%~0.28%。此方法分析时间短,样品前处理简便、定量结果准确,重现性好,结果满意,为其质量控制提供了依据。     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

中华人民共和国农业部公告 第267号

为贯彻落实《兽药生产质量管理规范》(简称《兽药GMP》),进一步推动兽药GMP实施进程,我部制定了《兽药生产质量管理规范检查验收办法》,现予公告。本公告自2003年6月1日起施行。附件:兽药生产质量管理规范检查验收办法二○○三年四月十日第一章 总则 第一条 为推动《兽药生产质量管理规范》(以下简称兽药GMP)的实施,规范兽药GMP检查验收工作,制定本办法。 第二条 农业部负责全国兽药GMP管理和检查验收工作;负责制修订兽药GMP检查验收管理规定;负责兽药GMP检查员队伍建设和监督管理工作,负责国际兽药贸易中GMP互认工作。 …     

鸡败血支原体垂直传播模式及其阻断方法

以国际标准强毒Ｒ株人工感染非免疫产蛋鸡,定时扑杀,分别从鼻窦、眶下孔、气管、肺、气囊、卵巢和输卵管分离ＭＧ,并收集感染鸡所产蛋分离ＭＧ。结果表明,人工感染４８小时后上、下呼吸道及肺已被全面感染,９６小时气囊已被感染,１２０小时输卵管已能分离到ＭＧ,卵巢始终分离不到ＭＧ。人工感染鸡自１４４小时便能在其所产蛋中分离出ＭＧ。药物治疗能在７２小时内消除感染,油乳剂苗则需２４天后逐渐降低蛋内ＭＧ分离率,药物卵内注射、种蛋药浴、高温处理均能杀死卵内ＭＧ,但以研制的种蛋浸泡剂药浴效果为最好。     

Comparison of 2 methods of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Effects of size of ingestively masticated fragments of plant tissues on kinetics of digestion of NDF

Ingestively masticated fragments were collected and sized via sieving. Different sizes of esophageal masticate and ruminal digesta fragments, and ground fragments of larger masticated pieces were incubated in vitro, and undigested NDF remaining at intervals of up to 168 h of incubation was determined. The ruminal age-dependent time delay (tau) for onset of digestion of NDF was positively correlated (P < 0.004) with the mean sieve aperture estimated to retain 50% of the fragments between successive sieve apertures (MRA). Degradation rate of potentially degradable NDF (PDF) and level of indigestible NDF were not related (P > 0.10) to MRA of masticated and ground fragments. Estimates of tau were positively related to MRA, with slopes of bermudagrass < corn silage < ruminal fragments of corn silage. It was concluded that fragment size-, and consequently, ruminal age-dependent onset of PDF degradation of a mixture of different fragment sizes results in an age-dependent rate of degradation of the more rapidly degrading of two subentities of PDF. Models are proposed that assume a tau before onset of simultaneous degradation of PDF from two pools characterized as having gamma-modeled age-dependency and age-constant rates. The ruminal age-dependent pool seems to be associated with the faster-degrading pool, and its rate parameter increases with range in MRA in the population of fragments. Conceptually, the ruminal age-dependent rate parameter for PDF degradation seems to represent a composite of several effects: 1) effects of the size-dependent tau; 2) range in MRA of the population of ingestively masticated fragments; and 3) subentities of PDF that degrade via more rapid age-dependent rates compared with subentities of PDF that degrade via age-constant rates. The estimated fractional rates of ruminative comminution of ingestively masticated fragments (0.060 to 0.075/h) were of a magnitude similar to the mean fractional rates of PDF digestion (0.030 to 0.085/h), which implies that ruminative comminution may be first-limiting to fractional rate of PDF digestion. The in vivo roles of ingestive and ruminative mastication of fragments on PDF degradation must be considered in any kinetic system for estimating PDF digestion in the rumen. These results and others in the literature suggest that the rate of surface area exposure rather than intrinsic chemical attributes of PDF may be first-limiting to degradation rate of PDF in vivo.