应用生物技术提高黄牛双犊率试验报告

本文通过对低剂量PMSG、FSH、AI ET鲜胚移植和冻胚移植的试验，得出应用三种激素试验结果。FSH试验组受胎率、双犊率分别比低剂量PMSG试验组提高4％和6．6％，比PMSG试验提高4％和8．6％。AI ET试验组双犊率高2％，比冻胚移植双犊率高8％。     

利用IVM/IVF技术生产试管犊牛的研究

本研究利用卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)技术,体外生产牛胚胎,以获得试管牛.结果表明:卵母细胞体外培养22～24h后,其成熟率为85％;体外受精率为83％.体外受精卵分别在颗粒细胞单层(GCM)和输卵管细胞单层(OCM)上培养,其胚胎最后产量(以授精时卵母细胞的数目为基数)分别为19％和29％,差异极显著(P<0.01).若体外受精卵先在GCM中培养72h后,再将已发生卵裂的(>4细胞)胚胎移到OCM中培养,其胚胎最后产量为35％.由此表明,早期胚胎在其发育过程中至少存在着3个发育相期,即1～8细胞、8～16细胞和16细胞～囊胚3个阶段,各阶段需要不同的培养环境.IVM/IVF胚胎移植到受体黄牛体内后,其足月时的妊娠率为15％.第一头试管犊牛已于1993年4月18日凌晨产出.     

梅花鹿正常分娩过程及其规律的初步观察

梅花鹿是一种半野生的草食动物,其生活习性与其它家畜相比仍具有一定的差别,其中由于人难以接近,因此目前有关鹿的饲养管理、繁殖育种等方面的系统资料十分缺乏。为了给分娩母鹿的护理和预防分娩过程中疾病发生据供理论依据,我们于1984年6月1日至7月1日对垦利军马场的6头梅花鹿的正常分娩过程作了初步观察,并探讨了其正常分娩规律。     

不同处理对猪精子活率、顶体完整率、DNA含量及精清酶活性的影响

对猪全精进行稀释、保存、冷冻、冷休克处理,测定相关指标.结果表明,精液1:1稀释后,在室温(25℃)保存过程中,精子活率、顶体完整率逐渐下降,精清中GOT活性持续升高,ALP活性变化不明显,LDH活性首先于保存的第24h升高,以后下降.精液1:10稀释后,精子活率急剧降低,顶体完整率没有显著性变化;随室温保存时间的延长,两者呈下降趋势,到室温保存的第24h,除GOT活性升高外,其它两种酶活性变化不明显.精液经冷冻解冻、冷休克处理后,精子活率、顶体完整率大幅度下降,精清中GOT、LDII、ALP活性升高,并随冷休克处理时间的延长而加剧;稀释后再进行冷休克处理,各指标变化幅度减小.本试验结果还表明,猪精液DNA含量为3.14mg/10~9精子,其与精子密度呈正相关(r=0.893),试验中各种处理均未引起精子DNA含量明显变化.     

瘦蛋白对体外培养的新生牛脂肪细胞Ob-Rb mRNA表达的影响

取单层生长良好的脂肪细胞，采用单因素试验，分别添加浓度为5ng／mL外源牛重组瘦蛋白（每12h添加1次）不添加作为对照至4、12、24、36、48和72h后提取总RNA，每个处理3个重复（孔），应用竞争RT-PCR法检测外源瘦蛋白对初生犊牛脂肪细胞Leptin长型受体（Ob—Rb）表达水平的影响，结果与对照组相比在12～24h内随着培养时间的增加，脂肪细胞Ob—Rb表达水平量亦显著增加（P〈0．01），之后其表达量逐渐回降，在48～72h趋于平稳（P〉0．05）。结果表明，在一定时间内瘦蛋白可提高体外培养的新生牛脂肪细胞Ob-Rb mRNA的表达水平。     

Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响

牛冷冻精液解冻后，在Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度液中４００ｇ离心２４ｍｉｎ有效地获得了５７．８７％±８．０％的精子回收率；对照组上游法精子回收率仅为１５．８７％±１．９％（Ｐ〈０．０５）。Ｐｅｒｃｏｌｌ和上游２种方法分离的精子在受精液中８，１８ｈ后的活率，分别为６０％，１０％和７０％，２０％，２种浓度Ｐｅｒｃｏｌｌ法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精子（ＩＶＦ）卵裂率的影响，精子最终浓度为２×１０＾     

皮埃蒙特——优质肉牛品

皮埃蒙特原产意大利西北部皮埃蒙特区,经过长期选育已成欧洲著名的大型肉牛品种。1958年建立良种登记簿。1986年成立种牛测定中心,1991年开始系统地公布后裔测定结果。我国于1986年首次引入冷冻胚胎和冷冻精液进行纯种繁育和杂交改良。 1.品种特性 皮埃蒙特公牛为灰色或浅红色。颈、肩、四肢颜色略深,鼻、唇、眼、尾梢及四肢为黑色。成年母牛体重600公斤,成年公牛可达1000公     

山羊β-酪蛋白启动子指导的通用表达载体及乳腺暂时表达系统

为了实现外源蛋白在动物乳腺中的特异性高效表达，利用山羊β-酪蛋白5’端1．132kb的侧翼调控序列、牛生长激素基因polyA(BGHPA)序列、基质结合区(matrixattac}linentregion，MAR)和多克隆住点(MCS)，构建了乳腺组织定位通用表达裁体pMRPA，鉴定正确后，将2．1kb的人组织型纤溶酶原激活荆(tissue—type plasminogen activator，tPA)cDNA克隆到pMRPA多克隆位点，获得重组表达载体pMRPA—tPA。在不同的泌乳时间，使用不同的包裹剂，采用不同的剂量，将pMRPA—tPA注入泌乳期山羊乳腺组织进行暂时表达。结果显示，所构建的乳腺组织特异性通用表达载体能够有效地指导目的基因的高效表达。通过乳腺暂时表达试验进一步发现，泌乳稳定期表达效果最好，tPA表达水平在2．020～6．959mg／L；表达量随DNA用量的增加而提高；使用普通包裹剂和裸质粒相比，普通包裹剂对表达效果无明显影响。本试验对乳腺暂时表达系统进行了系统性研究，为通过乳腺暂时表达系统改良乳汁蛋白组成提供了重要依据。     

猪肌生成抑制素C末端80氨基酸编码基因的合成及其原核表达

将猪肌生成抑制素编码序列下游883-l126bp按大肠杆菌嗜好密码子进行优化，将优化后序列双链分成l2个单链片段(F1、F2、F3、R6、R5、R4、F4、F5、F7、R3、R2、R1)，采用化学合成方法合成，每对相邻互补片段之间有20bp序列交叉重叠。F1长38bp，Rl长36bp，其他片段均40bp长，Fl和R1片段两端分别加上限制性内切酶NcoI和XhoI的识别位点序列。经PCR扩增出254bp片段，该片段与pMDl8—T载体连接，转化JMl09感受态细胞，所得阳性克隆进行测序分析，得到的克隆序列与设计的序列完全一致，表明成功地获得了猪肌生成抑制素下游编码序列克隆载体。从阳性细菌中提取质粒，经NcoI和XhoI酶切，回收254bp目的片段，定向克隆到pET28a中，转化DH5α受体菌，提取质粒，再转化到BL2l(DE3)中，成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导，通过SDS—PAGE，检测出猪肌生成抑制素的表达。