猪肺炎支原体巢式PCR诊断方法的建立及应用

为建立一种快速诊断猪肺炎支原体病原的方法,根据GenBank上登录的Mhp基因组序列,在保守区基因内部设计合成2对引物,经过PCR反应条件的优化,建立了检测猪肺炎支原体的巢式PCR方法。结果表明,该方法对鸡毒支原体、猪鼻支原体、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;第1次扩增的敏感性是10pg,第2次扩增的敏感性是0.1pg,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。巢式PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以在短时间内准确快速的检测出低含量的Mhp病原,为猪肺炎支原体的快速诊断与净化奠定基础。     

禽多杀性巴氏杆菌PCR诊断方法的建立

随着现代分子生物学和生物信息学的发展,PCR技术已经在病原检测方面得到了广泛的应用.试验旨在利用PCR技术建立一种禽巴氏杆菌病原的快速、特异性强的检测方法.     

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR方法的建立及初步应用

为建立一种快速、敏感、特异的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法,根据Gen Bank登录的HPS 16S rRNA基因序列,设计1对特异性引物和1条特异性Taq Man-MGB探针,建立了HPS荧光定量PCR检测方法,并对方法的敏感性、特异性以及重复性和稳定性进行了验证。结果显示:本研究建立的HPS FQ-PCR方法在10~1~10~6拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系,所得相关系数为0.998;检测灵敏度可达10拷贝/μL,是常规PCR的10倍;特异性好,对pGEM-T/HPS重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对4个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/HPS重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好。对30份临床疑似HPS感染的组织样品进行应用检测,检出19份阳性,比商品化的HPS FQ-PCR检测试剂盒及常规PCR方法的阳性检出率高。结果表明,本研究建立的HPS FQ-PCR方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的优点,可用于临床HPS感染猪的早期检测,对HPS的快速诊断、综合防控具有重要意义。     

犬细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速的犬细小病毒(CPV)病原检测方法,本试验根据GenBank上登录的CPV基因序列,在保守的VP2基因内部设计合成内外2对引物,建立了检测CPV的套式PCR方法。该方法对犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCoV)、犬腺病毒(CAV)、犬副流感病毒(CPIV)的扩增结果均为阴性;该检测方法最低可以检测出0.1 ng的病毒核酸,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。建立的套式PCR方法具有良好的特异性、敏感性,可以准确快速检测出极低含量的CPV,将为CPV的病原检测及分子流行病学调查等提供一种高效、快速、特异、灵敏的检测方法。     

猪伪狂犬病毒野毒株套式PCR检测方法

为建立能鉴别猪伪狂犬病病毒（PRV）野毒株和疫苗株的实用方法,本文以疫苗株缺失的3.5kb片段为靶基因,设计了2对PCR引物,建立了能够特异性检测PRV野毒株的套式PCR方法。与常规PCR相比,该方法检测极限可达10个病毒拷贝/μL,是常规PCR的1000倍,并与猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒等不存在交叉反应现象。在对临床150份样品检测时,套式PCR的阳性率为21.33%,常规PCR的阳性率为10%。这表明该方法具有特异性高、敏感性强的特点,是一种值得基层推广应用的快速诊断技术,可用于PRV的诊断和流行病学调查等。     

鸡病毒性关节炎实时荧光RT-PCR检测方法的建立

本文旨在建立实时荧光RT-PCR方法检测鸡病毒性关节炎病原,针对特异性的禽呼肠孤病毒S1基因设计了1对引物及探针,经优化反应体系,确定引物和探针的最优浓度配比,建立了鸡病毒性关节炎实时荧光RT-PCR检测方法。结果显示:该方法灵敏度高、特异性强、检测时间短,可应用于鸡病毒性关节炎的普查监测和检验检疫。     

检测实验动物弓形虫感染的两种PCR方法的建立和比较

为了建立敏感、稳定、特异的PCR检测体系，用于实验动物弓形虫感染的检测。采用B1基因设计引物，建立常规PCR，用P30基因设计引物，建立巢式PCR；用两种PCR方法检测实验感染弓形虫小鼠血液和腹腔波中的DNA动态变化；用巢式PCR检测自然状态下的普通级豚鼠、教学和科研用兔的弓形虫感染率，并和常规PCR检到结果比较。结果，巢式PCR可检测到1fgDNA含量，比常规PCR敏感lOO倍；对其他微生物DNA无交叉现象，特异性强；对同一样品重复检测3次，阴、阳性结果一致，稳定性好。小鼠感染弓形虫2d后，巢式PCR对小民腹腔液的阳性检出率为83．3％，对血液的阳性检出率为33．3％；感染3d后，腹腔液阳性检出率为100％；而常规PCR在小鼠感染3d和4d后才能在腹腔液和血液中检测到，检出率各为16．7％。受检普通级豚鼠没有感染弓形虫，教学和科研用兔的弓形虫总感染率为14．3％。结论认为，巢式PCR方法可用于实验动物弓形虫早期感染的检测，具有敏感性高、特务性强、稳定性好的特点。     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白(MRP)荧光PCR检测方法的建立

猪链球菌病是严重危害人兽健康的一种传染病。常规的猪链球菌血清学检测方法不但费时，而且只能鉴定到血清型。荧光PCR技术是一种新型扩增待检基因的方法，采用“闭管”操作，灵敏度比常规PCR高出100倍以上，而且整个过程只需要0．5～2h，还可避免常规PCR操作时EB染色的危害及PCR后处理可能带来的假阳性，是目前为广大科研工作者所青睐的一种病原的快速鉴定方法。本研究选择MRP设计引物进行PCR，反应结束即可根据扩增曲线判定有无目的基因，从而确定待检菌是否为猪链球菌2型致病株。本方法的建立，为疫情发生后，有针对性地采取紧急防控措施、严防疫情传入传出奠定了基础。     

荧光定量PCR方法与其他动物疫病病原检测方法的应用比较

荧光定量PCR方法是一种发展较快的新型核酸定量检测技术。本文比较了荧光定量PCR检测方法与其他三种常见的动物疫病病原检测方法(普通PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金快速检测卡)的优缺点,结果得出:荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,操作简单,结果判定简单、快速。     

蜜蜂球囊菌荧光PCR快速检测方法的建立及应用

以蜜蜂球囊菌ITS1、ITS2和5.8 S rDNA保守序列(U68313)为参考,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种快速检测蜜蜂球囊菌的荧光PCR方法。该方法灵敏度达1 ng/μL的阳性DNA比常规PCR高10倍。检测的特异性高,与蜜蜂幼虫芽胞杆菌、蜂房蜜蜂球菌、蜜蜂败血杆菌无交叉反应,同时可避免常规PCR因电泳造成的污染。应用该方法对蜜蜂及蜂制品的实际样品和模拟样品进行检测,结果显示所建立的荧光PCR检测方法在4 h内即可报告结果,与传统病原菌分离培养、常规PCR相比较,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点,可以用于蜜蜂及其制品中蜜蜂球囊菌的快速检测和进出境检疫。     

Modern scheme for the diagnosis of staphylococci

A simplified scheme for the subdivision of coagulase-positive staphylococci and another simplified scheme for the diagnostics of coagulase-negative species were worked out. On the basis of the production of staphylokinase, coagulation of human and bovine plasma, acetoin production from glucose, and growth on agar with crystal violet, it is possible to identify S. aureus with its biovars A, B, C1, C2, D, as well as S. intermedius. The coagulase-negative species can be diagnosed according to their sensitivity to novobiocin, nitrate reduction, fermentation of maltose, sucrose, salicin, xylose, trehalose, mannitol and mannose, and haemolytic activity. The proposed diagnostic schemes were verified with success on the collection strains and on the 1305 staphylococci strains isolated largely from the bovine mammary gland, from dogs, man and domestic fowl. In S. aureus strains a close correlation was demonstrated between their biotype characteristics and the host species. A similar correlation was determined for S. intermedius. As to the coagulase-negative species, S. epidermidis, S. hominis and S. haemolyticus were diagnosed most frequently. Both schemes represent a reliable, prompt and technically simple method of the diagnostics of the Staphylococcus microorganisms.     

Brain biopsy for the diagnosis of heartwater

Summary The technique of brain biopsy and its successful role in confirming a diagnosis of heartwater in the live animal are described.

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Biopsia Cerebral Para El Diagnóstico De Hidropericardio

Resumen Se describe la técnica de la biopsia cerebral para el diagnóstico de hidropericardio. Esta se ha utilizado exitosamente en Medicina Veterinaria.

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Biopsie Du Cerveau Pour Le Diagnostic De La Heartwater

Résumé La technique de la biopsie cérébrale et son rôle efficace dans la confirmation du diagnostic de la heartwater sur l'animal vivant sont décrits.