金叶榆ISSR 识别卡构建及8 份榆属植物材料的亲缘关系分析

采用ISSR 分子标记技术对8 份(品种、类型)榆属植物材料进行遗传多样性分析,从78 个引物中筛选出12 个具有扩增多态性的引物用于ISSR-PCR 扩增,共扩增出74 条带,其中多态性条带63 条,占总扩增条带的85%。 用NTSYSpc2-10e 软件对ISSR 扩增结果进行分析,结果表明,供试材料具有较丰富的遗传多样性。利用扩增条带 存在赋值1,否则赋值0 的数据分析方法建立金叶榆ISSR 识别卡;利用UPGMA 法进行聚类分析,将8 份(品种、类 型)植物材料按亲缘关系远近分为4 类。      

24份葡萄种质亲缘关系的ISSR分析

利用ISSR标记对24份葡萄材料进行了基因组多态性分析,从50条引物中筛选出6条扩增稳定且多态性丰富的引物用于葡萄的ISSR扩增。共扩增出59条条带,其中多态性条带53条,多态性百分率为90%。根据ISSR扩增结果,利用NTSYSpc2.10e软件进行Jaccard相似性系数分析,24份葡萄材料的遗传相似系数为0.42～0.88,平均遗传相似系数为0.6495。在遗传相似系数为0.55处,24份葡萄材料明显分为2大类群。第1类包含10个欧美杂种、7个欧亚种、1个华欧杂种,第2类包含3个美洲杂交种、1个河岸葡萄、1个冬葡萄、1个东亚葡萄。由此可见,美洲杂交种与欧美杂种、欧亚种葡萄的亲缘关系较远,欧美杂种与欧亚种葡萄之间亲缘关系较近。此外,引物BC820与引物BC847分别在我国自主选育砧木品种华佳8号与抗砧3号中扩增出一条特异条带,可为利用ISSR标记鉴定葡萄品种或品系提供参考依据。     

蓖麻种质资源遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR标记,对国内外17个蓖麻材料的亲缘关系进行了分析,从60条引物中筛选出11条能扩增出清晰条带并具有多态性的引物,且这些引物共计扩增出90条DNA条带,平均每个引物扩增的DNA条带数为8.18条,其中,多态性DNA条带57条,占63.33%.根据ISSR扩增结果,利用NTSYS-ps软件进行聚类分析,结果表明:17份蓖麻材料的遗传相似系数在0.52～0.97问,且明显分为2个大类群.以相似系数0.79为准线,又可将第二大类群分为2个亚类群与2份单一材料.9份国内材料与2份法国材料同属一个亚类群,遗传相似性相对较高.     

基于ISSR标记的西南地区石斛资源亲缘关系分析

为石斛属种质资源保护与开发及新品种选育提供理论指导,采用ISSR分子标记技术对采自西南地区的23份石斛属植物和1份金石斛属植物资源进行遗传多样性和亲缘关系分析,并采用非加权平均距离法(UPGMA)进行聚类分析。结果表明:从20条ISSR标记引物中筛选出11条扩增条带清晰的引物,共检测出151个扩增位点,平均每条引物扩增位点为13.7个;其中多态性位点148个,多态性条带比率为98.01%;24份石斛总扩增条带为1 084条,平均45.17条,其中多态性条带有1 012条,占比为93.4%;24份石斛材料遗传多样性指数为0.63～0.78;在相似系数0.68处将24份石斛材料分为7个类群。西南地区石斛资源的遗传多样性非常丰富。     

29份文心兰种质资源亲缘关系的ISSR分析

以29份文心兰种质资源为材料,利用ISSR 分子标记开展亲缘关系分析.结果表明：10个ISSR 引物共扩增出144条DNA 条带,平均每个引物扩增14.4条,其中多态性谱带占124条,多态性比率为86.11%;遗传相似系数为0.34～0.91,聚类分析将29份文心兰种质在简单相似系数0.56处分成3大类群.ISSR 分子标记聚类结果与传统分类基本一致,与花器官花色具有密切的关系,初步证明利用ISSR 分子标记技术对文心兰进行亲缘关系分析的可靠性.     

7种木兰科常绿植物亲缘关系的ISSR和AFLP分析

利用ISSR和AFLP 2种分子标记方法对7种木兰科常绿植物遗传多态性和亲缘关系进行了分析,建立了木兰科常绿植物ISSR和AFLP的优化反应体系,构建了UPGMA系统树.利用筛选的11个引物对7份样本进行ISSR分析,共获得131条带,其中多态性带86条,平均每个引物产生11.10条带,平均多态性检出率为70.37%,说明供试的7种材料种质间有较高等位多态性.用22对EcoRⅠ/MseⅠ引物组合对7份样本进行了AFLP分析,共扩增出1 310条带,其中多态性带1 204条,平均每对引物扩增带数59条,多态性率92.5%.通过2种标记发现,木兰属与含笑属聚类在一起,他们之间存在的遗传差异通过分子标记可以鉴定出来,而木莲属的川滇木莲在聚类分析中差异性最明显,尤其与含笑属,虽然他们的外部形态相似,但遗传距离较远.研究还发现,在2组试验的遗传相似系数结果中,均有超出0～1范围的数值出现,根据分析为偏分离现象,初步推断出现此种结果应与材料来源有关.     

金枣柿与部分柿属植物亲缘关系的ISSR分析

应用ISSR标记对柿属(Diospyros)17份植物材料的亲缘关系进行分析,以明确金枣柿的分类地位。用君迁子(D. lotus L.)进行预扩增后,从100条引物中筛选出37条扩增清晰的多态性引物,这些引物共扩增出997条DNA条带,平均每个引物扩增的DNA条带数为26.94条,其中多态性DNA条带973条,占97.59%。根据ISSR扩增结果,进行聚类分析,结果表明: 17份柿属材料可明显分为2个大类群,其中金枣柿的6份试材为一个大类群,与组成另一类群的3个种形成明显遗传界限。通过聚类分析,结合形态观察,认为金枣柿极有可能是柿属的又一个新种。     

20份兰科植物的ISSR遗传多样性分析

采用ISSR分子标记技术对20份兰科植物品种资源的遗传多样性和亲缘关系进行分析。结果表明,从100条ISSR引物中共筛选出6条多态性稳定清晰的引物,对20份兰科植物材料总共扩增出616条带,平均每个引物扩增出102.7条带,其多态性为100%。兰科植物的遗传多样性非常丰富。利用非加权平均距离法(UPGMA)构建系统树聚类分析,在相似系数0.32和0.38处,20份兰科植物品种资源被细分为4类,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类,分别属于石斛属、兜兰属、毛兰属和兰属。根据聚类的树状图分析20份兰科植物的亲缘关系,其中亲缘关系最近的是兰属与毛兰属,亲缘关系较近的是兰属与兜兰属,亲缘关系最远是兰属与石斛属。     

接骨木种质资源遗传多样性的ISSR分析

运用ISSR分子标记对24份接骨木属植物的遗传距离、亲缘关系进行分析。13条ISSR引物共扩增出3061条可统计条带,其中多态性条带3059个,多态位点百分率高达99.93%,表明接骨木属植物遗传多样性非常丰富。依据ISSR扩增结果,利用NTSYS-pc2.1e软件进行分析,24份接骨木样本的遗传相似系数在0.6772~0.8578。经UPGMA聚类分析,24份接骨木属植物分为2大类,国内接骨木优良单株聚类分析结果与其果实性状的相关性不显著;“金羽”接骨木与国内接骨木聚为一类,亲缘关系较近。     

基于ISSR的葡萄品种亲缘关系分析及其指纹图谱构建

以19份葡萄品种为材料,采用ISSR分子标记对其品种间的亲缘关系进行研究,通过非加权配对算术平均法（UPGMA）进行数据分析,建立亲缘关系图,利用筛选出的引物构建葡萄品种的DNA指纹图谱。结果表明,从86条ISSR引物中筛选出14条多态性较丰富且稳定的引物,共扩增出136条带,其中多态性条带125条,多态性百分率为91．91％。各材料间遗传相似系数在0．54～0．83,平均遗传相似系数为0．685。在遗传相似系数为0．54时,可将19份葡萄材料明显分为2大类。利用2条ISSR引物UBC815和UBC855构建了14个葡萄品种的DNA指纹图谱。分析表明,ISSR标记多态性较为丰富,适合葡萄品种亲缘关系分析及图谱构建,并可为品种鉴定提供理论依据。     

女贞ISSR分子标记的引物筛选

利用60个ISSR引物，对来自不同地域的12份女贞种质材料进行PCR扩增，筛选出12个多态性丰富、条带清晰且重复性良好的、适合于所有女贞种质材料进行ISSR分析的有效引物。筛选出的12个有效引物对12份女贞种质材料进行ISSR—PCR扩增，均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱，共扩增出228条DNA谱带，其中210条为多态性带，占总扩增带数的92．1％，平均每个引物扩增出19条谱带。本试验筛选的12条引物可以有效地应用于女贞种质资源材料的ISSR分析。     

裕丹参不同变异类型ISSR鉴定

采用ISSR分子标记对裕丹参4种变异类型基因组DNA进行PCR扩增,利用SPSS11.5软件进行类型问亲缘关系分析,构建遗传树状图.结果表明,从50务ISSR引物中筛选出8条具有鉴别意义的多态性引物,在裕丹参4种变异类型中共得到65条带,47条为多态性条带,多态性位点72.3%,聚类分析将裕丹参4种类型分为2个类群,表明裕丹参4种变异类型遗传分化明显.ISSR标记可以作为裕丹参4种变异类型鉴定的有效分子标记.     

鹧鸪茶种质资源ISSR分子标记中的引物筛选（摘要）

[目的]为快速和准确地对鹧鸪茶种质材料进行ISSR分析提供有效引物。[方法]基因组DNA的提取采用改良的CTAB法：先用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性,EB染色,以Lambda DNA/HindⅢ＋Eco RIMarkers为参照,电泳结果用Gel Doc XR型凝胶成像分析系统下照相并记录。再用Biophotometer紫外分光光度计分别测定OD_（260）和OD_（280）,并计算出OD_（260）/OD_（280）值,每份样品的OD_（260）/OD_（280）比值均要求在1.8～2.0范围内。测定每份样品DNA浓度（ng/μl）,并将其稀释至20 ng/μl,分装后置-20℃保存。利用99个ISSR引物,对来自海南岛境内的10个居群中共20份鹧鸪茶种质材料进行PCR扩增,以筛选出适合于所有鹧鸪茶种质材料ISSR分析的有效引物。[结果]从99个供试引物中共筛选出15个多态性丰富、条带清晰且可重复性良好的有效引物。用筛选出的15个引物对66份鹧鸪茶种质材料进行ISSR-PCR扩增,均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱;15个引物共扩增出286条DNA谱带,其中231条为多态性带,占总扩增带数的80.77%,平均每个引物扩增出19.1条谱带。[结论]所筛选的15条引物可以有效地应用于鹧鸪茶种质资源材料的ISSR分析。     

浙江红山茶总DNA提取及ISSR-PCR引物筛选

[目的]筛选出简易的DNA提取方法及适合于所有浙江红山茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[方法]采用改良的CTAB法提取基因组DNA,参考其他山茶科植物的50个ISSR引物,对来自浙江、福建、江西、安徽10个居群中共20份浙江红山茶种质材料进行了PCR扩增。[结果]改进的CTAB法可简单、快速地提取到高纯度DNA产物;筛选出的20条引物多态性丰富、条带清晰且可重复性良好。共扩增出337条DNA谱带,其中281条为多态性带,占总扩增带数的83.4%,平均每个引物扩增出16.85条谱带。[结论]所筛选的20条引物可有效应用于浙江红山茶种质资源材料的ISSR分析。     

浙江红山茶总DNA提取及ISSR-PCR引物筛选

[目的]筛选出简易的DNA提取方法及适合于所有浙江红山茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[方法]采用改良的CTAB法提取基因组DNA,参考其他山茶科植物的50个ISSR引物,对来自浙江、福建、江西、安徽10个居群中共20份浙江红山茶种质材料进行了PCR扩增。[结果]改进的CTAB法可简单、快速地提取到高纯度DNA产物;筛选出的20条引物多态性丰富、条带清晰且可重复性良好。共扩增出337条DNA谱带,其中281条为多态性带,占总扩增带数的83.4%,平均每个引物扩增出16.85条谱带。[结论]所筛选的20条引物可有效应用于浙江红山茶种质资源材料的ISSR分析。     

利用ISSR分析技术鉴定贵州枇杷新种质的研究

为探索枇杷新种质的鉴定方法,利用ISSR标记,构建了贵州18个枇杷栽培品种及课题组选育的7个优良新种质的DNA指纹图谱,并分析其相互间的亲缘关系。结果表明:以筛选出的15条引物进行PCR扩增,获得清晰、重复性好的谱带172条,其中多态性谱带157条,多态性比例为91.3%;应用3个引物825、834和848的组合,构建了25份枇杷品种（系）的ISSR指纹图谱,可以有效区分所有供试材料;聚类分析显示,在相似性系数为0.60时,可将供试种质分成2大类:一类主要为原产于浙江的品种（系）,另一类主要为原产于四川的品种及选育的新种质;因此,ISSR标记能有效地用于枇杷栽培种及新种质的分子鉴定及其亲缘关系的解析。      

鸢尾属种质资源的ISSR分析

采用ISSR分子标记技术,从80个随机引物中筛选出多态性强、重复性好且稳定性高的引物15个,对37份鸢尾属材料进行多态性分析,共扩增出328条带,多态性带为327条,多态性比例达99.7%,说明鸢尾属物种间有丰富的遗传多样性。依据15个有效引物所产生的328条ISSR标记建立DNA分子系统聚类图,将供试材料分为6组,其中矮紫苞鸢尾和单苞鸢尾单独划为一组。根据获得物种特有ISSR标记分析表明,利用15个有效引物可以较好地将鸢尾属供试37份材料区分开,其中7个材料具有各自特有的扩增带,单苞鸢尾和黄菖蒲还分别具有2和3条各自特有的扩增带,仅引物ISSR8、ISSR63和ISSR75即可将所有37份供试材料区分开。     

薹菜种质资源的RAPD和ISSR分析

【目的】对29份薹菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis Makino var.tai-tsai Hort) 种质资源进行遗传多样性和亲缘关系分析,为薹菜的种质资源保护和利用奠定基础。【方法】利用优化的RAPD和ISSR标记体系,对采自山东、江苏和北京的29份薹菜品种进行DNA多态性分析,并采用类平均法对29份薹菜品种的RAPD和ISSR扩增结果进行聚类分析。【结果】从273条RAPD引物中筛选的33个RAPD引物,共扩增出了336条清晰的谱带,其中293条显示多态性,平均每个引物扩增出10.2条多态性谱带,多态性比率为87.2%。利用RAPD标记构建了29份薹菜资源的聚类树状图,距离系数为0.63～0.79。从100条ISSR引物中筛选的45个ISSR引物,共扩增出了522条清晰的谱带,其中414条显示多态性,平均每个引物扩增出9.2条多态性谱带,多态性比率为79.3%;利用ISSR标记构建了29份薹菜资源的聚类树状图,距离系数为0.70～0.86。【结论】基于RAPD和ISSR标记构建的29份薹菜品种的聚类树状图虽有一定差异,但总体趋势一致,1、20、21号薹菜与其他品种的遗传距离相对较远。     

利用ISSR和RAPD标记构建红麻种质资源分子身份证

【目的】对来源于不同国家和地区的51份红麻栽培种、野生种和近缘种进行遗传分析,构建红麻种质资源分子身份证。【方法】利用ISSR和RAPD标记对不同类型的51份红麻种质资源进行分析,计算其遗传相似系数,利用UPGMA法作聚类图,建立分子身份证。【结果】19个ISSR标记共产生113条条带,其中101条为多态性带,多态性比率(PPB)为89.38%;20个RAPD标记共产生118条条带,其中112条为多态性带,多态性比率(PPB)为94.92%。品种间多态性丰富,结合特征带、特异谱带类型和不同引物组合3种分析方法,可有效建立51份红麻种质资源的特异分子身份证。【结论】材料间遗传多样性较高,有较远的遗传距离和较宽的遗传基础,ISSR和RAPD标记技术可有效用于建立红麻种质资源分子身份证。