番木瓜果皮和种子总RNA提取方法的研究

CTAB法、SDS法和改良的热硼酸法所提取的番木瓜果皮总RNA产量分别是107.8、90.4和70.4μg/g;种子总RNA产量分别是164.0、204.8和111.2μg/g。用TSSE或TE溶液溶解CTAB法中的LiCl过夜沉淀,得到的总RNA完整性好、纯度高,种子总RNA的产量明显提高,达到300μg/g以上。用CTAB法提取的果皮和种子总RNA已成功用于cDNA合成、文库构建和抑制消减杂交(SSH)等后续分子生物学试验。     

山葡萄总RNA提取方法的比较

以山葡萄成熟果皮及叶片为材料,对改良CTAB法,SDS法和Trizol法3种不同的总RNA提取方法进行了比较。结果表明,SDS法和Trizol法提取的总RNA均有拖带现象,有部分降解,Trizol法提取的总RNA中有DNA的污染;改良CTAB法提取山葡萄叶片和果皮的总RNA带形完整,28SrRNA和18SrRNA的荧光亮度接近2：1,A260／280值为1．8～2．0,该方法提取的总RNA纯度和提取量最高,提取出的总RNA可用于进行RT-PCR、构建cDNA文库等分子生物学的研究。     

滇杨叶芽总RNA提取方法比较研究

 采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。     

成熟葡萄果实高质量总RNA提取方法的建立

成熟葡萄果实中富含多酚多糖类物质,对提取组织RNA造成了很大的干扰.研究分别采用3种试剂盒法和改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,以成熟的葡萄果实为材料,提取总RNA并检验其产量和质量,其中,改良CTAB法是在提取缓冲液中加入了聚乙烯吡咯烷酮、亚精胺、β-巯基乙醇及高浓度的氯化钠.对各组RNA产物进行质量检测,发现3种试剂盒法均没有得到可用的RNA,只有改良的CTAB法能够从新鲜采摘和贮藏的葡萄果实组织中提取出高质量的总RNA,基本无降解和污染,且得率可达到85μg/g以上.进一步研究表明,改良的CTAB法提取得到的RNA可用于后续的RT-PCR、qRT-PCR和CDS扩增试验.改良CTAB法适用于成熟葡萄果实RNA的提取,所得RNA质量良好,满足后续分子试验的需求.     

泡桐叶片RNA提取方法的研究

以豫杂1号泡桐为试验材料,采用Trlzol,改良Trizol Ⅰ,改良Trizol Ⅱ,CTAB和Plant RNAtrip等方法提取其叶片总RNA,并用A260/A280值和琼脂糖凝胶电泳检测RNA的得率、纯度和完整程度.结果表明,不同方法提取的RNA在得率、纯度和完整度方面存在一定的差异.改良Trizol Ⅱ法提取RNA的A260/A280值为1.989,得率为171.0μg·g-1,电泳琼脂糖凝胶上有28,18,5 S rRNA 3条清晰的谱带,是泡桐叶片RNA提取的最佳方法.     

3种杜仲枝叶总RNA提取方法的比较

采用改良过的CTAB - LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法分别提取杜仲枝叶总RNA,以期筛选出适于杜仲枝叶高质量总RNA提取方法;用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,以紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率.结果表明,改良过的CTAB - LiCl法和RNApurePlant Kit法提取的RNA完整性好,纯度高,RT - PCR可获得目的基因cDNA片段;RNAiso Plus法得到的RNA降解严重,纯度低.改良过的CTAB - LiCl法和RNADure Plant Kit法提取杜仲枝叶总RNA完全能满足后续的RT - PCR和RACE等分子生物学研究.     

顽拗植物龙眼果皮中总RNA的提取方法研究

【研究目的】为建立适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA提取的方法;【方法】采用TRIzoL法、Tris-硼酸法和改良CTAB法提取龙眼果皮的总RNA。并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质;【结果】改良CTAB法、Tris-硼酸法所提取的RNA经电泳检测。28SrRNA和18SrRNA条带清晰。RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致。说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRJZOL法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带;【结论】改良CTAB法和Tris-硼酸法适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA的提取。     

黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA提取方法的比较

目的筛选适合黄花石蒜花蕊和花葶组织中总脱氧核糖核苷酸(RNA)的提取方法。方法采用CTAB法、SDS法和植物总RNA提取试剂盒法对黄花石蒜花蕊和花葶组织中总RNA进行提取并比较其效果。结果 CTAB法和SDS法均不能提取到完整的RNA;植物总RNA提取试剂盒能有效地去除蛋白质、多糖及DNA,28S条带的荧光亮度是18S条带的2倍左右,OD260/280值在1.8~2.0之间,花蕊和花葶的产率分别为304.1μg/g和255.8μg/g,并且试剂盒法提取的总RNA通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。结论试剂盒法适合黄花石蒜花蕊和花葶组织总RNA的提取,提取的总RNA质量高、完整性好、产率高,符合后续实验的要求。     

西南桦硅胶干燥叶DNA提取方法比较

采用常规CTAB法、CTAB硅珠法、核分离法、二次抽提法、改良CTAB法对富含多糖的西南桦干叶进行DNA提取,并将DNA进行电泳检测及RAPD分析,结果表明：不同提取方法结果差异较大,CTAB硅珠法得率最低,为0.4～11.6μg/g;核分离法和二次抽提法较常规法去除多糖效果好,得率高;改良CTAB法得率最高,为171.2～364.8μg/g,电泳条带最清晰,RAPD扩增结果最好,适合干叶西南桦基因组DNA提取。     

盐肤木叶片总RNA提取方法的比较研究

比较了Trizol法、异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS法以及改良CTAB法和改良SDS法等方法提取盐肤木叶片总RNA,琼脂糖电泳和紫外检测结果表明:改良SDS法提取的盐肤木总RNA没有降解,28S和18SrRNA条带清晰,D260nm/D280nm和D260nm/D230nm分别为2.05和2.12,虽然其产量只有59.87μg/g,但是综合判断改良SDS法是适宜盐肤木总RNA提取的一种有效方法.     

新疆巴旦木花药总RNA的提取

[目的]建立一种有效的巴旦木花药总RNA提取方法,为巴旦木花粉SFB基因克隆和自交不亲和机制研究奠定基础.[方法]利用改良的CTAB法从巴旦木(Amygdalus communis L.)花药中提取高质量的总RNA.[结果]该方法获得的巴旦木花药总RNA完整性好、无多糖和蛋白质的污染,产量较高(鲜花药为283.44 μg/g),OD260/OD280在1.89～1.99,OD260/OD230>2.0.提取的巴旦木花药总RNA反转录成cDNA,以SFB(S-haplotype-specific F-box gene)基因简并引物PCR扩增,获得了目的片段.[结论]改良的CTAB法是一种简单、快速有效的巴旦木花药总RNA提取方法,提取的花药总RNA能够满足巴旦木进一步的分子生物学研究.     

半夏叶片总RNA的提取研究

[目的]为了获得高产高质的半夏RNA,为半夏分子生物学方面的研究打下基础。[方法]采用改进的CTAB法提取半夏叶片RNA。用紫外分光光度计测定所提RNA样品的OD260、OD280和OD230的值,用RNA浓度计算公式:RNA(μg/μl)=OD260×40×稀释倍数/1000,求出RNA浓度。[结果]紫外分光光度计的测定结果表明:OD260/OD280介于1.7～2.0之间。用改进的CTAB法提取的半夏叶片RNA质量较好,经变性胶电泳后,有较明显的3条带,分别是28S、18S和5S,28S、18S清晰可见,5S稍有弥散,但在亮度上28S与18S差别不大。[结论]此方法简便易行,成本较低,适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取。     

野葛块根总RNA的不同提取方法比较研究

以块根膨大与块根不膨大突变型的野葛块根为材料,比较Trizol、CTAB、SDS及改良SDS法提取野葛块根总RNA的效果,通过RNA产量、纯度及电泳图谱分析等,初步确立了一种有效提取野葛块根总RNA的改良SDS法。该方法提取的RNA OD260/OD280值介于1.7～1.9,电泳图谱清晰完整,产量高,成本低,完全适用于RT-PCR、cDNA-AFLP及Northern杂交等分子生物学后续试验。     

响应面优化热浸提法提取石榴皮总多酚的工艺研究

[目的]研究石榴皮中总多酚的热浸提最佳工艺条件并测定其含量。[方法]以石榴皮为原料、纯水为浸提溶剂加热浸提石榴皮中总多酚,通过单因素试验探究了石榴皮总多酚提取率随热浸提温度、时间、料液比以及提取次数4个客观因素的变化规律,并用响应面分析法优化提取工艺,采用Folin-Ciocalteu比色法测定石榴皮总多酚含量。[结果]通过Box-Benhnken响应面分析试验确定以热浸提法提取石榴皮总多酚的最佳工艺为热浸提温度45℃、时间30 min、料液比1∶20(g∶mL)、提取次数为3次,4个因素对石榴皮总多酚提取率的影响顺序依次为温度、料液比、提取时间、提取次数,并以此优化工艺进行试验,所得总多酚提取率为17.11%。[结论]采用热浸提工艺提取石榴皮总多酚并用响应面分析法优化试验,在保证快速、高效的同时也具有节能、不破坏有效成分的优势,以纯水作为浸提溶剂更是避免了溶剂残毒问题,极大地提高了其安全性,因此也拓宽了极具生物活性的石榴皮多酚在生产生活领域中的应用。     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

石榴皮总黄酮超声波提取工艺的优化

[目的]优化石榴皮总黄酮超声波提取工艺,为石榴皮总黄酮的实际生产应用提供理论依据.[方法]采用单因素试验与正交试验对石榴皮总黄酮超声波提取方法的影响因素进行探讨,并对石榴皮总黄酮提取工艺进行优化.[结果]石榴皮总黄酮最佳的超声波提取条件为：提取温度75℃,提取时间20 min,超声功率400 W,料液比1∶20,超声间歇时间5 s/3 s,提取次数1次,在此条件下总黄酮提取量为59.65 mg/g.[结论]超声波提取石榴皮总黄酮的方法能极大缩短提取时间,避免高温对提取成分的影响,提高石榴皮总黄酮的提取量.     

油松成熟胚总RNA的提取方法

[目的]对油松成熟胚总RNA的提取方法进行比较,以期得到完整的高质量油松成熟胚RNA。[方法]以油松成熟胚为材料,用SDS法、Trizol法和CTAB法及改良的SDS法对油松成熟胚总RNA进行提取,以紫外分光光度计测OD值,并用琼脂糖凝胶电泳检验提取效果。[结果]改良SDS法提取的RNA产率高,完整性好,A260/A280为1.97,A260/A230为2.08,28 S、18 S、5 S条带清晰且28 S亮度是18 S的2倍。通过RT-PCR检测,ds cDNA片段的弥散带分布范围在0.3～3.0 kb,进一步验证改良的SDS法可获得高质量的RNA,用于后续的分子生物学研究。[结论]改良SDS法成本低,操作简单,提取时间短,RNA质量好,是多酚多糖植物总RNA提取比较有效的方法。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

2种提取椰子树RNA方法的比较研究

椰子树组织中富含多糖和酚类化合物,为了获取高质量的RNA,笔者以椰子树叶片和根部为材料,比较分析CTAB法和SDS法提取RNA的效果。结果表明：CTAB法提取椰子树组织的总RNA效果较好,能有效克服酚类物质和多糖对RNA提取的影响。经OD值检测和电泳检测,总RNA的28 S和18 S条带清晰可见,纯度较高,完整性好,无明显降解,以此RNA为模板进行RT-PCR反应,能获得特异条带,表明该RNA完全可以用于后续的分子生物学操作。