鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立

【目的】建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法。【方法】通过腹腔注射酪蛋白生理盐水,从鸡人工腹水中得到白细胞;将收集的白细胞,通过超声波反复破碎、体积分数10%乙酸浸提、低温高速离心、旋转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法,得到抗菌肽粗提物;将得到的粗提物,经CM-Sepharose Fast Flow弱酸性阳离子交换层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化,收集分离的各组分,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性和最小抑菌浓度。【结果】共获得鸡抗菌肽粗提物0.270 g,经RP-HPLC分离纯化,抗菌肽离子交换阳性组分共分离出18个峰,其中6个峰对3种细菌均表现较强的抑菌活性,对鸡大肠杆菌E.coliO78(峰13)、金黄色葡萄球菌S.au-reus1056MRSA(峰15)和白色念珠菌C.albicansATCC10231(峰15)的最小抑菌浓度分别为0.627,0.001和0.035μg/mL。【结论】该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定。     

致仔猪痢疾沙门氏菌特异性噬菌体的分离与纯化

【目的】筛选仔猪痢疾病原菌沙门氏菌特异性噬菌体,为噬菌体制剂的研制和仔猪痢疾的生物防治提供参考。【方法】从患痢疾仔猪粪便中分离致病菌沙门氏菌,鉴定后以其为宿主菌,从生活污水中筛选、纯化出特异性噬菌体,并以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为对照,检测该噬菌体的特异性。【结果】分离到了致病菌沙门氏菌,并得到了纯化的沙门氏菌噬菌体;经检测,该噬菌体只能裂解沙门氏菌,而对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌没有作用。【结论】得到了纯化的可裂解沙门氏菌的特异性噬菌体。     

牛红细胞源抗菌肽的分离纯化与活性鉴定

【目的】分离纯化牛红细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs),并对其体外抗菌活性进行初步检测。【方法】以中国荷斯坦奶牛血液为材料,通过离子交换层析法和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)纯化抗菌肽,用琼脂糖平板扩散法测定其抗菌活性,并用质谱法测定其分子质量。【结果】牛血液红细胞粗提物经离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性;阳离子峰经RP-HPLC纯化后,共得到4个峰(F1、F2、F3和F4),其对大肠杆菌均具有抗菌活性,F1峰和F3峰对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅F1峰对白色念珠菌具有抗菌活性;经质谱分析,F1峰纯化肽的分子质量为2 562.40 u。【结论】成功地从牛红细胞中分离纯化到了AMPs;F1峰中AMPs的抗菌谱较广,抗菌活性较强。     

梅花鹿鹿角盘活性肽的分离鉴定及其抑菌活性分析

【目的】分离和鉴定梅花鹿鹿角盘活性肽,并研究其抑菌活性,为其制备和开发利用提供参考。【方法】利用酸提醇沉法从梅花鹿鹿角盘粉末中提取总蛋白,过0.45 μm滤器后,用凝胶过滤层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等方法,从鹿角盘总蛋白中分离、纯化天然活性肽,利用液相色谱 质谱联用(LC-MS/MS)方法对其进行鉴定,通过二倍稀释法分析天然活性肽对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC);在此基础上,以不添加活性肽的菌悬液为对照,用不同质量浓度的天然活性肽处理大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,检测菌液的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性和电导率,分析天然活性肽对病原菌菌体生长曲线以及细胞壁和细胞膜的影响。【结果】从梅花鹿鹿角盘总蛋白中成功分离出纯度为93.70%的天然活性肽,其相对分子质量为4 543.14,序列与抗菌肽（UNIPORT:A8QJ91）相似,并将其命名为梅花鹿鹿角盘活性肽(sika antler plate bioactive peptide,SAPBP)。SAPBP对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为0.5和1 mg/mL,对以上2种病原菌的生长曲线有明显影响。与对照相比,不同质量浓度SAPBP作用大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌体后,碱性磷酸酶活性和菌液电导率均明显上升,可知SAPBP对病原菌菌体细胞壁和细胞膜造成不同程度的损伤,其中2 MIC SAPBP对病原菌的破坏作用最为明显。【结论】从梅花鹿鹿角盘总蛋白中分离纯化出了天然活性肽,该活性肽对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑制作用。     

蛴螬抗菌肽的制备及其稳定性研究

使用酶解法制备对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都有抑制活性的小分子抗菌肽,以解决滥用抗生素饲料添加剂导致的抗药性和药物残留问题。实验通过单因素分析法和正交实验法,以加酶量、酶解时间、料液比和酶解pH 4个因素,优化制备蛴螬抗菌肽的条件。结果表明,胰蛋白酶为最适合用于制备蛴螬抗菌肽的蛋白酶,制备抗菌肽的最佳酶解条件为:加酶量50.00 ku/g,酶解时间90 min,料液比1∶10(g/mL)和酶解pH 7.50。酶解产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径分别为11.50、8.70 mm。稳定性实验结果表明,蛴螬抗菌肽的最佳作用pH为6.00,高温环境下具有稳定的抑菌效果,对于不同的实验菌,盐浓度对抗菌肽的抑菌效果影响不同;蛴螬抗菌肽具有较好的胰蛋白酶水解稳定性,但不具有胃蛋白酶水解稳定性。制备得到的蛴螬蛋白酶解产物有抗菌效果,可以在农业、医药、食品、畜牧业等领域发挥重要作用。     

从麦胚清蛋白分离制备高活性抗氧化肽

【目的】探究能有效地从小麦胚芽清蛋白二步双酶酶解物中分离得到高活性抗氧化肽的工艺。【方法】以小麦胚芽清蛋白为原料,DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力为抗氧化活性的评价指标,通过胰蛋白酶进行酶解,依次采用超滤膜和凝胶过滤色谱（Sephadex G-75）对酶解产物进行分离纯化,筛选出活性较高的组分;采用碱性蛋白酶对获得的活性较高组分进行酶解,通过凝胶过滤色谱（Sephadex G-15）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化其酶解产物;采用质谱技术（ESI-TOF MS/MS）对抗氧化活性最高的组分进行结构鉴定。【结果】分离得到3个活性组分（峰）P_a、P_b、P_c,采用DPPH法和Fe²⁺螯合能力测定法测定其抗氧化活性的结果都显示,在3个组分中,提取率为23.1%的组分P_b抗氧化活性最强（P＜0.05）,因此选取组分P_b进行下一步碱性蛋白酶酶解。该酶解物经Sephadex G-15分离后得到P_d和P_e两个组分（峰）,经抗氧化活性测定,选取提取率为52.1%的高抗氧化活性组分P_d（P＜0.05）进一步通过RP-HPLC进行疏水性分离,得到P₁、P₂、P₃、P₄、P₅五个活性组分（峰）,其中提取率为7.3%的组分P₃的抗氧化活性最强（P＜0.05）,其DPPH自由基清除率和Fe²⁺螯合能力的EC₅₀值分别为1 mg·mL^-1、0.6 mg·mL^-1。最后通过质谱技术（ESI-TOF MS/MS）鉴定组分P₃的结构,得到其氨基酸序列为AREGETVVPG,分子量为1 013.51 Da,纯度约为85%,与用化学方法合成的多肽AREGETVVPG（纯度95%以上）的抗氧化活性相比,结果没有显著差异（P>0.05）。【结论】二步双酶酶解结合超滤膜、凝胶过滤色谱和RP-HPLC等蛋白分离纯化技术为直接得到单一的高活性抗氧化肽提供了技术参考。     

蝇蛆组织匀浆液及其酶解物中抑菌组分的研究

以人工培养的新鲜蝇蛆为原料,采用磷酸盐缓冲液匀浆,经胰蛋白酶酶解、Sephadex G-15层析分离,筛选到了一组具有抑菌活性的肽类物质。试验结果显示,蝇蛆组织匀浆液对大肠杆菌和沙门氏菌的增殖有显著的抑制作用,对金黄色葡萄球菌的增殖有显著的促进作用,但加热灭活后其抑菌生物活性丧失;匀浆液经胰酶消化后对上述3种细菌增殖的影响没有变化,煮沸灭活后其生物活性也未见显著变化,表现出较高的热稳定性;胰酶消化产物经Sephadex G-15层析柱分离后得到一种组分保持了对沙门氏菌、大肠杆菌增殖的抑制作用和对金黄色葡萄球菌增殖的促进作用。表明蝇蛆组织中存在着有抑菌活性的肽类物质,具有潜在的开发利用价值。     

核桃饼粕酶解物抑菌性的研究

以核桃饼粕为对象,利用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶及其复配物酶解核桃饼粕,测定其对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。结果表明:核桃饼粕的4种单酶酶解物对三种菌均有一定的抑制作用;复配酶酶解物对3种菌的抑制作用明显均高于单酶酶解物,且复配酶酶解物对金黄色葡萄球菌(胃蛋白酶和中性蛋白酶)、枯草杆菌(中性蛋白酶和碱性蛋白酶)大肠杆菌(胃蛋白酶和中性蛋白酶)的抑菌圈直径分别为25 mm、22.3 mm、21 mm;对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的抑菌性与0.8%的乳酸链球菌素的抑菌效果相当,比0.8%的山梨酸钾效果好,对大肠杆菌的抑菌性均优于山梨酸钾和乳酸链球菌素。     

荞麦壳水提取物的抑菌活性

研究天然副产物荞麦壳水提取物对常见的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及沙门氏菌的抑制作用。以甜荞麦壳为材料,热水为提取溶剂,浓缩干燥后得到荞麦壳粗提物质,进一步使用大孔树脂纯化后进行最小抑制浓度(MIC)和抑菌圈试验。结果表明:荞麦壳提取物对大肠杆菌的抑菌效果最为明显,对金黄色葡萄球菌无抑菌活性。荞麦壳粗提物的MIC分别为大肠杆菌10 mg/m L,沙门氏菌和枯草芽孢杆菌均为20 mg/m L。大孔树脂吸附纯化后的样品的抑菌圈明显大于粗提物,证明荞麦壳水提取物中抑菌活性的主要物质为黄酮类化合物。     

牛血液白细胞源抗菌肽的纯化及活性鉴定

为了分离纯化牛白细胞中的抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)并对其体外抗菌活性进行初步分析,以中国荷斯坦奶牛血液为材料,通过离子交换层析法纯化抗菌肽,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)进一步纯化,用双层琼脂糖弥散法测定其抗菌活性。结果表明,通过离子交换层析获得的阳离子峰有抗菌活性,通过RP-HPLC对阳离子峰纯化后获得了6个峰;6个峰液对大肠杆菌和沙门氏菌均具有抗菌活性,峰液F1、F2和F3对金黄色葡萄球菌具有抗菌活性,仅峰液F1对白色念珠菌具有抗菌活性。     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传．     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的纯化技术

应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

黑豆不同部分馏油的体外抗氧化性比较

[目的]通过体外抗氧化体系比较黑豆不同部分馏油抗氧化性活性。[方法]通过正交试验优化索氏提取黑豆馏油的最佳工艺,提取黑豆不同部分馏油;研究黑豆不同部分馏油对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)的清除能力。[结果]在样品浓度为1.0 mg/mL时,黑豆不同部分馏油对·OH的清除率分别为全豆馏油83.9%、豆黄(黑豆去皮部分)馏油64.8%、豆皮馏油17.3%,对DPPH·的清除率分别为全豆馏油41.3%、豆黄馏油33.2%、豆皮馏油77.9%。[结论]黑豆不同部分馏油均具有较好的抗氧化性,是良好的天然抗氧化剂。黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油,对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。     

干旱对合丰42不同部位叶片发育的影响

在垄作、密植两种栽培方式的条件下,研究干旱对大豆不同部位叶片发育的影响。结果表明：无论垄作还是密植,干旱严重影响大豆叶片不同部位叶绿素含量、叶面积及周长的大小、不同部位叶长、叶宽及比值、叶片形状因子等。影响整个植株的生长发育,进而影响作物产量。     

参与式农业基地建设行动方案设计

为了编制实用性强的基地建设行动方案,首先,确定参与式发展的主体,搭建一个“决策框架”;其次,针对行动目标,提出不同参与主体,如管理者、农民、消费者等团队与个人的目标及行动内容;最后,工作应向重塑伙伴式合作关系,挖掘农民自我发展潜力,完成三大角色的转换,打造农业基地文化等方向推进。     

切花菊耐热性鉴定方法研究

以8个切花菊品种为材料,通过对离体叶片进行50℃高温胁迫后,采用电导法、电阻抗图谱法测定电导率、电阻,并对大田栽培植株进行田间高温胁迫试验,比较品种间的耐热性。结果表明:电导法测得的50℃直接相对电导率、修正相对电导率和电阻抗图谱法测得的胞外电阻在品种间有明显差异,但与田间高温胁迫法测定的热害指数不完全一致。电导法和电阻抗图谱法都可以作为测定切花菊耐热性的方法,但需要结合田间耐热性观察。     

崩岗风化壳形成的地质作用

通过对福建省典型崩岗发育区的实地调查和局部钻探研究,探讨了深厚风化壳形成的地质成因.结果表明:构造活动历史是崩岗区形成深厚风化壳的主导因素;构造活动影响崩岗侵蚀动力势能以及各断块遭受侵蚀的历史;侵蚀动力势能和侵蚀历史确定了崩岗发育之前风化壳的厚度.当构造运动条件适合时,岩石的构造节理不发育的区域也可以形成深厚风化壳.