鸡毒支原体F弱毒疫苗株感染SPF鸡对IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10产生的影响

为了解鸡毒支原体（Mycoplasma Gallisepticum,MG）F弱毒疫苗株感染SPF鸡对IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10共4种细胞因子产生的影响,本研究分别以活菌浓度为109（A组）、106（B组）CCU/mL的MG F株及生理盐水（C组）点眼接种SPF鸡,采用ELISA方法对免疫前后外周血4种细胞因子的动态变化规律进行研究。结果显示免疫后A、B组的4种细胞因子浓度明显升高;其中IFN-γ质量浓度A组于第7、14天显著高于其他组（P〈0.05）,B组于第7天显著高于C组（P〈0.05）;IL-2质量浓度各组于第3、5、7天差异显著（P〈0.05）,由高至低以此为：A、B和C组;A组与B组IL-4和IL-10质量浓度差异不显著（P〉0.05）,但两组IL-4质量浓度于第5、7、14天显著高于C组（P〈0.05）;且2组IL-10质量浓度于第5、7、14、21天显著高于C组（P〈0.05）。免疫MG F株可较好的提高IFN-γ、IL-2介导的细胞免疫作用和IL-4、IL-10介导的体液免疫作用,且MG F株活菌浓度与接种鸡的细胞免疫作用呈正相关性。     

免疫鸡毒支原体F弱毒株对SPF鸡Bu-1a~+ B、TCRγδ~+ CD3~+T细胞及血清IgM、IgG、IgA的影响

分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)ccu/mL的(MG)F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用流式细胞技术及ELISA方法对免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)中Bu-1a+B、TCRγδ+CD3+T细胞比例及血清IgM、IgG、IgA的动态变化规律进行研究。结果显示各组Bu-1a+B/PBL于免疫后5、7d由高至低依次为A、B和C组,且各组差异显著(P0.05);A、B组TCRγδ+CD3+T/PBL于免疫后3d略有升高且比值较接近,都高于C组,但差异不显著(P0.05);各组IgM于免疫后7、14和21d差异显著(P0.05),IgG于免疫后14、21和28d差异显著(P0.05),IgA于免疫后28d差异显著(P0.05),由高至低依次为A、B、C组。研究结果表明,免疫(MG)F株可较好的提高Bu-1a+B、血清IgM、IgG、IgA介导的体液免疫作用,且(MG)F株活菌浓度与Bu-1a+B/PBL比值、血清IgM、IgG、IgA浓度呈正相关;但免疫(MG)F株不能显著提高鸡外周血TCRγδ+CD3+T/PBL比值,且(MG)F株活菌浓度与TCRγδ+CD3+T/PBL比值无明显相关性。     

猪脾转移因子与鸡毒支原体F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率影响的研究

为了解猪脾转移因子(TF)与鸡毒支原体(MG)F弱毒疫苗株联合接种对SPF鸡淋巴细胞比率的影响,以活菌数达109 ccu/mL的MG F株0.033 mL/羽与TF 0.02 mL/羽分侧点眼SPF鸡,设为A组;B组以MG F株0.033 mL/羽与生理盐水0.02 mL/羽分侧点眼;C组以生理盐水0.033 mL/羽与TF 0.02 mL/羽分侧点眼;D组以生理盐水0.033 mL/羽和0.02 mL/羽对应分侧点眼,作为对照组.点眼后第7 d采血测定淋巴细胞比率.结果显示,A组(63.9%)、B组(53.8%)和C组(54.6%)的淋巴细胞比率均值分别比D组(41.5%)提高了22.4%、12.3%和13.1%.结果表明,TF与MG F株单独使用均能提高SPF鸡的淋巴细胞比率,且TF与MG F株联合使用后淋巴细胞比率提高值高于单独使用.     

鸡毒支原体油乳剂灭活苗对降低鸡毒支原体垂直传播作用的研究

本试验将30只MG阴性的20周龄的蛋种鸡随机分为4组，Ⅰ组于21和25周龄、Ⅱ组仍于25周龄时分别颈部皮下接种MG油乳剂灭活苗0.5ml/只，Ⅲ组于攻毒后1周接种1ml／只，另设一组对照，不接种疫苗。各组均在29周龄时用通过SPF鸡两次复壮的MG－BG44T株经左胸气囊和鼻腔攻毒。收集攻毒后1－7周内所产的蛋，用PCR方法检测鸡蛋卵黄膜中的MG。结果在攻毒后7周内各免疫组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）的垂直传播率显著低于对照组（P＜0.01），分别比对照组低26.37%、12.8%、13.64%。攻毒后各免疫组和对照组经4次采样均可从喉头拭子中分离到MG但免疫组的分离率较低。攻毒后第7周从对照组鸡的气管、肺、气囊中均可分离到MG，而试验Ⅰ组仅在气管和肺中分离到了MG。试验Ⅰ组和对照组鸡的输卵管、心、肝、脾和肾中均未分离到MG。     

鸡毒支原体烯醇化酶单克隆抗体研制及黏附阻断

通过对鸡毒支原体烯醇化酶的克隆和原核表达,利用表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体,以超声波裂解的MG全菌作为筛选抗原,结果获得了6株特异性单抗,分别命名为：1A4、2D7、2E4、2F4、384和3D8。经间接ELISA、免疫荧光试验及Western blot检测发现：1A4具有荧光效价和高滴度的ELISA效价,但无免疫印迹效价;而其他5株单抗,免疫印迹呈阳性,但无表面染色的活细胞免疫荧光。在所有6株单抗中,仅1A4单抗有MG细胞黏附抑制作用,可导致MG的黏附率降低34．40％,而且1A4与其他5种单抗混合后,则黏附率可下降57．69％。这些抗体的制备将为烯醇化酶生物学活性研究奠定基础。     

反向遗传技术致弱的基因Ⅶ型新城疫病毒对SPF鸡的免疫效力评价

为评估致弱的基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)的免疫效力,本研究采用反向遗传技术构建的一株基因Ⅶ型NDV减毒疫苗株(MG7株),通过滴鼻点眼接种4周龄SPF鸡后,检测其体液免疫、细胞免疫以及攻毒后保护效率和排毒情况等指标,评价MG7株的免疫效果。结果表明:MG7株免疫3周后,能够诱导SPF鸡抗体的产生,且抗体水平(6.08log_2)高于La Sota株免疫组(5.2log_2)。MG7株免疫1~3周内,PBMCs中CD8α+T淋巴细胞亚群比例呈逐渐上升趋势;MG7免疫后第3周,PBMCs中CD4~+T淋巴细胞亚群的比例明显增加(p0.05);同时,MG7株免疫组的血清IFN-γ含量也呈递增趋势,与空白对照组存在极显著差异(p0.01)。此外,以基因Ⅶ型NDV强毒株进行攻毒试验,在攻毒后第2 d~6 d,MG7株免疫组SPF鸡未检测出排毒;LaSota株免疫组则存在不同程度排毒现象,而空白对照组全部死亡。实验表明,与LaSota株免疫组相比,MG7株能够有效诱导NDV特异性抗体产生和T细胞免疫反应,提高SPF鸡的保护效率和有效阻止排毒。本研究对MG7株免疫效力的评估结果表明其具有作为新型基因Ⅶ型NDV疫苗株的潜力,有助于我国ND的防控和根除。     

猪瘟兔化弱毒免疫猪淋巴细胞亚类及转化水平、IFN-γ的变化与分析

为研究免疫猪瘟兔化弱毒(HCLV)对猪细胞免疫应答的影响,本研究分别采用HCLV脾淋毒单独(A组)、HCLV细胞毒与兔脾淋组织液联合(B组)、HCLV细胞毒单独(C组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,应用流式细胞术、淋巴细胞增殖试验及ELISA方法测定免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)亚类比值、PBL非特异性(NSI)及特异性(SSI)刺激指数、IFN-γ浓度。结果显示免疫后各组CD3+/PBL与CD3+CD8+/PBL差异不显著;CD3+CD4+/PBL于第7 d时A、B和对照组显著高于C组(p0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+于第7 d、14 d时A、B和对照组显著高于C组(p0.05),并且C组CD3+CD4+/CD3+CD8+显著降低(p0.05);NSI于第3 d、7 d时A与B组显著高于C组(p0.05),而C组显著高于对照组(p0.05);SSI于第3 d、7 d时A组显著高于B与C组(p0.05),而B与C组显著高于对照组(p0.05);IFN-γ含量由高至低依次为:A、B、C和对照组,并且于第3 d、7 d时差异显著(p0.05)。研究结果表明,HCLV细胞毒引起机体CD3+CD8+相对更快速增殖,而HCLV脾淋毒引起机体CD3+CD4+相对更快速增殖及NSI、SSI、IFN-γ浓度更高,脾淋毒与细胞毒可能侧重不同的免疫分子途径发挥免疫保护效力;兔脾淋组织液对NSI和IFN-γ浓度具有增强作用。     

短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗CH-1R株的免疫增强作用研究

为评价一种短肽佐剂对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) CH-1R弱毒疫苗的免疫增强效果,本研究分别采用CH-1R疫苗株单独(单独免疫组)、CH-1R疫苗株与短肽佐剂共同(共同免疫组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,4周后以高致病性PRRSV (HP-PRRSV)TJ-F5攻毒,并采用流式细胞术对攻毒前后淋巴细胞亚类T、Th、Tc及NK进行绝对和相对计数.结果显示攻毒后共同免疫组仅在第3d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,28 dTc/T显著高于单独免疫组,临床症状和各组织器官病理变化轻微;单独免疫组在攻毒后第3d淋巴细胞亚类数量显著下降后回升,之后于第14和15d再次显著下降后又回升,临床症状和各组织器官病理变化比共同免疫组严重,但比对照组明显减轻.单独免疫组、共同免疫组及对照组的攻毒保护率分别为40％、80％、0.研究结果表明,短肽佐剂配合CH-1R弱毒疫苗具有缓解HP-PRRSV T J-F5的免疫抑制、增强细胞免疫及提高免疫保护力的作用;在抵抗HP-PRRSVT J-F5攻击时,共同免疫组的免疫保护力明显高于单独免疫组.     

鸡毒霉形体病弱毒疫苗免疫效力的测定

用引自美国的鸡毒霉形体温度敏感突变株 T_(S100)制成新鲜培养物滴鼻接种7日龄伊莎褐蛋鸡(单苗免疫组)以及同时用 T(S100)滴鼻和 NDⅡ系滴眼(联苗免疫组)。在接种后第15、30、67、105和135天,各取10只免疫鸡和非免疫对照鸡,用 S_6强毒株进行气囊     

猪脾转移因子提高LaSota株鸡新城疫弱毒疫苗的免疫保护率

旨在了解猪脾转移因子（TF）对新城疫病毒（NDV）弱毒疫苗LaSota株的免疫增强效果及机制。本研究分别采用不同剂量（10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份） LaSota疫苗株单独（单独免疫组）、LaSota疫苗株与TF联合（联合免疫组）免疫SPF鸡,14 d后以NDV F₄₈E₉强毒攻毒,同时设立对照组（非免疫攻毒）和空白组（非免疫非攻毒）,并采用ELISA方法与蛋白质芯片技术分别测定外周血IL-4、IFN-γ与IL-12 P40浓度。结果显示,鸡免疫10^-2、10^-3、10^-4、10^-5羽份时疫苗攻毒保护率和半数保护量（PD₅₀）如下：单独免疫组分别为100%、55%、0%、0%和0.000 8羽份,联合免疫组分别为100%、75%、0%、0%和0.000 5羽份,对照组和空白组死亡率分别为100%和0%。免疫10^-3羽份疫苗后,联合免疫组IL-4和IFN-γ含量均高于其他组,并于第7、14天差异极显著（P<0.01）;攻毒后,联合免疫组IL-4、IFN-γ和IL-12 P40含量均高于其他组,IL-4于第1、14天,IFN-γ于第1、3天,IL-12 P40于第1天差异极显著（P<0.01）。综上表明,TF可增强IFN-γ、IL-12介导的细胞免疫和IL-4介导的体液免疫,提高LaSota株弱毒疫苗的免疫保护率,降低疫苗PD₅₀;在抵抗NDV F₄₈E₉强毒攻击时,联合免疫组的免疫保护率明显高于单独免疫组。     

MTT法评价猪口蹄疫合成肽疫苗的细胞免疫应答

为评价猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪后的细胞免疫应答,用含有E、F两种多肽抗原的猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪,二免后两周采血分离猪外周血淋巴细胞,再用E、F两种合成肽及二者混合物对淋巴细胞刺激培养48 h,用MTT法检测特异性T淋巴细胞增殖反应。结果显示,在抗原E、F混合物浓度为50μg/mL时,抗原对免疫组淋巴结细胞的刺激增殖作用显著高于未免疫对照组（P〈0.01）。表明,该猪口蹄疫合成肽疫苗免疫猪能有效引起特异性T淋巴细胞免疫应答。     

鸡毒支原体感染病理模型复制

以鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)S6标准菌株不同浓度接种16日龄雏鸡,5d后用鸡新城疫疫苗(I系)诱导发病,对以鸡新城疫为诱导因子的鸡毒支原体野外环境病理模型复制进行研究。结果表明:鸡毒支原体S6攻毒菌液浓度为109CCU/mL,攻毒后第5天,用鸡新城疫疫苗(I系)喷雾,5羽份/只,进行激发,可成功复制出鸡毒支原体感染病理模型。     

猪圆环病毒2型ORF2／猪白介素2嵌合表达质粒在猪体内诱导的保护性免疫反应

为探讨猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2／猪白介素-2（PoIL-2）嵌合重组表达质粒（rpcDNA3．1／PCV2-linke PoIL-2）在猪体内的免疫效果和免疫保护效果进而研制高效PCV2核酸疫苗,将35只10日龄健康仔猪平均分成7组分别以rpcDNA3．1／PCV2-linker-PolL2重组表达质粒或PCV2ORF2基因原核表达的rCap蛋白进行免疫及免疫保护试验。共进行4次肌肉注射免疫,每次间隔2周;于第4次免疫后3周通过口腔和鼻腔途径感染PCV2细胞强毒。分别于第4次免疫后和攻毒后不同时间通过检测免疫猪血清抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖活性、辅助性T细胞（Th）和细胞毒性T细胞（Tc）亚群的百分含量、排毒率和病毒血症阳性维持时间等指标以评价其免疫和免疫保护效果。结果表明,各免疫组猪均产生了抗PCV2特异性EI。ISA免疫抗体,但rCap蛋白免疫组猪抗体水平较低;rpcDNA3．1／PCV2qinker-PolL-2质粒对猪体的免疫和免疫保护效果显著优于rpcDNA3．1／oRF2质粒;在rpcD—NA3．1／PCV2-linkePolL-2质粒或rpcDNA3．I／ORF2质粒中添加rCap蛋白对重组质粒免疫及免疫保护效果无明显影响。因此,选取rpcDNA3．1／PCV2-linkerPoIL-2质粒为下-步研制PCV2核酸疫苗的主要成分。     

The correlation of virus-specific interferon-gamma production and protection against classical swine fever virus infection.

The level of antigen-specific interferon-gamma (IFN-gamma) production can be used as an indicator of cellular immunity. In this study, we investigated the role of cellular immune response in protection against classical swine fever virus (CSFV). Pigs were vaccinated once with CSFV vaccine and challenged 6 days post-vaccination (dpv). Vaccinated animals had significantly higher CSFV-specific IFN-gamma secreting cells than the unvaccinated pigs (p<0.05) at the time of challenge and were protected against CSFV infection, whereas the control pigs died within 14 days post-infection (dpi). In the second experiment, pigs were vaccinated once with either CSFV vaccine or CSFV vaccine combined with Aujeszky's disease (AD) vaccine and challenged at 140 dpv. All vaccinated pigs developed both CSFV-specific, cellular and antibody responses and were protected against CSFV infection. However, differences in cellular, but not antibody, responses were observed in the two vaccinated groups. The group vaccinated with CSFV vaccine developed a significantly higher number of CSFV-specific, IFN-gamma secreting cells (p<0.05), exhibited a shorter fever period and less pathological changes, when compared with the group vaccinated with the combined vaccine. The kinetics of IFN-gamma production, following challenge in the two vaccinated groups, were also different. Taken together, our results indicated that CSFV-specific, IFN-gamma production could be detected early after antigen exposure and correlated with protection against CSFV challenge. Our findings highlight the role of cellular immune responses in porcine anti-viral immunity.     

高乌甲素对犬围术期血清β-EP、IL-2水平的影响

为探讨高鸟甲素对犬围术期血清β-内啡肽（β-EP）、白细胞介素-2（IL-2）水平的影响,了解犬术后镇痛、调节免疫、减少应激的方法与途径,选取健康本地犬20只,随机均分为4组（A、B、C、D组）,分别进行耳廓部分切除术。A组和B组在麻醉前分别于肌肉注射高鸟甲素注射液0．4、0．8mg／kg;C组在麻醉前于肌肉注射复方氨林巴比妥注射液2mL;D组不采取任何镇痛措施。各组动物分别于术前（T1）、术毕（T2）、术后4h（T3）、术后12h（T4）、术后24h（T5）无茵采集外周血液,测定血清中pEP、IL-2的含量,分析统计各数值的变化。结果显示,术后各组犬的血清β-EP含量均有不同程度升高,其中B组只在T2和T3与术前有显著差异（P〈0．05）,而A、C、D组术后各时间点β-EP含量与术前相比均有显著差异（P〈0．05）或极显著差异（P〈0．01）。各组犬的血清IL-2含量在T1后都有下降,并于T3后开始上升;B组在术后各时间点与术前相比均无明显差异（P〉0．05）,且变化幅度最小;A组只在T3和T4与术前相比有显著差异（P〈0．05）;C、D组术后各时间点与术前相比均有显著差异（P〈0．05）或极显著差异（P〈0．01）。结果表明,高鸟甲素能够有效抑制犬术后血清俨EP升高和IL-2降低的幅度,可以作为动物临床镇痛的有效药物使用,在本试验设定的剂量中,运用高鸟甲素0．8mg／kg对犬术后镇痛、调节免疫、抗应激的效果较好。     

牛羊专用中草药保健型饲料添加剂对大鼠免疫功能的影响

试验选择30～40日龄的Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠,分别按1.5mL/100g体重的量灌胃奶牛、肉牛和肉羊中草药饲料添加剂浸膏（浓度为312.5mg/mL）,对照组灌胃等量蒸馏水。试验第31天宰杀,无菌采血制抗凝血作T-淋巴细胞转化率试验,同时取脾脏和胸腺计算脾脏和胸腺指数。试验表明,各组全期增重均显著高于对照组（P〈0.05）、各实验组胸腺指数均高于对照组,且奶牛和肉牛中草药添加剂组达到显著水平（P〈0.05）,脾脏指数各组间差异不显著（P〉0.05）;各试验组T-淋巴细胞转化率均显著高于对照组（P〈0.05）,说明牛羊专用中草药保健型饲料添加剂能显著提高大鼠的细胞免疫功能。     

高乌甲素对犬术后血浆PGE_2含量的影响及其镇痛机理

选取18只健康杂交雌犬,随机分为A、B、C、D、E、F共6个组,每组3只。A、B、C、D、E组均实施子宫卵巢摘除术制作动物疼痛模型;F组不做手术作为对照组。A、B、C组分别一次性皮下注射高乌甲素0.2、0.4、0.8 mg/kg,D组口服卓比林（20 mg/kg）;E组不给与镇痛治疗。各组动物均在术前、术毕、术后2、6、12、24 h等时间点进行疼痛评分并采血测定血浆中前列腺素E2（PGE2）含量。结果显示：E组术后PGE2含量随时间增加而显著升高;高乌甲素能显著降低术后血浆PGE2含量（P〈0.05）,B组效果最佳;D组与B组无显著差异（P〉0.05）。术后各组的疼痛评分,D组与B组差异不显著（P〉0.05）。结果表明,高乌甲素的镇痛效果与卓比林相当,且其镇痛机理可能是通过抑制PGE2生成来实现的。     

苜蓿多糖对新城疫弱毒苗免疫效果的影响

为了研究苜蓿多糖对新城疫弱毒苗免疫鸡所产生的免疫调节作用,本研究选择1日龄海兰雏鸡120羽,随机分为4组,每组30羽,7日龄每羽用鸡新城疫活疫苗（La Sota株）免疫,28日龄以相同剂量进行加强免疫。其中3个试验组从7日龄开始分别肌肉注射低、中、高剂量（10、25、50μg/mL）的苜蓿多糖,对照组注射生理盐水,1次/d,连用7 d。于14、21、28、35、42、49、56日龄,通过静脉采血,用MTT法检测外周血淋巴细胞吸光度值（OD值）;同时用微量法检测血清中新城疫病毒血凝抑制（HI）抗体效价。结果显示,苜蓿多糖能够显著提高外周血淋巴细胞OD值,中剂量组（25μg/mL）淋巴细胞OD值最大;苜蓿多糖能够显著提高血清中新城疫病毒HI抗体效价,中剂量组免疫后期抗体存在时间长,抗体高峰期持续时间也长。本试验表明合适剂量苜蓿多糖对新城疫弱毒苗的免疫效果有明显的增强作用。     

脂质体包被鸡IL-18可增强新城疫活疫苗的免疫效果

首次将重组鸡白细胞介素18(mChIL-18)用脂质体包被,将不同浓度的mChIL-18脂质体联合新城疫疫苗对鸡群进行免疫,观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。1日龄SPF鸡分为6组,分别为空白对照组、单纯疫苗组、新城疫疫苗+0.2mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.1mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.3mL mChIL-18组和新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡于7日龄免疫,免疫后每周抽取外周血及外周抗凝血,应用血凝抑制试验和流式细胞仪来检测免疫鸡的HI抗体水平及CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化情况。并于最后一次采血后,对各组试验鸡应用F48E9标准强毒进行攻击(100ELD50.只-1)。结果表明mChIL-18脂质体的最佳剂量为0.2mL.只-1,其不仅能够显著增强机体的细胞免疫和体液免疫,而且还可以明显提高新城疫疫苗的保护率。