miRNA-181b在牛腺垂体中的表达规律及其调控作用研究(英文)

[目的]探索miRNA-181b在成熟(18月龄)和未成熟(1月龄)牛腺垂体中差异表达量及其调控功能。[方法]通过构建成熟(18月龄)和未成熟(1月龄)的延边黄牛腺垂体组织miRNAcDNA文库,对文库中的miRNA进行Solexa高通量深度测序,并对公牛腺垂体中的miRNA进行鉴别。从测序结果中挑选出具有差异表达的miRNA-181b,经实时荧光定量PCR验证其在不同发育期延边黄牛腺垂体中的表达规律,并通过TargetScanS预测miRNA-181b的靶基因。[结果]miRNA-181b在不同发育期牛腺垂体表达量存在显著差异,1月龄公牛腺垂体中miRNA-181b表达量是18月龄的4.05倍。miRNA181b与FSHβ基因3 非编码区838 ~844碱基可能是特异结合,其结合碱基为UGAAUGUA。[结论]该研究为FSHβ的转录后调控研究提供了理论依据。     

延边黄牛与韩延F1幼牛生长发育规律分析

通过对延边黄牛和韩延F1牛体重和体尺的对比,分析其生长发育规律,结果表明,韩延F1牛各月龄体重均高于延边黄牛;延边黄牛公、母牛体长的生长发育速度在8月龄左右快于体高,而韩延F1公、母牛的体长的生长发育在4月龄左右就已经快于体高;韩延F1公牛坐骨宽的发育也早于延边黄牛公牛,按性别来说,6月龄前母牛的后躯宽度(腰角宽、坐骨宽)生长强度较公牛大,6~18月龄公牛逐渐超过母牛.     

阉割对延边黄牛脂肪沉积的影响及相关基因表达研究

本试验通过研究阉割对延边黄牛脂肪沉积的影响及相关基因的表达,试图探索肉牛脂肪沉积的影响因素和分子机制。选择年龄、体重相近,相同条件下饲养的延边黄牛公牛和阉牛各15头,育肥至36月龄屠宰,测定脂肪沉积相关性状,并分析ANGPTL4、DGAT2和FABP4基因mRNA的表达变化。结果表明,延边黄牛阉牛肌内脂肪含量显著高于公牛(P0.05),背膘厚极显著高于公牛(P0.01),大理石花纹等级显著高于公牛(P0.05),说明阉割处理后的延边黄牛胴体和肌内脂肪沉积量显著增加。阉牛的ANGPTL4和DGAT2基因的mRNA表达量显著高于公牛,FABP4基因mRNA表达量极显著高于公牛(P0.01),说明阉割处理的延边黄牛ANGPTL4、DGAT2和FABP4基因的mRNA表达量增加,促进了脂肪沉积。     

延边黄牛与韩延牛血液Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响

[目的]从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome(外胞体),研究2种外胞体对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响。[方法]通过超高速离心等方法,从延边黄牛和韩延牛血液中分离Exosome,并以100 ng/m L的浓度分别转染给原代培养的延边黄牛垂体细胞培养12、24和48 h,对细胞上清液中GH含量进行检测。[结果]电镜下延边黄牛与韩延牛血液Exosome均呈圆形或椭圆形的双层膜小囊泡,直径均为30~100 nm,膜结构完整。韩延牛Exosome处理组的延边黄牛垂体细胞GH mRNA表达显著高于延边黄牛Exosome处理组(P0.05)。韩延牛血液Exosome处理组垂体中GH的含量显著高于延边黄牛血液Exosome处理组(P0.05)。[结论]延边黄牛和韩延牛血液中的Exosome对延边黄牛垂体细胞中GH含量的影响有明显差异。     

黑毛和牛与延边牛杂交F1代和F2代生长性能和体尺测量

[目的]了解黑毛和牛与延边牛杂交的效果。[方法]对不同阶段(6、12、18、24月龄)F₁、F₂代体重、体高、体斜长、胸围、管围等指标进行测定。[结果]F₂代公牛6、12、18、24月龄体重均显著高于F₁代(P<0.05),不同月龄F₂代母牛体重与F₁代无显著差异；18月龄F₂代公牛体斜长显著高于F₁代(P<0.05);不同月龄F₂代无论公牛还是母牛胸围均显著高于F₁代(P<0.05);F₂代公牛腹围在6月龄、12月龄、18月龄均显著高于F₁代(P<0.05);F₂代母牛各月龄腹围均显著高于F₁代(P<0.05);F₂代公牛6月龄十字部高、24月龄管围显著高于F₁代(P<0.05);F₂     

CAPNl基因4685位点与肉质嫩度相关性研究

[目的]探索延边黄牛与草原红牛钙蛋白酶I（CAPNl）基因4685位点对肉质嫩度的影响。[方法]采用PCR—RFLP技术对草原红牛、延边黄牛CAPNl基因第14内含予区4685位点进行基因多态性与肉质嫩度进行分析,验证该位点在吉林省地方品种牛中的作用。[结果]该位点与肉质嫩度相关检测指标（蒸煮损失、肌纤维直径、剪切力、滴水损失等）密切相关,均表现为T等位基因的存在能够显著提高个体的嫩度水平,但该位点与pH无关。4685位点与屠宰性状（净肉重、胴体重、净肉率等）无关,仅与眼肌面积存在一定的相关性。[结论]延边黄牛与草原红牛CAPNl基因4685住点与肉质嫩度存在密切相关。     

延边黄牛公牛与阉牛产肉性能的比较

为研究延边黄牛公牛和阉牛产肉性能,选择品种相同、年龄体重相近、生长发育正常的延边黄牛肉牛16头,随机分成2组,每组8头,其中试验组为阉牛,对照组为公牛,育肥373d．结果表明：21月龄时,公牛组和阉牛组平均体重分别为468．63和448．88k,差异显著（P〈0．01）;公牛组和阉牛组的末重分别为542．38和488．63kg,差异极显著（P〈0．01）;公牛组和阉牛组平均日增重分别为0．71和0．57kg,公牛组的平均日增重比阉牛组提高25．4％,差异极显著（P〈0．01）．阉牛组牛肉的外观肉色呈亮红色,属较理想肉色,公牛组牛肉颜色红色稍暗,差异显著（P〈O．05）;阉牛组牛肉脂肪颜色为白色,公牛组白色稍黄,差异不显著（P〉0．05）;大理石状花纹阉牛组优于公牛组．肌内脂肪含量阉牛组比公牛组高23．04％,差异显著（P〈0．05）,粗蛋白含量公牛组比阉牛组高4．41％,差异显著（P〈0．05）,粗灰分含量则差异不显著．     

延边黄牛白细胞介素2的基因克隆和序列分析

为建立延边黄牛白细胞介素2（IL-2）的基因克隆和序列分析的合理方法体系进行该研究．采集1月龄犊牛静脉血,用密度梯度离心法获取白细胞层,对白细胞进行总RNA的提取,并构建cDNA文库,根据Genbank牛IL-2基因序列（登录号：M12791．1）设计1对特异性引物,用反转录PCR（RT-PCR）技术扩增出目的基因片段,与克隆载体PMD18-T连接,并进行PCR和酶切鉴定,酶切结果为阳性的进行序列分析．结果表明：PCR扩增出大小为261bp的部分IL-2基因片断,与预期的片段大小一致;此序列与Genbank上牛IL-2从141～401bp片段的同源性为100％．     

不同肉牛品种间杂种优势预测

[目的]预测西门塔尔杂交牛（西杂牛）与不同品种牛之间的杂种优势。[方法]以西杂牛为母本,利木赞牛、红安格斯牛、夏洛莱牛、德国黄牛为父本,利用微卫星标记对不同牛种间的遗传距离进行分析,并预测杂种优势。[结果]西杂牛与德国黄牛的遗传距离最大,为1.2598,其次是利木赞牛（1.0546）、红安格斯牛（0.8867）和夏洛莱牛（0.5997）。[结论]西杂牛与其他品种牛之间的杂种优势依次为德国黄牛〉利木赞牛〉红安格斯牛〉夏洛莱牛。     

神经肽Y在肥胖小鼠垂体中的分布及表达变化

[目的]研究神经肽Y在营养性肥胖小鼠垂体的分布与表达,探讨其对营养性肥胖的调节作用。[方法]采用饲料饮食性营养造模,通过免疫组织化学SP法及图像分析法进行研究。[结果]神经肽Y在小鼠的腺垂体和神经垂体中均有表达,在腺垂体呈索状排列,中间部分较为分散。与对照组相比,腺垂体的NPY免疫反应阳性细胞数目增多,表达量明显增加（P〈0.05）,神经部的NPY免疫阳性纤维的密度增大,但表达量变化不明显。[结论]神经肽Y自身参与动物营养摄入,并通过影响其他食欲肽调节动物的体重。     

野桑蚕中肠组织cDNA文库的构建及丝氨酸蛋白酶基因片段的克隆与序列分析

[目的]构建野桑蚕中肠组织cDNA文库并分离其丝氨酸蛋白酶基因。[方法]利用TaKaRa公司生产的cDNA Library Construction Kit构建了野桑蚕中肠组织的cDNA文库,并采用测序法克隆分析丝氨酸蛋白酶基因cDNA。[结果]经鉴定,文库的滴度达6.2×105pfu/ml,文库插入片段的平均大小为1.2 kb左右。从文库的测序结果中获得了野桑蚕丝氨酸蛋白酶基因片段(登录号:EU672968),序列分析结果显示:该基因片段由854个核苷酸组成,编码284个氨基酸残基。通过对该基因片段编码的氨基酸和其他10种昆虫的丝氨酸蛋白酶基因编码的氨基酸的同源性分析,发现该氨基酸序列与其他丝氨酸蛋白酶具有一定的同源性。[结论]该基因的发现对于研究家蚕和野桑蚕对外来入侵物的抗性具有重要意义。     

Kiss-1基因在猪初情期下丘脑-垂体-卵巢轴中的定位研究

[目的]为阐明猪的生殖机理和选育早熟品种奠定基础。[方法]采用免疫组化技术研究Kiss-1 mRNA在初生以及30、60、70(初情期)和90日龄小梅山猪的下丘脑、卵巢和垂体内的定位,并利用放射免疫分析(RIA)方法观察母猪血浆LH、FSH含量的变化。[结果]Kiss-1 mRNA在小梅山猪下丘脑、卵巢、垂体中均有表达,以下丘脑弓状核阳性颗粒最多,尤其初情期时最为明显。各级卵泡中以初情期成熟卵泡的阳性颗粒数目最多。Kis-s1 mRNA表达量在小梅山猪下丘脑、垂体和卵巢从初生到初情期逐渐上升,并在初情期达到顶峰,而后逐渐下降。小梅山猪血浆LH、FSH浓度初生时较高,随后迅速下降,60日龄又升高,70日龄达到峰值。[结论]Kiss-1基因是控制猪初情期启动的关键因子     

microRNA表达水平检测技术的研究进展

[目的]综述microRNA(miRNA)表达检测技术的研究进展,为miRNA表达研究及阐明其调控功能奠定基础。[方法]通过概述miRNA表达水平检测技术的原理、特点及进展,说明如何简便有效地检测其表达。[结果]miRNA是一类重要的非编码小RNA分子,调控一系列重要生命过程,其表达研究是研究其调控功能的重要途径,用于检测miRNA表达的方法主要有Northern blot、原位杂交(In Situ Hybridization,ISH)、表达谱芯片、RT-PCR以及克隆测序。[结论]该研究为简便有效地检测miRNA表达提供了方法,为阐明其对动植物重要生命过程的调控机理奠定了基础。     

胰岛素对初情期前母猪垂体细胞促性腺激素释放及生长激素分泌的影响

[目的]探讨胰岛素对猪垂体前叶细胞无血清单层培养细胞分泌促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、生长激素(CH)的影响。[方法]24头140日龄、体重17 kg的母猪被分成高、中、低3个能量组,利用无血清单层培养垂体模型,并用放射免疫法测定细胞液促卵泡素、促黄体素和生长激素浓度。[结果]在不同能量水平上,胰岛素对单层无血清培养垂体细胞FSH、LH及GH释放能力的影响有显著差异(P<0.05),高能组较高,低能组较低。[结论]首次研究了在初情期前母猪体外培养垂体细胞中添加胰岛素对垂体细胞分泌激素的影响,证实代谢激素在初情期前母猪下丘脑-垂体-卵巢水平上调节生殖机能。     

犊牛卵泡液多肽信息分析

[目的]了解成年牛和犊牛卵泡液中多肽的信息表达差异,为完善犊牛卵泡液基础研究及犊牛卵母细胞体外培养体系奠定基础.[方法]采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）对超排成年牛和超排犊牛卵泡液中的肽段进行分析,根据多肽的信号峰信息,通过MASCOT数据库进行蛋白检索.[结果]从成功构建的成年牛与犊牛卵泡液质谱多肽信号峰模型图谱可知,超排犊牛卵泡液多肽表达图谱中有60～80个信号峰,而超排成年牛的有30～40个信号峰;其中成年牛卵泡液有两个特有信号峰,质荷比为1218.58和1509.77 m/z,犊牛有1个特有信号峰,质荷比为953.54 m/z.利用MASCOT数据库对获得的卵泡液多肽信息进行蛋白检索,发现成年牛卵泡液中有18种蛋白,犊牛卵泡液中有11种蛋白.[结论]犊牛卵泡液中蛋白多肽信息峰数量多于成年牛,但卵泡液中总蛋白数量少于成年牛,这种差异可能是导致犊牛卵母细胞发育能力低于成年牛的重要原因之一.     

藏黄牛与宣汉黄牛心脏miRNA表达谱比较

【目的】miRNA作为一类非编码RNA,广泛参与机体多种生命活动,研究旨在挖掘miRNA在藏黄牛和宣汉黄牛心脏组织中的差异miRNA,为进一步研究藏黄牛低氧适应的分子机制提供基础数据。【方法】随机选取健康的藏黄牛和宣汉黄牛各3头,迅速采集其心脏组织,使用Trizol法提取RNA,琼脂糖凝胶电泳切胶选取18—30nt的片段,连接3'端和5'端,反转录后进行扩增,凝胶电泳切胶纯化后建立藏黄牛和黄牛各3个文库,利用Illumina HiSeq4000测序平台进行高通量测序;将测序得到的序列进行过滤,比对GenBank和Rfam数据库,筛选出藏黄牛和宣汉黄牛的差异miRNA,进行功能注释及信号通路富集分析;随机选择8个miRNAs,利用实时荧光定量PCR检测其在心脏组织的表达量,以验证测序数据的准确性。【结果】藏黄牛和宣汉黄牛心脏组织的高质量读值的序列分别为17 463 446条和13 662 812条,干净读值为16 552 296条和12 055 304条,且在藏黄牛和宣汉黄牛中高质量核酸序列长度富集最多的均是21nt,分别为37.5%和32.1%;且共筛选出219个差异miRNAs,其中48个显著上调,171个显著下调;GO功能注释得到差异miRNA靶基因分子功能中显著富集的条目有22条,如,GO:0005488（结合）、GO:0005515（蛋白质结合）和GO:0043167（离子结合）;细胞组分中显著富集的条目有20条,如,GO:0005623（细胞）、GO:0044464（细胞组分）和GO:0005622（细胞内）;生物过程中显著富集的条目有13条,如,GO:0035556（细胞内信号转导）、GO:0032774（RNA生物合成过程）和GO:0006351（转录,DNA模板化）,KEGG信号通路分析得到差异表达miRNAs靶基因显著富集到胰岛素信号通路（139个靶基因）、mTOR信号通路（38个靶基因）和HIF-1 信号通路（92个靶基因）等232个信号通路中,其中有12个靶基因共同作用于这3个信号通路,说明miRNAs可能通过这3个信号通路,共同参与藏黄牛低氧适应性的调控;随机选取8个miRNAs进行荧光定量验证,其表达趋势与测序结果表达趋势基本一致,表明高通量测序数据可信度较高。【结论】得到了miRNA在藏黄牛与宣汉黄牛心脏组织中的表达谱,为揭示藏黄牛低氧适应性的调控机制研究奠定了基础。     

赖氨酸对大鼠空肠黏膜损伤及自噬的缓解作用

【目的】本试验旨在研究赖氨酸对热应激后大鼠空肠上皮损伤的缓解作用及其自噬调控机制。【方法】利用人工气候箱以40℃下处理2h高温环境建立大鼠热应激模型,SD大鼠共18只,体重为(200±20)g,适应性饲养3d后随机分为对照组(C),热应激组(HS)和赖氨酸预处理后热应激各试验组(L-Lys+HS)。检测大鼠热应激前后体重变化,HE染色观察肠道上皮细胞的形态学损伤,RT-PCR检测MiRNA-23b以及自噬标志分子LC3B的表达变化。【结果】大鼠热应激预处理组中,赖氨酸饲喂高浓度(1.0%)对热应激后大鼠体重改善效果最佳;赖氨酸预饲喂大鼠后再热应激,大鼠空肠上皮损伤程度减轻;与自噬相关的LC3B的表达显著抑制,同时MiRNA-23b表达显著上升。【结论】预处理组中,1.0%高浓度赖氨酸的饲喂能够显著缓解热应激对大鼠空肠上皮的损伤,其中氨基酸通过MiRNA-23b对热应激引起的空肠上皮细胞的自噬有一定的缓解作用。     

猪IRGC基因的克隆与序列分析

[目的]对猪IRGC基因进行序列分析,为进一步研究其功能奠定基础。[方法]采用EST信息和测序相结合的方法分离了猪IR-GC基因,并与人、牛、犬和猩猩IRGC基因进行序列相似性分析。[结果]获得了1 558 bp的cDNA序列,其登录号为EU703776,与人、牛、犬和猩猩IRGC基因的序列分别有86%、90%、91%和84%的相似性。序列分析表明,该基因编码的464个氨基酸与人、牛、犬和猩猩的相似性分别达到了90%、93%、95%和90%。[结论]成功提取了猪IRGC基因,其具有人、牛、犬和猩猩类似的结构和功能。     

鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆·鉴定及其差异表达分析

[目的]进行鲤鱼白细胞介素-1β（IL-1β）全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析。[方法]利用DD-RTPCR方法获得差异表达cDNA片段,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行筛选,克隆了鲤鱼IL-1β的全长cDNA,并进行了序列分析和差异表达分析。[结果]获得的阳性克隆含有1个大小为831 bp编码276个氨基酸的完整开放阅读框。聚类分析表明,鲤鱼IL-1β氨基酸序列与日本鲤鱼紧密聚为一支,氨基酸序列的同源性达95%,之后聚类顺序依次为鲫鱼、斑马鱼、猪、牛、马、人和小鼠。差异表达分析表明,经有丝分裂原刺激后前期（4 h）白细胞中IL-1β的表达量显著增大,但随着时间推移（12,24 h）并非一直较同期大,表达量总体趋势成峰形。[结论]为进一步研究IL-1β在体内的表达方式、功能特点和调控机理以及在炎症反应、应急反应和免疫应答的作用机制奠定了基础。