北京地区猫杯状病毒和疱疹病毒流行病学调查

为了调查猫杯状病毒(FCV)和疱疹病毒(FHV)在家养猫中的流行情况,对中国农业大学动物医院进行FCV和FHV PCR检测的412例病例进行流行病学调查,结果显示,有呼吸道症状的患猫FCV和/或FHV感染的总发生率为60.2%,其中FHV和FCV的阳性率分别是26.3%和46.3%,混合感染的发生率为11.8%。对性别、品种、年龄因素与FHV和FCV感染的相关性分析显示,家养长毛猫与FHV感染呈显著正相关(P<0.05,OR=3.25),波斯血统猫与FHV感染呈显著负相关(P<0.05,OR=0.32)。其他因素与FCV和FHV感染均无相关性(P>0.05)。症状与FCV或FHV感染的相关性统计显示,FCV感染与打喷嚏和口腔溃疡呈显著相关(P<0.05),而与眼、鼻分泌物、结膜炎和咳嗽等症状无显著相关性(P>0.05);FHV与上述所有临床症状均无显著相关性(P>0.05)。猫的FHV和FCV感染率在北京地区的发病率相对较高,临床中应提高预防意识。     

猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用

为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus, FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。结果显示：能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。结果表明：研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为...     

猫杯状病毒CH-JL2分离株对猫的致病性研究

为研究猫杯状病毒(FCV)CH-JL2分离株对猫的致病性,本研究采用滴鼻方式分别以10~(8.97)TCID_(50)/mL、10~(7.97)TCID_(50)/mL与10~(6.97)TCID_(50)/mL的病毒液(0.5mL/只)感染6~11周龄健康未免疫中华田园猫,通过对临床症状、体温、排毒情况、组织病理变化以及组织中病毒分布情况的观察与监测,评价其致病性。结果显示,不同滴度的FCV CH-JL2分离株感染猫均可发病,发病率依次为100%、50%与25%,FCV感染5d后,感染猫开始排毒,出现体温升高、鼻眼分泌物增多、口腔溃疡等典型临床症状,但在感染猫的肺脏、心脏、脾脏、气管等全身组织脏器中均未检测到FCV的分布。结果表明CH-JL2分离株不同于FCV VSD株,感染猫后仅可引起上呼吸道感染,不能造成全身感染。本研究为FCV的防制奠定了基础。     

野生猫科动物杯状病毒感染的诊治

猫杯状病毒感染又称猫传染性鼻-结膜炎，是由猫杯状病毒引起的猫科动物的一种多发性口腔和呼吸道传染病。2002年4月我园动物表演场一批猫科动物(猎豹、东北虎、非洲狮)发生以采食困难、流涎、口腔溃疡为特征的传染病。经临床及实验室检查，确诊为杯状病毒感染(Feline Calicivirus，FCV)，现报告如下。     

北京地区306例猫上呼吸道感染主要病原调查

为了了解引起猫上呼吸道感染的病原情况, 2016年5月至2017年2月,采集来自中国农业大学动物医院就诊的276例和北京某猫舍的30例具有上呼吸道感染症状的患猫的眼、鼻和口咽拭子,通过PCR/RT-PCR方法扩增猫疱疹病毒(FHV)、猫杯状病毒(FCV)、支原体和衣原体4种病原体的核酸段。结果显示,306份被检样本中,检出支原体111份(36.3%),猫杯状病毒102份(33.3%),猫疱疹病毒67份(21.9%),衣原体4份(1.3%)。其中FCV与支原体混合感染32例,FHV与支原体混合感染19例,FCV与FHV混合感染13例,支原体与衣原体混合感染1例,FCV、FHV、支原体混合感染8例。     

上海市宠物猫杯状病毒、疱疹病毒及流感病毒的分离与鉴定

为了解上海市猫上呼吸道疾病病例中猫杯状病毒(FCV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫流感病毒(FIV)的感染比例及其遗传变化特点,对上海市冬季53份表现上呼吸道症状宠物猫的眼结膜、口咽和鼻黏膜拭子,进行FCV、FHV-1和FIV分离与鉴定,并对分离的病毒进行遗传进化分析.结果显示:53份样品中,FCV分离率为58.4...     

一例猫杯状病毒感染的诊治

猫杯状病毒(FCV)属于杯状病毒科疱疹病毒属,为二十面体对称的球形无囊膜病毒.FCV呈世界性分布,在猫科动物中具有高度传染性,猫、老虎、豹等猫科动物均易感染.FCV主要感染6~ 84日龄的幼猫,感染幼猫后,主要在猫口腔与上呼吸道增殖,引发口腔溃疡、慢性口炎、鼻炎、肺炎等上呼吸道炎症.FCV感染14 ~ 18d后临床症状减轻,但仍可以通过猫的唾液、鼻眼分泌物持续排毒,成为危险的传染源.FCV的感染通常以猫的上呼吸道和口腔病变为主,舌上频繁出现水疱和溃疡是典型的感染特征,此外还可导致四肢溃疡、跛行、流产、肺炎和猫慢性龈口炎,而高毒力FCV毒株甚至可导致死亡.     

一株猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定

采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子，PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离，前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性，第三代开始只有FCV阳性，由此分离出FCV。制备此株FCV的鼠源多克隆抗体，并中和混合培养物中的FCV,从而分离出FHV-1,命名为HRB2019株。通过病毒粒子形态观察、间接免疫荧光试验(IFA)和基因序列分析等方法鉴定HRB2019株，并研究其体外生长动力学。结果显示，HRB2019株可在CRFK细胞上产生典型病变，测得其第四代病毒滴度为1×10^8.43TCID₅₀·mL^-1;电镜下可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的病毒粒子；IFA结果显示，分离株可与FHV-1阳性血清结合，出现特异性荧光；扩增分离株的gD基因，其与国内外流行株高度同源。病毒一步生长曲线表明，HRB2019株感染细胞12 h后开始复制增殖，12～36 h为快速增殖期，48～72 h进入增殖平台期且滴度达到高峰，84 ...     

猫疱疹病毒Ⅰ型、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

旨在建立检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus 1,FHV-1)、猫杯状病毒(Feline calicivirus, FCV)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)多重TaqMan荧光定量PCR方法。基于FHV-1的胸苷激酶(TK)基因、FCV的衣壳蛋白VP1基因、Bb的皮肤坏死毒素基因(DNT1)序列保守区域设计并合成TaqMan荧光定量PCR引物和探针,以FHV-1、FCV、Bb、猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌为模板验证引物和探针的特异性。制备重组质粒pMD18T-FHV-TK、pMD18T-FCV-VP1、pMD18T-Bb-DNT1作为标准品,经矩阵法确定最佳反应体系。以10倍梯度稀释的标准品为模板检测方法的灵敏性。应用建立的方法对32份临床具有上呼吸道感染症状的猫眼、口、鼻拭子检测,以评估该方法的可行性。结果显示：该方法可特异性检出FHV-1、FCV、Bb,且与猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应;灵敏度试验表明该方法对FHV-1、FCV、Bb的最低检出限分别为10、10和100拷贝/μL;应用该方法从3...     

猫传染性鼻-结膜炎疫苗研究进展

<正>猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)能引起猫的多发性口腔和呼吸道传染病,还可引起结膜炎,故又称为猫传染性鼻-结膜炎病毒。FCV是杯状病毒科疱疹病毒属(Vesivirus)的成员之一,其基因组为单股正链RNA,无囊膜,核衣壳呈二十面体对称。目前FCV感染已呈世界性分布。几乎所有的猫科动物均易感,一岁以下的猫最易感,也有感染狗的报道。FCV感染猫通常仅局限于口腔和上     

圈养白化孟加拉虎感染猫杯状病毒的诊断和防治

长沙生态动物园步行区虎馆圈养的3只白化孟加拉虎相继发生以精神沉郁、采食困难、流涎、口腔溃疡等为主要特征的传染疾病。采集病虎分泌物(唾液),使用猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)快速检测试剂盒检测,结果显示阳性,初步确诊为猫杯状病毒感染。通过抗病毒、抗继发感染、维持电解质和酸碱平衡等治疗后病虎康复痊愈。     

猫杯状病毒分离株VP1基因序列与致病性分析

旨在了解上海地区猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)VP1基因与致病性,采用常规方法分离鉴定出13株FCV,经RT-PCR和测序获得分离株VP1的基因序列,与参考株VP1基因进行同源性和遗传演化分析,对2株分离株进行动物致病性试验。结果显示,13株上海地区分离株VP1基因核苷酸序列相互间相似性为74.3%～99.8%,与参考株核苷酸序列和氨基酸序列相似性也较低,符合FCV易突变的特征;进化树分析表明,上海地区FCV流行株主要来自国内北方地区,少数毒株来自国外地区;通过对宿主临床症状、VP1进化树和VS-FCV特征性氨基酸位点进行分析,筛选出7株FCV强毒株;动物致病性试结果验表明,FCV-SH202101株和FCV-SH202113株可导致感染猫发病和死亡,潜伏期为1～2 d,接种后第3天即可检测到排毒,不同年龄段猫的病程不一致,可导致幼猫5 d后死亡,成年猫病程可持续11～18 d, 2株分离株在致病性方面均符合VS-FCV特征。本研究丰富了中国FCV的分子流行病学资料,为VS-FCV毒株的筛选提供了有力的证据,也为FCV疫苗的研究提供了技术支持。     

基因芯片检测5种动物冠状病毒的初步研究

采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。     

一例FIV伴发多种疾病的病例分析

猫免疫缺陷病毒(FIV)属慢病毒亚科,在体内感染T淋巴细胞、巨噬细胞和脑星形胶质细胞,可感染猫潜伏几年后发病。FIV如伴发猫白血病或猫杯状病毒(FCV)等感染,则危害更大。以下就笔者接触到的一例FIV伴发FCV、慢性肾病(CKD)和肥厚性心肌病(HCM)的治疗和分析。     

猫等孢球虫荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速、准确检测猫等孢球虫的方法，本研究采用GenBank登录的猫等孢球虫18s r RNA基因序列(L76471.1)保守区设计并合成1对特异引物，从经显微镜检测为猫等孢球虫阳性的粪便样品中选取一份提取猫等孢球虫DNA，以其为模板经PCR扩增猫等孢球虫18s r RNA基因片段，构建重组质粒标准品p UCm-T-IF1并经PCR及测序鉴定正确后作为质粒标准品。通过优化反应条件，建立了猫等孢球虫的荧光定量PCR检测方法。特异性试验结果显示，该方法可以特异性的检测猫等孢球虫DNA，对猫贾第虫、猫滴虫、猫细小病毒、猫冠状病毒DNA/cDNA的检测结果均为阴性；对重组质粒标准品的检测限可达6.26×102拷贝/μL。批内和批间重复性试验的变异系数分别是0.61%～2.06%和0.32%～0.50%。表明本研究建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法对23份临床疑似猫等孢球虫感染的样品进行检测，荧光定量PCR的检出率为78.26%(18/23)，明显高于漂浮法检测的阳性率43.48%(10/23)，并且经漂浮法检测为阳性的样品采用该方法检测均为阳性。结果表明，本研究建立的荧光...     

猎豹与虎猫杯状病毒的分离及其超变区基因比较研究

用F81细胞从上海某动物园患口腔溃疡的猎豹和虎的唾液病料中分离获得两株杯状病毒，经形态学、理化学、生物学鉴定和病毒核酸超变区基因RT-PCR扩增与序列测定证明两株病毒均为猫杯状病毒(FCV)，分别命名为FCV/cheetah/Shanghai/02/2002与FCV／tiger/Shanghai／03/2002。人工感染猫可引起体温升高，口腔溃疡，食欲下降等症状。两株病毒的超变区序列520bp长片段问的同源性为99.2％，与国内桂林虎分离株(TFCV9710)的同源性为74．0％，与国外分离株的总体同源性为58．1％，说明不同宿主或同种不同个体间杯状病毒分离株超变区核酸差异十分显著，符合猫杯状病毒的分子生物学特征。     

上海某宠物医院猫传染病流行病学调查

正为了了解猫传染病在一线城市的发病情况,也间接了解发病猫的免疫状况,并给出相应建议措施,本文通过对上海某宠物医院3～5月份的236例病例进行流行病学调查,结果表明:FHV、FCV在3月份高发,FPV在4月份感染率较高。FHV、FCV3月龄以下阳性率高,FPV的3月龄到一岁阳性率高。FPV、FCV的雄性阳性率高,而FHV的要低一些。定期进行免疫能有效降低感染率。建议宠主给猫按时免疫,加强隔离意识,禁止病猫繁育,定时体检,及时就医。     

猫冠状病毒和猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立

本文利用A-72细胞繁殖猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV),用蔗糖密度梯度离心纯化,根据病毒S基因序列设计引物,初步建立了检测FCV和FIPV的RT-PCR方法。采用此方法对人工攻毒猫组织进行检测,结果特异灵敏。     

猫杯状病毒自然弱毒株的分离鉴定及对猫的免疫试验

在进行猫狂犬病流行病学调查时,从猫的唾液中发现了杯状病毒.通过对病毒进行分离和形态学、理化学、动物感染试验和分子生物学等鉴定,证明该病毒为猫杯状病毒(FCV)自然弱毒株.免疫试验证明,该毒株可以诱导猫产生较高水平的中和抗体,且能持续50周以上,并能抵抗FCV强毒株攻击而不发病.     

检测猫杯状病毒RT-qPCR方法的优化与应用

为建立一种通用性良好的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank上猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)ORF1保守区域序列,设计合成1对特异性引物,用于FCV的快速检测。灵敏性试验结果显示,该方法的检测下限为4.93×10;拷贝/μL,比普通RT-PCR检测下限高100倍;特异性试验结果显示,该检测方法与猫疱疹病毒、猫细小病毒、猫传染性腹膜炎病毒等无交叉反应;通用性试验结果显示,针对引物靶位点区间,该方法对所有已知变异位点的人工合成质粒和本实验室保存的不同变异位点的FCV毒株,均能够良好检出;重复性试验结果显示,组内的变异系数为0.09%~0.71%,组间变异系数为0.05%~0.82%,均小于1%。对23份临床样品进行检测,该方法的阳性检出率为60.9%,检出的14份阳性病料分别接种到CRFK细胞中,对细胞病变产物进行扩增并测序,BLAST对比后结果证实为FCV毒株。结果表明,本试验建立的荧光定量RT-PCR检测方法可用于FCV的快速诊断及流行病学的调查。