禽流感病毒的分子生物学研究进展

禽流感是一种主要感染禽类的烈性传染病,能引起巨大的经济损失。该病也能传染人,因此,对禽流感病毒的研究已成为一大热点。目前研究的重点主要集中在其病毒的分子生物学方面,以期能更有效地防制本病。文章从基因组及其编码的蛋白质、病毒毒力、毒力变异、基因疫苗和诊断技术等方面系统论述了禽流感病毒的分子生物学方面的研究进展,为进一步研制禽流感病毒基因工程疫苗及诊断制品,预防该病提供了理论基础。     

禽流感病毒血凝素分子生物学研究进展

禽流感病毒基因组由8条单性负链RNA组成,血凝素基因是禽流感病毒基因组中变异最大的基因,禽流感病毒的抗原性和致病性很大程度上取决于该基因的变异情况。血凝素在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用,但可刺激机体产生中和抗体来中和病毒的感染力,而且血凝素诱导机体产生的体液免疫反应,对宿主抵抗禽流感起到了决定性保护作用,使目前研制血凝素基因工程疫苗成为禽流感病毒疫苗的研究热点。血凝素发挥功能之前必须裂解为两条肽链HA1和HA2,其裂解位点的氨基酸残基的组成是决定禽流感病毒致病力高低的主要因素。文章主要从血凝素的基因及其编码的蛋白、裂解位点序列和基因疫苗等角度对禽流感病毒血凝素分子生物学的研究状况进行了综述,可为禽流感的预防和治疗提供参考。     

表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组新城疫病毒的拯救

对现地分离的4株H9亚型禽流感病毒HA基因进行序列测定,选取其中1株在新城疫病毒 La Sota弱毒疫苗株反向遗传操作系统的基础上,构建了表达H9亚型禽流感病毒野生型HA基因的重组新城疫病毒基因组cDNA克隆,经间接免疫荧光和RT-PCR鉴定,结果表明:拯救重组病毒为rL-H9HA;重组病毒MDT≥168 h,ICPI和IVPI均为0,与亲本疫苗株La Sota具有相似的生长特性;重组病毒保持了La Sota弱毒疫苗亲本毒株对鸡胚良好的高滴度生长适应和低致病特性,具有作为同时预防H9亚型禽流感和新城疫的双价苗的应用前景.     

纳米孔测序技术对一份禽流感病毒阳性样品的分子溯源

H5亚型禽流感为人兽共患病,可严重威胁人类和动物健康。直接对样品进行禽流感病毒靶向全基因组测序、系统进化分析,对于揭示禽流感病毒分子特征具有重要作用。本研究采用第三代靶向纳米孔测序技术,对1份禽流感病毒阳性拭子样品进行了全基因组测序。序列鉴定结果显示,病毒为H5N5亚型禽流感病毒,序列覆盖度达96.44%,仅PB1基因约480 bp的序列未被测出;HA蛋白裂解位点含有5个连续的碱性氨基酸,具备高致病性禽流感病毒分子特征,未发现向SAα2-6 Gal受体基因转变的氨基酸突变;HA基因进化分析结果显示,病毒为2.3.4谱系,NA基因为欧亚谱系。本研究采用靶向纳米孔测序技术,成功对灭活禽泄殖腔拭子中的禽流感病毒进行了基因组测序,证实该技术快速、便捷,可直接用于拭子样品的病毒全基因组测序,适用于动物流感病毒的快速分子鉴定与溯源。     

青海启动紧急措施严控禽流感

本刊讯:中国农科院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室负责人孔宪刚博士4月22日宣布,我国科研人员采用国际先进的流感病毒反向基因操作技术,构建出一株与高致病“H5N1亚型”禽流感病毒流行株抗原一致、鸡胚增殖滴度高的低致病禽流感病毒的新型疫苗。这两种疫苗分别是,“H5N1亚型重组禽流感病毒灭活疫苗”和“H5亚型禽流感重组鸡痘病毒载体活疫苗”。孔宪刚博士介绍,科研人员是用重组DNA技术,把“H5N1亚型”禽流感病毒早期分离株的两个基因同源,重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中,从而构建出重组鸡痘病毒。动物试验表明,重组鸡痘疫苗免…     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

采用聚合酶链反应或反转录聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和PMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA.rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA.     

介绍几类兽用新疫苗

(一)基因工程疫苗 1.重组活载体疫苗.病毒活载体疫苗研究得较多,如用鸡痘病毒作为载体,表达成功的保护性抗原基因就有新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒、狂犬病病毒、传染性支气管炎病毒、艾美尔球虫等.2005年12月24日,农业部在北京宣布,我国已成功研制出禽流感--新城疫重组二联活疫苗,并正式批准生产,这使得我国在高致病性禽流感防控技术方面继续走在世界前列.     

新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展

在综述新城疫病毒（NDV）的分子生物学特征、致病本质、复制机理以及利用反向遗传操作技术获得NDV的基础上,着重介绍了以NDV作为疫苗载体,将报告基因、功能基因包括传染性法氏囊病毒VP2基因及高致病性禽流感病毒HA基因等插入NDV基因组不同的位置构建重组新城疫病毒,并对外源基因成功表达的研究进展。同时对NDV作为新的疫苗载体表达外源基因的可行性及未来应用前景进行了初探。     

应用反向遗传技术研究流感病毒

反向遗传技术(reverse genetics,RG)是一种通过cDNA克隆来拯救RNA病毒基因组片段,进而复制出设计表型的病毒的现代生物基因工程手段,目前被广泛应用于流感病毒重配株的构建.回顾流感病毒反向遗传技术发展的历史,并介绍目前该技术在禽流感疫苗研发方面的实际应用,为禽流感的防治、流感病毒以及其他RNA病毒的研究提供新的思路.     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗，该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术，将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中，构建重组鸡痘病毒(rFPV—HA—NA)，经体外、体内试验表明该重组鸡痘病毒具有良好的免疫原性。同时经细胞连续传代，证实了重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性，从而进一步保证了该疫苗的免疫原性。     

Conventional and future diagnostics for avian influenza

The significant and continued transboundary spread of Asian avian influenza H5N1 since 2003, paired with documented transmission from avian species to humans and other mammals, has focused global attention on avian influenza virus detection and diagnostic strategies. While the historic and conventional laboratory methods used for isolation and identification of the virus and for detection of specific antibodies continued to be widely applied, new and emerging technologies are rapidly being adapted to support avian influenza virus surveillance and diagnosis worldwide. Molecular tools in particular are advancing toward lab-on-chip and fully integrated technologies that are capable of same day detection, pathotyping, and phylogenetic characterization of influenza A viruses obtained from clinical specimens. The future of avian influenza diagnostics, rather than moving toward a single approach, is wisely adopting a strategy that takes advantage of the range of conventional and advancing technologies to be used in "fit-for-purpose" testing.     

禽流感对食品安全的影响

禽流感对食品安全的影响是巨大的,是影响肉食品安全的重要风险因素。论文从禽流感对家禽养殖业发展的影响、通过食品链条对人类健康造成危害、重大食品安全事故影响国际贸易和企业发展三方面论述了禽流感对食品安全的影响。阐明了认清禽流感的病原并掌握正确的防范措施,采取切实可行的对策,依靠实用有效的科学技术,就一定能成功地防止禽流感可能造成的重大食品安全事故,避免经济损失和社会影响,保证国民经济健康地向前发展。     

H5N1 亚型禽流感病毒在 MDCK 细胞中增殖条件的研究

目的：探索H5N1亚型禽流感病毒在MDCK中增殖规律,确定最佳增殖条件。方法将H5N1亚型禽流感病毒接种到6孔板培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量、不同浓度TPCK-胰酶,接毒后不同时间病毒的HA滴度。根据确定的最佳增殖条件将病毒接种到微载体培养的MDCK细胞中进行大规模增殖。结果：最佳病毒增殖条件接毒量MOI为5＆#215;10-4、TPCK-胰酶浓度为4μg/mL,在5 L生物反应器中重复验证,获得稳定的试验结果,病毒血凝价最高为8 log2。结论：本研究为禽流感疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。     

禽流感防制进展

禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒所引起的禽类的一种传染病。能引起禽类呼吸系统到严重全身败血症等多种症状的烈性传染病。禽类感染后病死率很高,但对野生禽类多为不显性感染。自从1997年香港发生禽流感病毒H5N1亚型首次突破种属屏障感染人类并引起死亡以来,世界各国纷纷报道各种人禽流感病例的发生,人禽流感的关注程度也达到了前所未有的高度。近几年全球共有三大洲的19个国家和地区发生禽流感疫情。一些地区的疫情呈现蔓延的趋势,并且出现了人感染禽流感病毒的病例。禽流感不仅对养殖业造成重大损失,更对人类健康造成严重威胁。本文全面地介绍了禽流感的病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和防制。     

Avian influenza virus

Avian influenza viruses do not typically replicate efficiently in humans, indicating direct transmission of avian influenza virus to humans is unlikely. However, since 1997, several cases of human infections with different subtypes (H5N1, H7N7, and H9N2) of avian influenza viruses have been identified and raised the pandemic potential of avian influenza virus in humans. Although circumstantial evidence of human to human transmission exists, the novel avian-origin influenza viruses isolated from humans lack the ability to transmit efficiently from person-to-person. However, the on-going human infection with avian-origin H5N1 viruses increases the likelihood of the generation of human-adapted avian influenza virus with pandemic potential. Thus, a better understanding of the biological and genetic basis of host restriction of influenza viruses is a critical factor in determining whether the introduction of a novel influenza virus into the human population will result in a pandemic. In this article, we review current knowledge of type A influenza virus in which all avian influenza viruses are categorized.     

鸭源流感病毒感染对鸡和家鸭红细胞免疫功能的影响

采用商品来航鸡、樱桃谷鸭分别接种鸭源流感病毒株Ａ／ｄｕｃｋ／Ｎａｎｊｉｎｇ／２１／９５（Ｈ９Ｈ？），研究了禽流感病毒（ＡＩＶ）感染对红细胞免疫功能的影响。结果发现，流感发生与红细胞ＣＲ１花环率之间存在着反向关系；正常鸭的红细胞ＣＲ１花环率极显高于正常鸡的红细胞ＣＲ１花环率，即使接种ＡＩＶ后，鸭红细胞ＣＲ１花环率有所下降，但也显著高于正常鸡的红细胞ＣＲ１花环率，这些结果表明，鸭的红细胞免疫功能在一定     

基于家禽产业链视角分析广东珠三角地区H7N9禽流感传播途径

珠三角地区H7N9禽流感传播途径具有复杂性和特殊性。为进一步明确传播途径,基于家禽产业链视角,在H7N9禽流感最为严重的广州市、深圳市、佛山市,采用分层抽样法选取有代表性且能反映整体情况的养殖场、批发市场、屠宰场、农贸市场,调查H7N9禽流感的动物防疫和个人防护情况。结果显示:养殖场的生物安全隔离仍不完善,存在活禽接触候鸟感染禽流感的风险;批发市场和屠宰场防疫水平高,人感染风险较低;农贸市场的动物防疫条件和个人防护不充分,易扩散病毒;最有可能的传播途径是与候鸟接触后携带病毒的活禽,通过"养殖—批发—零售"产业链蔓延。该结论在明确"禽传人"、"活禽市场环境暴露"观点上深化了产业链各环节间的传播路径。因此,珠三角地区H7N9禽流感的防控重点要加强养殖环节的生物安全隔离,并做好零售环节中活禽与人之间的防控。     

禽流感病毒非结构蛋白NS1的分子生物学特性与功能

禽流感严重威胁着世界养禽业及人类健康.随着对流感病毒研究的逐渐深入,人们已经从对流感病毒结构蛋白的研究转移到对非结构蛋白即NS1蛋白的研究上来.研究发现流感病毒的NS1蛋白与流感病毒所诱导的细胞凋亡之间存在一定的联系,其对凋亡的调节作用与流感病毒感染的细胞是否产生干扰素及其所感染的细胞系直接相关.NS1蛋白能够抑制病毒感染细胞干扰素的产生,在流感病毒颉颃干扰素的抗病毒效应中发挥了重要的作用.随着疫苗的广泛使用,无法区分野毒感染和疫苗免疫的禽群,干扰了禽流感的诊断,掩盖了禽流感的流行,增加了禽流感的预防难度.NS1蛋白作为流感病毒的非结构蛋白,具有高度的保守性,在临床应用中作为鉴别诊断免疫禽和自然感染禽的检测抗原具有广阔前景.     

从“H7N9禽流感”命名说开去

2013年2月以来,华东地区被一场突如其来的＂疫情＂笼罩,后确诊为人感染H7N9禽流感病毒。由于被冠以“H7N9禽流感”,致使全国养禽业损失惨重。截至2013年上半年,受H7N9流感疫情影响,在短短3个月的时间内,养殖场户直接经济损失超过600亿元。最近,世界卫生组织（WHO）、世界动物卫生组织（OIE）和联合国粮农组织（FAO）等三家国际组织专家就“H7N9禽流感”名称会商,建议媒体使用“H7N9流感”或“H7N9病毒”的名称,这样更客观、准确。文章提出,对待类似情况,一定要本着科学、严谨的态度,不要因为人为的原因,造成不必要的损失,增加疾病控制的难度。     

禽流感病毒的致病性和免疫性研究进展

介绍了禽流感病毒的病原、基因结构及其对禽类、人类的致病机理和危害，探讨了感染病毒后宿主的反应、机体的体液免疫和细胞免疫，在一定程度上概述了禽流感病毒的固有特点和规律，为进一步研究打下了基础。