用生物素-亲和素强化免疫斑点试验检测口蹄疫病毒的研究

传统酶联免疫吸附试验一般用辣根过氧化物酶(HRP)标记IgG进行检测。HRP的稳定性虽好,但敏感性稍差。为了克服这一不足,引入碱性磷酸酶(AP)检测系统,进行免疫强化斑点试验检测口蹄疫病毒的研究。用光敏生物素标记纯化的A蛋白(SPA)代替第二抗体,通过AP标记的亲和素(Avidin-AP)检测生物素化抗体,最后加入底物BCIP和NBT显色判定。该法操作简单、检测时间短,并具有良好的特异性和重复性。由于引入生物素系统和AP,检测的灵敏度比曾通ELISA高。     

用酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体

酶联免疫吸附试验间接法检测猪瘟抗体系用纯化抗原包被聚苯乙烯微量反应板,洗涤三次;加入待检血清,孵育后洗涤三次;再加入按工作效价稀释的HRP—SPA(辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌蛋白A),孵育后洗涤三次;用OPD(邻苯二胺)配制酶的底物溶液。如血清中有猪瘟抗体存在,     

纯化猪的小肠AKP用于ELISA对猪旋毛虫病检测的研究

<正> 碱性磷酸酶(AKP)起初用于抗原定位,七十年代广泛用于免疫诊断技术。1976年,Rnitenberg 等用免疫酶标记间接法(ELISA)检测猪旋毛虫病,获得了满意的结果,随后设计了自动化测试装置,检出效率很高。国内外普遍使用辣根过氧化物酶(HRP)和 AKP 进行抗抗体标记,但由于辣根过氧化物酶其试剂有致癌因素,而     

流感病毒受体特异性间接ELISA检测方法的建立

本研究采用过碘酸钠法对去唾液酸胎球蛋白进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,然后通过两种不同类型的唾液酸转移酶对HRP去唾液酸胎球蛋白进行唾液酸标记,使其成为只含有单一受体的载体。利用MAA和SNA以及已知受体特性的两株流感病毒对唾液酸标记的HRP去唾液酸胎球蛋白进行受体结合特异性鉴定。结果表明,该方法可以快速准确的鉴定流感病毒的受体特异性。     

应用HRP-SPA间接免疫酶染色对小鼠实验性弓形虫病虫体分布的观察

应用他萄球菌A蛋白辣根过氧化物酶(HRP—SPA)间接免疫酶染色,观察了弓形虫在机体各主要器官和病变中的分布,探讨了虫体与病变的关系。虫体在脾脏、肝脏中分布最多,肺脏次之,肠、心、脑更次之,肾脏最少。虫体在器官中的分布呈两种状态,即局灶性分布和散在性分布,凡呈局灶性分布的部位,经HR染色观察,都是大小不一的凝固性坏死灶,从病灶中央到病灶边缘均有虫体分布。病灶范围的大小和严重程度,取决于病灶内虫体的数量和分布的面积。HRP—SPA间接免疫酶染色检测石蜡组织切片中的弓形虫,可以考虑用作弓形虫病与其它疾病的鉴别诊断。     

抗绿脓杆菌外毒素A酶标抗体的制备及其应用

从病死羊体内分离到绿脓杆菌并提取出外毒素A(PEA),再以此毒素作为抗原加油佐剂制成乳化抗原免疫家兔,获得高免血清并提取免疫球蛋白G(IgG);用过碘酸钠法将过氧化物酶标记抗PEA抗体(IgG),制成酶标抗体,经检验,酶标抗体结合物中的HRP浓度和Ab(IgG)浓度分别是0.0608 mg/mL和0.336 mg/mL;HRP/Ab(IgG)克分子比值为1.724%;酶(HRP)结合率是11.15%.利用该酶标抗体以ELISA夹心法对羊体内抗PEA抗体含量进行了检测,结果证明,用酶标抗体ELISA法比用平板凝集实验法检测的抗体效价平均高出二个滴度,表明制备的PEA酶标抗体具有灵敏度高、特异性强的优点.     

单克隆抗体直接ELISA法检测家蚕微孢子虫

本文报道的是将辣根过氧化物酶(HRP)直接标记于单克隆抗体上进行直接ELISA法检测家蚕微孢子虫,实验结果表明:直接ELISA法比间接ELISA法检测家蚕微孢子虫其灵敏度和特异性二者差异不大,但直接ELISA法操作简单,是实用性较强的一种检测家蚕微孢子虫的方法。     

SPA与鸭IgG的结合性研究

金黄色葡萄球菌细胞壁中的A蛋白(staphylo-coccal protein A,SPA)能与多种动物的γ-球蛋白发生非特异性结合反应,而且IgG的Fc片段与SPA结合后并不影响Fab片段的免疫活性,因此在酶联免疫吸附试验(ELISA)中,常用SPA与辣根过氧化酶(HRP)交联而成SPA-HRP结合物,用于抗原、抗体的定量测定及组织切片中抗原或抗体的定位、免疫复合物的检测等[1].     

抗猪IgG单克隆抗体的制备与应用

采用辛酸一硫酸铵盐析和SuperdexTM-200 凝胶层析分离纯化猪血清IgG,免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得8株稳定分泌抗猪IgG 单克隆抗体的杂交瘤细胞.Ig 亚类分析表明,所制备单克隆抗体的轻链亚类均为K,重链除6H3为IgG2b外,其余7株均属于IgG1.Western blot分析显示,5株单克隆抗体识别猪IgG轻链,3株单克隆抗体识别猪IgG重链.以蛋白G亲和层析纯化单克隆抗体7H1腹水,用改良过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,结果显示,HRP 标记抗猪IgG单克隆抗体对纯化猪IgG的工作浓度达1:12 800.将HRP标记鼠抗猪IgG单克隆抗体与HRP标记羊抗猪IgG多克隆抗体应用于猪血清圆环病毒抗体检测,二者符合率为95.12%,其ELISA和Westem blot的工作浓度为1:2 000和1:10000,表明HRP标记抗猪IgG单克隆抗体具有高度的敏感性.本研究制备的酶标抗猪IgG单克隆抗体为猪病的免疫诊断试剂研究和猪细胞生物学研究提供了一种基础工具.     

在酶免疫测定中用作辣根过氧化物酶的各种底物的比较

在酶的免疫测定(EIA)系统中曾使用过各种各样的酶类,最为普遍的只有2种,即碱性磷酸酶和辣根过氧化物酶。后一种酶比前一种酶便宜得多,并且容易与抗体结合,其底物的种类也很多。辣根过氧化物酶(HRP)在催化H_2O_2还原的同时,可使另一种底物发生氧化,并呈现可按光度检测的显色反应。Bullock和Wall(1977)曾评价HRP的3种底物,即5-氨基-水扬酶(5—AS)、邻-联茴香胺和3-氨基-9-乙基咔唑(AEC),并且选定5-AS的性能最佳,因     

检测猪等孢球虫抗体的间接ELISA方法的建立

以纯化的猪等孢球虫孢子化卵囊为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗,建立了检测猪等孢球虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为:2.5μg/孔纯化的猪等孢球虫抗原包被酶标板;抗原最佳包被条件是37℃,2h;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶10000;血清、酶标二抗的作用时间分别为30min、45min。     

鸡海马结构传入纤维的脑干及小脑起始核—HRP逆行示踪法

研究鸡海马结构的传入纤维在脑干及小脑内的起始核。将40%辣根过氧化物酶(HRP)水溶液注入鸡左端脑海马结构,逆行追踪投射到海马结构的纤维在脑干和小脑内的起始核。结果在脑干的浅小细胞核(SPC)、圆下核(SRt)、蔡氏区(AVT)和小脑的第Ⅰ~Ⅹ叶浦肯野细胞层内均出现被标记的神经元。初步表明上述部位为端脑海马结构的起始核。     

鸡传染性喉气管炎兔源高免血清有效酶标免疫组化试验

用辣根过氧化物酶HRP标记ILT兔源高免血清抗体，进行免疫组化试验检测15份人工感染ILT患鸡，5份(ND)患鸡和10份健康鸡气管分泌物，并进行了特异性和敏感性测定．结果人工感染ILT患鸡阳性检出率高达100％，ND患鸡和健康鸡阳性检出率为0．表明ILT兔源高免血清酶联免疫组化试验是一种特异性强、敏感性高的检测诊断方法．     

山羊眼球退缩肌运动神经元及感觉神经元的定位——HRP法研究

将辣根过氧化物酶(HRP)注入山羊一侧眼球退缩肌后,被标记的运动神经元主要位于同侧副外展核,在同侧副外展核周围的网状结构及动眼神经核的前部也发现少数标记细胞,在一例外展核也见到少数标记细胞。副外展核内的标记细胞为典型的多极运动神经元,胞体直径为13.3～39.6微米,以20～30微米者最多(59.8％)。被标记的感觉神经元位于三叉神经节,主要分布在神经节的背部,中部较少,下部没有。三叉神经节内的标记细胞为圆形、卵圆形或纺锤形,以胞体直径为25～35微米者为最多(42.5％)。实验结果表明,山羊眼球退缩肌的运动神经元主要位于副外展核,感觉神经元定位于三叉神经节。     

猪圆环病毒2型特异性IgA间接ELISA检测方法的建立与初步应用

为检测猪圆环病毒2型(PCV2)特异性IgA抗体,本研究以纯化的PCV2 Cap蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgA为二抗,建立检测PCV2特异性IgA抗体的间接ELISA方法.确定最佳抗原包被浓度为200 ng/孔,HRP标记羊抗猪IgA的最佳稀释度为1∶30 000.所建立方法与抗猪瘟病毒等病原的抗体间无交叉反应.结果表明该方法具有较好的特异性,组内和组间重复性试验的变异系数介于0.12％～5.47％,具有较好的可重复性.该方法为进一步研究猪感染PCV2和PCV2疫苗免疫后特异性黏膜IgA水平及进行黏膜免疫评价提供了有效的检测方法.     

犬癌胚抗原免疫梳检测方法的建立

为建立一种犬癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)免疫梳检测方法，将包被鼠抗CEA捕获抗体固定于硝酸纤维膜(nitrocellulose filter membrane, NC膜)上，筛选出合适的包被液、包被温度、封闭液、封闭条件、辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记抗体反应条件等，制备免疫梳。对建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法进行敏感性、特异性、重复性和稳定性实验，并采用化学发光法和所建立的免疫梳检测方法对10份患恶性乳腺肿瘤病犬只的血清样品进行检测。优化条件：CEA捕获抗体质量浓度为100μg/mL,HRP标记抗体按1∶400(体积比)稀释，包被液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),包被温度为37℃,封闭液为3%BSA-PBS[含3%(质量分数)牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)],封闭条件为4℃过夜，HRP标记抗体反应条件为37℃孵育1 h。建立的犬癌胚抗原免疫梳检测方法中CEA最低检出限为5 ng/mL,同时肿瘤标志物角蛋白8抗原、甲胎蛋白和前列腺抗原的检测结果均为阴性，重复性和稳定性良好；临床血清样品的...     

辣根过氧化物酶标记法研究鸡直肠传入神经元的分布

采用辣根过氧化物酶（HRP）逆行追踪法研究了鸡直肠感觉传入神经元的分布，证明鸡直肠脊神经感觉传入神经元集中分布于双侧T5～LS3和LS7～LSl2脊神经节，峰值位于T7和LS10脊神经节；LS7-LS12区段脊神经节内标记细胞明显多于T5～LS3区段脊神经节内的标记细胞；标记细胞为椭圆形和圆形。     

应用HRP—SPA间接免疫酶染色检测弓形虫病血清抗体

以弓形虫直接涂片,应用HRP—SPA间接免疫酶染色,检测兔实验性弓形虫病血清抗体,检出率达100％。本法操作简便,不需要复杂的仪器设备,便于普及推广。     

应用免疫过氧化物酶方法检查猪传染性疱疹病毒

前言应用免疫过氧化物酶方法进行病毒抗原的定位,已经日益具有实际意义。我们的研究主要是比较异硫氰酸荧光素(FITC)标记抗体和辣根过氧化物酶标记抗体的敏感性。我们对于怀疑死于猪疱疹病毒感染的动物的诊断程序,包括在猪肾单层细胞分离猪疱疹     

仔猪子宫角传入神经的起源—HRP法研究

本实验用辣根过氧化物酶(HRP)法研究了仔猪子宫角传入神经的起源,结果如下: 一、标记细胞出现于T_(10)—S_3背根节,主要集中在L_2、L_3及S_1、S_2背根节。在注射子宫角前半部组、后半部组及全子宫角组,标记细胞出现的背根节范围基本相同。 二、标记细胞出现于双侧背根节,注射侧出现的标记细胞数明显多于对侧。这表明仔猪子宫角的感觉经双侧背根节传入脊髓,以同侧传入占优势。 三、标记细胞以小型为主,大、中型较少。它们混杂散在分布于整个背根节内。 四、胸腰部背根节出现的标记细胞数约为骶部的四倍,结状节中未出现标记细胞,表明猪子宫角的感觉主要经交感途径传入,小部分经副交感途径传入,不经迷走神经传入。