胭脂鱼精子低温保存及其在人工授精中的应用

[目的]研究胭脂鱼精子的低温保存方法,为胭脂鱼的人工繁殖和人工授精提供基础依据。[方法]试验配制了A、B、C、D4种精子保存液,以0．7％的NaCl溶液作为对照,以精子被激活后的活率为指标,对4种精子保存液保存成熟的胭脂鱼精子的效果进行评价。[结果]在低温（0～4℃）条件下,4种精子保存液之间及其与对照溶液之间的差异比较明显。其中保存效果最好的是B液,能在120h内使精子的活率保持为80％;D液次之,能在84h内使精子的活率保持为80％。胭脂鱼在淡水中快速运动时间为（24．0±3．5）s,寿命为（128．0±9．5）s。2007～2008年精子保存B液在胭脂鱼的人工授精中进行应用,受精率为53％～85％。[结论]用精子保存液低温保存胭脂鱼精子的方法是切实可行的。     

大鳞大马哈鱼精子活力的观察

采集成熟的大鳞大马哈鱼精子,在不同的激活介质、人工精浆(ASP)、pH和温度条件下进行活力观察。结果表明:用生理盐水(BSS)激活的精子活力高于用水激活(P<0.05),单尾鱼的精子活力高于多尾混精(P<0.05);在ASP A,B和C液中,用ASP C液保存精子的效果最好(P<0.05);保持大鳞大马哈鱼精子活力较强的适宜pH值为8.19-8.40,而活力最强时pH值为8.40;在4℃下保存的大鳞大马哈鱼精子活力最高;大鳞大马哈鱼受精率最高时的温度和pH值分别为4℃和8.40,这与大鳞大马哈鱼精子活力最强时的温度和pH条件高度相关。     

解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

食蟹猴精液低温保存研究

[目的]探讨食蟹猴精液低温保存液的最佳配方,为食蟹猴精液冷冻保存和品质鉴定奠定基础.[方法]测定生理温度(37℃)、常温( 15~25℃)和低温(0~5℃)3种状态下,食蟹猴精子在不同保存液中的存活时间及存活指数.[结果]生理温度(37℃)和常温( 15~25℃)下,食蟹猴精子在TALP液中的存活时间分别为12.94±5.57和58.59±40.91 h,存活指数分别为4.88±1.97和24.48±17.94;而低温(0~5℃)下,食蟹猴精子在TRIS液添加20%蛋黄的保存液中存活时间及存活指数分别为596.00±83.35 h和283.05±49.42,显著高于其他处理(P<0.01).[结论]TRIS液添加20%蛋黄是食蟹猴精液低温(0~5℃)保存液的最优配方.     

食蟹猴精液低温保存研究

【目的】探讨食蟹猴精液低温保存液的最佳配方,为食蟹猴精液冷冻保存和品质鉴定奠定基础。【方法】测定生理温度（37℃）、常温（15～25℃）和低温（0～5℃）3种状态下,食蟹猴精子在不同保存液中的存活时间及存活指数。【结果】生理温度（37℃）和常温（15～25℃）下,食蟹猴精子在TALP液中的存活时间分别为12.94±5.57和58.59±40.91 h,存活指数分别为4.88±1.97和24.48±17.94;而低温（0～5℃）下,食蟹猴精子在TRIS液添加20%蛋黄的保存液中存活时间及存活指数分别为596.00±83.35 h和283.05±49.42,显著高于其他处理（P＜0.01）。【结论】TRIS液添加20%蛋黄是食蟹猴精液低温（0～5℃）保存液的最优配方。     

鹅精液短期保存研究

鹅的新鲜精液进行精子活力检测后,分别用0.9%NaCl和脱脂牛奶2倍量稀释,在2～5℃、15～25℃、38～39℃,48.5℃温度下保存.结果表明:保存温度在48.5℃的精液,0.5小时精子全部死亡;在38～39℃条件下,用0.9%NaCl稀释与牛奶稀释鹅精液,精子活力变化基本无差异(P>0.05);0.9%NaCl稀释的鹅精液,在2～5℃、15～25℃、38～39℃温度条件下,保存效果无显著差异(P>0.05);牛奶稀释的鹅精液,低温保存效果较好,与其他各组比较差异极显著(P<0.01).     

能极显著地延长冻后牛精子有效存活时间的新途径

在5—6℃保存条件下,WD液(中药)比对照液能极显著地延长冻后牛精子的有效存活时间16倍,并改善了精子的完整顶体百分数.     

公鸡精子冷冻保存后活率和顶体破损率的相关关系

用BPSE为稀释液,以终浓度为11%(V/V)的甘油作低温保护剂,冷冻洪山公鸡精液。测定了细管型和颗粒型2种类型的冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率,并对冻后存活率和顶体破损率进行了相关和回归处理。测定结果表明,细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率分别为0.451±0.056和0.392±0.054(n=20)。颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率分别为0.339±0.040和0.543±0.052(n=20)。前者解冻后的活率极显著高于后者,而顶体破损率则极显著低于后者。相关分析结果表明,细管型冷冻精液解冻后精子存活率与顶体破损率之间的回归方程为y=0.7293-0.7126x,相关系数r为-0.697(P<0.01),而颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率与顶体破损率之间的相关系数为-0.0625(P>0.05),表明两者之间无显著相关。本研究为输入相等数量的活精子时细管型冷冻精液受精率显著高于颗粒型冷冻精液的试验结果提供了一定的理论解释,也为将保存家畜冷冻精液的方法应用于家禽方面作了有益的探索。     

猪鲜精17℃保存剂效果对比试验

选择2种著名品牌猪精液常温保存稀释剂为对照组(对照一、对照二),试验组为本课题组经大量试验开发的猪精液常温保存稀释剂,旨在探讨研发的稀释剂对猪鲜精保存效果。试验结果表明,课题组研发的猪精液17℃常温保存稀释剂在有效保存时间和精子总存活时间方面均显著高于对照一组,而相对于对照二组,显著提高了大白种猪精液有效保存时间和精子总存活时间(P<0.05),其余各组差异均不显著(P>0.05)。试验中的3种不同稀释剂在前3d对精子质膜完整性均有较好保护作用, 3组间差异不显著(P>0.05);保存到第5天,试验组和对照二组中精子质膜完整性显著高于对照一组(P<0.05),但前2组之间质膜完整性无显著性差异(P>0.05);保存至第7天,对照一组、对照二组和试验组中精子质膜完整性分别为49.94±3.08, 58.83±2.22, 72.86±2.62,精子质膜完整性在该3组之间均存在差异显著性(P<0.05)。结果显示,在相同储存条件下,本课题组研制的精液常温保存剂对精液保存时间,质膜完整率等指标优于国内市场上著名品牌,且保存效果稳定。     

温度对中华鲟精子、卵子短期保存的影响

研究了中华鲟精子和卵子在低温(8,12℃)、中温(16,20℃)和高温(24,28℃)条件下短期保存的效果。结果发现:精子保存时间随着保存温度的升高逐渐缩短,8℃下可保存146 h以上,而28℃下只能保存32 h。低温下保存精子的活力强于高温下保存的精子,表现为快速运动时间和总活动时间较长;卵子适合在中温(16,20℃)下保存,高温或者低温对卵子的保存都不利,28℃下只能保存4~8 h,8℃下只能保存4~10 h,而在16℃和20℃下可保存18~20 h。     

5种禽类卵黄低密度脂蛋白对猪精子冷冻效果的影响

为了确定具有最佳抗冷冻效果的禽类卵黄低密度脂蛋白(LDL)及其添加质量分数,在猪精液冷冻稀释液中分别添加质量分数为6%、7%、8%、9%和10%的鸡、鸭、鹌鹑、鸽子和鸵鸟的卵黄LDL,分析不同禽类的LDL对猪精子的冷冻保存效果。结果表明,稀释液中添加质量分数为9%的鸡、鸭、鹌鹑、鸽子卵黄LDL以及质量分数8%的鸵鸟卵黄LDL时,冷冻-解冻后精子活率最高,分别达到42.33%、35.63%、31.47%、47.33%和36.40%。以5种禽类LDL最佳质量分数配制冷冻稀释液冷冻精子,发现质量分数为9%的鸽蛋LDL冻存猪精子时解冻后精子活率达到47.33%,顶体完整性达到62.57%,质膜完整性达到48.13%,均显著优于其他处理组(P<0.05)。说明鸽子卵黄LDL对猪精子具有良好的冷冻保护性能,可提高猪精子抵抗低温打击的能力。     

6种鸡精液冷冻稀释液以及冻后保存条件比较

为探究不同稀释液对鸡精液冷冻保存效果的影响,选择LR、Lake’s、BPSE、Modified Sasaki、Beltsville和Nabi共6种稀释液对霞烟鸡精液进行冷冻,解冻后分别在37或4 ℃条件下短时间保存,分析不同冷冻稀释液和保存条件对精子活率、活力、功能完整性和抗氧化指标的影响。结果表明,6种稀释液中Lake’s稀释液的冻后活率、活力和顶体完整性最高,分别为48.20%、45.70%和45.26%;LR稀释液虽然获得了48.16%的冻后活率,但其活力显著低于Lake’s稀释液。解冻后4 ℃保存更适合鸡精子的短时间保存,Lake’s和Nabi稀释液在4 ℃条件下保存45 min后活力仍达30 %以上。虽然Nabi稀释液解冻初始时的精子活率和活力低于LR和Lake’s稀释液,但随着保存时间的延长,其冻后精子存活能力表现最佳。随着冻后保存时间的延长,LR、Lake’s和Nabi稀释液冻后精子的线粒体活性、质膜完整性和抗氧化能力均呈现下降趋势,且37 ℃保存时下降更为明显,同时LR稀释液在这些指标上表现出较差的耐受性。综上所述,Lake’s和Nabi冷冻稀释液对鸡精子冷冻保存的效果最佳;解冻后4 ℃保存可延长冻精的体外存活时间;LR稀释液虽获得了较高的冻后活率,但其活力和冻后耐保存性能较差。     

中间球海胆精子超低温冷冻保存方法的研究

对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius精子的超低温保存技术进行了研究。以煮沸消毒海水为基础液,添加体积分数为10%的DMSO、体积分数为6%的甘油以及25 mmol/L海藻糖配制成冷冻保护液,与鲜精液按体积比以1∶1混合,在4℃下平衡15 min,于液氮面上方15、3 cm处分别停留3 min和5 min,然后浸入液氮保存。结果表明：用此方法保存的精子解冻后其存活率可达58.2%,受精率达24.7%;解冻后精子受精时,在受精海水中分别添加0、28、56、112、280 mmol/L的葡萄糖,56 mmol/L组的受精率高于其他组,受精率达26%;精子解冻后受精时,在受精海水中添加适量葡萄糖有助于提高受精率。本试验表明,冷冻过程中降温方式、冷冻保护液、平衡时间对精子的冷冻保存效果均有较大影响,各个因素通过优化组合可以大大提高解冻后精子的存活率和受精率。     

牛精液中药复方稀释液配方筛选研究

在种公牛精液商业稀释液的基础上,按6%、12%、24%和48%的4个水平向稀释液中分别添加4种中药复方提取液,制作0.25 ml细管冻精,解冻(40 ℃,10 s)后比较分析精子活率、顶体完整率、质膜完整性3个指标,以确定较优的中药稀释液配方.结果表明:添加了中药复方提取液的稀释液能更有效的冷冻保存牛精子细胞.其中,复方一和复方二的冷冻效果最佳.复方一在添加量为12%时精子活率、顶体完整率及质膜完整率分别为41.50%、40.14%和38.16%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.67%、3.92%和5.50%;复方二在添加量为6%时,精子活率、顶体完整率、质膜完整率3项指标分别达到41.33%、41.59%和40.00%(P＜0.05),分别比对照组提高了10.50%、5.37%和7.34%.     

不同稀释液对猪精液4℃保存效果的影响研究

[目的]利用改进的BF-5稀释液（命名为naBF5）,开发一种4℃液态保存猪精子的方法。[方法]把猪精子在LEN、BF5和mBF5这3种稀释液中4℃条件下保存5d,按照保存天数分别检测精子的活力、顶体形态、活率和ATP浓度并进行比较。[结果]在4℃条件下保存的1～2d,精子的活率在3种稀释液中没有显著的差异;但是第3天开始,3种稀释液中的精子活率有显著差异,在mBF5中保存的精子活率显著地高于在LEN和BF5中保存的精子。第1～5天,在mBF5和B巧稀释液中保存的精子正常顶体的百分率高于LEN稀释液中保存的精予;并且,在4℃保存5d后,在mBF5稀释液中保存的精子正常顶体的百分率要高于在BF5中保存的精子。在4℃条件下保存的第1～5天,mBF5稀释液中的精子活力百分率高于LEN和BF5稀释液保存的精子活力。在3种稀释液中,保存的第1～5天,精子活力的百分率都持续地降低。保存的第1～5天,mBF5稀释液中保存的精子ATP浓度比LEN和BF5稀释液中保存的高。保存5d之后3种稀释液中精子ATP浓度都迅速下降。[结论]在4℃条件下保存5d,与LEN和BF5稀释液相比,保存在mBF5稀释液中的精子表现出较高的活力、正常的顶体百分率、活率和ATP浓度。     

稀释液·清洁剂·冷冻程序对猪精液冷冻效果的影响

探讨了稀释液、清洁剂及冷冻程序对猪精液冷冻保存效果的影响。结果显示:①稀释液Ⅳ保存鲜精,精子活率明显低于其他组(P<0.05);但其作为冻精的解冻稀释液时,效果最佳(P<0.05),说明猪精液冷冻保存时可采用第Ⅰ～Ⅲ组稀释液,而解冻时采用第Ⅳ组较佳。②稀释液中于不同阶段添加SDS(Sodiumlaurylsulfate,十二烷基硫酸钠)或OEP(OrvusESPaste,清洁剂)均能显著提高冷冻精子活率(P<0.05),SDS与OEP对冻精活率的影响无显著差异(P>0.05)。③精液冷冻程序采用-70℃、液氮熏蒸与直接液氮熏蒸在对解冻后冻精精子活率上无显著差异(P>0.05)。添加咖啡因能有效提高冻精的解冻后活率。     

温度和保存时间对猪精子顶体酶活性的影响

为了探讨温度和液相保存时间对猪精子顶体酶活性的影响,采用紫外分光光度计检测猪精子顶体酶活性。结果显示:(1)鲜精、冷休克和热休克每106精子顶体酶活性分别为5.38、5.20和5.16 mIU,差异不显著(P>0.05)。(2)鲜精在4、17、25、30、37和39℃时每106精子顶体酶活性分别为4.29、5.01、5.03、5.17、4.78和4.61 mIU,随着温度的升高精子顶体酶活性逐渐提高,当温度达到30℃时达到最高,且4℃和30℃时差异显著(P<0.05)。(3)液相精液在4℃保存超过1 d时精子顶体蛋白酶活性显著下降(P<0.05);在17、25和39℃保存超过2 d时顶体酶活性显著下降(P<0.05),且在17℃保存效果较好。结论是猪精子顶体蛋白酶活性受温度的影响,在17℃的条件下3 d内保存的猪精子顶体酶活性最佳。     

牛附睾和附睾液分析与牛附睾尾精子在模拟附睾液中存活试验

[目的]新鲜精液在离开生殖腺后存活时间很短.相关研究表明副睾液为精子的存活提供了特殊的环境.试验探讨和研究牛附睾精子在体外模拟附睾液中的存活试验的各因素的影响.[方法]试验对公牛附睾头部和尾部的摩尔渗透压和蛋白质浓度进行了分析,牛附睾尾部精子在不同蛋白浓度的CEP-2溶液中,在4℃条件下孵育120h.每24h做一次精子活力检测.[结果]5 d后精子活力仍然超过60;.附睾头、尾部的渗透压分别为(287.0±13.7)mOsm和(310.8±17.0)mOsm.蛋白浓度分别为(37.43±12.55)mg/mL和(50.58±11.08)mg/mL.[结论]附睾尾精子在蛋白浓度为40mg/mL,渗透压为345 mOsm时,精子存活率最高.     

稀释液中添加不同浓度的维生素B12对牛细管冷冻精液精子形态的影响

为了阐明维生素B12（VB12）对牛细管冷冻精液形态的影响，在常规稀释液中分别添加0．00％、0．25％、0．50％、0．75％、1．00％的VB12进行试验，比较观察结果表明：0．50％组顶体完整率高于对照组，差异极显著（P〈0．01），0．75％组高于对照组差异显著（P〈0．05），1．00％组低于对照组，差异不显著（P〉0．05）。0．50％组的精子畸形率低于对照组，差异显著0．05），1．00％组高于对照组，差异不显著（P〉0．05）。显著（P〉0．05）。（P〈0．05），0．75％组低于对照组，差异不显著（P≥0．25％组的顶体完整率、畸形率与对照组相似，差异不     

绵羊附睾尾部精液低温保存效果的研究

由成年绵羊离体睾丸上获得附睾尾部精液,进行3种浓度稀释液(葡萄糖、柠檬酸三钠、卵黄含量分别为:Ⅰ组1 5g,0 7g,10ml;Ⅱ组0 4g,1 4g,10ml;Ⅲ组1 5g,0 7g,4ml)低温保存(4℃)效果的观察,并对低温保存前精液的处理方法进行了比较。结果表明:Ⅲ组绵羊精液低温保存总存活时间和存活指数均好于Ⅰ、Ⅱ两组(P<0 01;P<0 05);Ⅲ组保存前经上游处理的精液在总存活时间、存活指数和体外受精效果均明显高于未经上游处理的精液。