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1.
作者比较了用分离法检测牛粪便中的副结核分枝杆菌和用镜检Ziehl-Ne-elsen染色粪便涂片中抗酸性副结核分枝杆菌菌块。粪便采自自然或人工感染副结核分枝杆菌的牛,以及未感染牛。结果表明,镜检粪便染色涂片法不是检测副结核分枝杆菌的可靠方法。因为在177份培养分离阳性粪便标本中,镜检涂片只检出99份(55.9%)为阳性。此外,在18份非副结核病牛粪标本涂片中有3份为阳性,37份培养分离为阴性的副结核病牛粪标本涂片中有18份为阳性。抗酸性菌块不能与副结核分枝杆菌区分。将副结核分枝杆菌加到未感染牛粪中时,需在每克粪便中加入15个以上的副结核分枝杆菌,分离即为阳性。 相似文献
2.
解洪业 《青海畜牧兽医杂志》1990,(1)
从已知感染副结核分枝杆菌的13群牛(192头)中采集的粪便和血液样品做了补体结合试验(CF)、琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)和酶标记免疫吸附测定(ELISA)三种副结核血清学诊断比较。从36头牛的粪便中分离出了副结核分枝杆菌,23头粪便培养阳性牛 CF 试验的滴度出现疑似或阳性,10头 AGID 试验阳性及 相似文献
3.
通过BALB/C小鼠脾细胞和NS-I/1骨髓瘤细胞融合产生了6株抗副结核分枝杆菌单克隆抗体。用ELISA方法对其中4株与副结核分枝杆菌及其它7种分枝杆菌的反应性进行了初步研究。McAb PTB1只与副结核菌苗株Ⅱ、牛分枝杆菌及无色分枝杆菌有微弱的交叉反应。Mc Ab PTB2、McAb PTB3和McAb PTB4与试验过的7种分枝杆菌都有程度不一的反应。 相似文献
4.
套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫 总被引:8,自引:1,他引:7
为了检测样品中的微量隐孢子虫,从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取DNA用作初始PCR(Initial-PCR)模板,以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR(Nested-PCR),用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物,扩增大小分别为540pb、258pb的特异片段。PCR产物经电泳鉴定,可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段,而阴性对照不能扩增目的片段;初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊100、5个/g粪便。初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为16.4%。试验表明套式PCR的敏感性比普通PCR约高100倍,能用于奶牛隐孢子虫感染情况的调查。 相似文献
5.
用3M 氯化钾浸出的副结核分技杆菌细胞壁抗原(KCl-Ag)免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞和 NS-1骨髓瘤细胞融合,制备出3株抗副结核分枝杆菌单克隆抗体—McAb-JM_1、JM_2、JM_3。用 ELISA 方法对3株单克隆抗体与副结核分枝杆菌及其他6种分枝杆菌不同抗原的反应性进行了研究.McAb-JM_1与副结核分枝杆菌不同菌株间的 KCl-Ag 和部分胞浆抗原(PPD)发生交叉反应;在其他分枝杆菌抗原中,仅与牛草分枝杆菌的 PPA 和禽型结核分枝杆菌 KCl-Ag 发生交叉反应.McAb-JM_2在副结核分枝杆菌中.与强毒株抗原发生较强反应.而与弱毒株抗原反应性较弱。McAb-JM_3在分枝杆菌中.除 Teps 株和偶发分枝杆菌抗原外.均发生交叉反应。本文讨论了这些单克隆抗体在副结核病血清学诊断及抗原分析中的意义和用途。 相似文献
6.
牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用 总被引:12,自引:0,他引:12
根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列,设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物,建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段;对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测,结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性,阳性符合率为90%(9/10);而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性,阴性符合率为100%(10/10)。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 相似文献
7.
从亚临床症状奶牛的乳中分离副结核分枝杆菌宁定桥摘译1摘要在一个受副结核分支杆菌感染的牛群中,对126头临床正常的奶牛的初乳、常乳和粪便进行分枝杆菌培养。在36头(28.6%)奶牛的粪便中检测到排泄的分枝杆菌。这36头粪样培养阳性中,8头(22.2%)... 相似文献
8.
用6种抗原制剂,通过单独或配对,用淋巴细胞刺激试验(LST)检测感染牛结核分枝杆菌麋鹿群血液样品四个。这些麋鹿屠宰后,采集组织进行结核分枝杆菌培养。LST与牛结核分枝杆菌纯化蛋白衍生物(PPD)和副结核分枝杆菌PPD比较,具有极高的敏感性和特异性,其敏感性达76%,具有63 ̄85%置信度(CL);特异性达77%(CL72-81%),仅用于结核分枝杆菌PPD抗原,LST的敏感性为70%(CL57 ̄8 相似文献
9.
采用限制性酶切片段长度多态性和PCR指印技术对牛结核分枝杆菌分型研究 总被引:3,自引:1,他引:2
5株牛结核分枝杆菌DNA经PvuⅡ消化后,用来自IS1081中的248bp荧光探针杂后后进行限制性酶切片长度多态性(RFLP)分型,5株牛分离株中4株具有相同杂交带型,剩余的1株在3.6kb处多了1条带。将248bp探针对北京牛结核分枝杆菌分离株的RFLP分型法结果与直接反向PCR分型法对上述分离株分型结果比较发现:5株牛结核分枝杆菌分离株中有2株具有相同的PCR指印带型,剩余3株牛结核分枝相杆菌分离株则PCR指印带各不相同,上述结果显示出,直接反向PCR分型法较标准的RFLP分型法分型能力强。直接PCR法对新疆牛结核分枝杆菌分离株的分型结果显示出,PCR指印带型中带数较少,且与北京牛结核分枝杆菌分离株的PCR指印带型截然不同。 相似文献
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本研究已在构建的副结核分枝杆菌C2株DNA基因文库的基础上升应用正,反向杂交试验从基因文库中筛出选出特异性片段PTP31,以光敏生物素标记制成DNA探针。用此DNA探针以及粪检菌和ELISA三种方法分别对32份副结核菌素(PPD)变态反应阳性牛粪便及相应血清样品进行检测,其检出率分别为47%(15/32),56%(18/32)和34%(11/32),对随机采集的276份牛粪便及血清样品,3种方法的 相似文献
12.
为了建立禽分枝杆菌多重PCR方法,给禽分枝杆菌亚种鉴定及禽结核病的诊断提供参考。本实验根据国外报道的诊断方法设计4对特异性引物,选用我国禽结核参考菌株(CVCC 68201)基因组DNA为模板,优化了退火温度,测定了DNA最小检测量,并进行了特异性检验。采用优化好的多重PCR体系,对国家兽医微生物菌种保藏中心保存的禽分枝杆菌标准菌株进行检测和分类。实验结果表明,禽结核参考菌株(CVCC 68201)能很好的扩增出577 bp(IS901基因片段)、385 bp(IS1245基因片段)和140 bp(dnaJ基因片段)三条目的条带,基因组DNA的最小检测量为0.38 ng/μL,目的条带在退火温度50 ℃~62 ℃之间均能得到有效扩增。对23株禽分枝杆菌菌株检测,并设立牛分枝杆菌作为阴性对照,最终将禽分枝杆菌菌株分为三大类:禽亚种/森林土壤亚种、副结核亚种、人猪亚种,与国家兽医微生物菌种保藏中心的分类结果相比不仅一致且更加详尽而有临床意义。因此,基于分子生物学方法建立的多重PCR方法可以对禽分枝杆菌亚型进行快速鉴定并对禽结核病的诊断提供参考。 相似文献
13.
建立了检测牛血清中副结核分枝杆菌的特异抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA),在试验过程中探索出一种可以避免在 ELISA 检测副结核分枝杆菌原生质抗原的抗体时,经常遇到的假阳性反应的方法。被检血清来源于副结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌。堪萨斯分枝杆菌或星形诺卡氏菌感染的牛,经细菌学检查为阴性而副结核补体结合反应阳性及用假结核分枝杆菌感染的羊。预先使用草分枝杆菌吸收后的试验血清,基本上可以消除掉假阳性反应。凡经过这种方法处理的血清,不会影响副结核病牛的 ELISA 抗体水平。试验结果表明预先用草分枝杆菌吸收的血清,可以消除在 ELISA 诊断牛副结核病 相似文献
14.
为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(SOE-PCR)获得了融合基因22-agS5B,将基因连接于表达载体pET32a(+),构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1mmol/L)诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。 相似文献
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牛源性分枝杆菌的犊牛变态反应试验 总被引:7,自引:1,他引:6
本文以我国自行分离的牛源性分枝杆菌回归本动物试验。将牛分枝杆菌等7种分枝杆菌注射犊牛,再以其分枝杆菌素进行变态反应,以观察其交叉反应的情况。试验结果表明:各分枝杆菌均表现出相互交错的变态反应。提示在结核、副结核的变态反应检疫过程中,应注意由其它分枝杆菌引起的非特异性干扰。 相似文献
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结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0... 相似文献
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