不同bFF对延边黄牛卵母细胞成熟及发育的影响

在成熟液中添加不同处理及来源的牛卵泡液(bFF),以研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及重组胚发育的影响。结果表明:未抽滤组与抽滤组间成熟率差异不显著(P>0.05),但未抽滤组显著提高囊胚率(P<0.05);卵泡直径2~8 mm组、>8 mm组和混合组(2~8 mm组与>8 mm组的混合)之间成熟率、卵裂率和囊胚发育率差异不显著(P>0.05);两试验组(黄体组、卵泡组)成熟率、卵裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),两试验组与血清组相比囊胚率显著提高(P<0.05)。试验结果提示,未抽滤黄体期卵巢表面卵泡内bFF能有效提高卵母细胞体外囊胚发育率。     

促性腺激素促进雄性小鼠体内卵巢移植体卵泡卵母细胞生长发育的研究

 【目的】探索外源促性腺激素对卵巢在雄性受体内生长、卵泡发育和卵母细胞成熟与发育能力的影响。【方法】将1日龄小鼠卵巢移植到7～12周龄雄性小鼠肾囊下,回收前用促性腺激素对受体进行处理或不处理,同龄雌性小鼠用促性腺激素进行处理后作为对照。移植21 d后回收移植卵巢,观测移植体的回收率及生长和卵泡发育;对卵母细胞进行体外成熟、体外受精,观察2-细胞胚和囊胚发育率。【结果】移植21 d后,未处理组移植体回收率为85.4%,与处理组（90.7%）差异不显著（P＞0.05）。未处理组移植体卵泡发育至成熟阶段,回收卵母细胞均处在GV期,平均每枚移植体回收卵母细胞数为（41.4±25.8）枚,2-细胞胚胎发育率为17.5%,未能发育至囊胚;处理组移植体有黄体形成,有的卵泡中有扩展的卵丘卵母细胞复合体,平均回收卵母细胞数为（33.4±20.1）枚,其中MⅡ期卵母细胞为（8.5±7.1）枚,GV期、MⅡ期卵母细胞受精后2-细胞胚胎的发育率分别为33.9％和44.3%,囊胚发育率分别为0.48%和6.3%;试验组间回收卵母细胞数差异不显著（P＞0.05）,2-细胞胚胎发育率、囊胚发育率差异极显著（P＜0.01）。试验组卵母细胞2-细胞胚胎发育率显著低于对照组（P＜0.01）,处理组MⅡ期卵母细胞囊胚发育率与对照组差异不显著（P＞0.05）。【结论】外源促性腺激素对雄性小鼠卵巢移植体具有促进卵泡发育、卵母细胞成熟和胚胎发育的作用,但不增加卵母细胞产量。     

羔羊体重与激素重复诱导对羔羊卵泡发育的影响

 为了研究体重和激素重复处理对羔羊卵泡及卵母细胞发育能力的影响,试验采用注射外源FSH+ PMSG的方法,对5~15周龄的羔羊进行激素处理,诱导其卵泡发育并活体采卵,卵母细胞体外培养。结果显示：(1) 体重居中（M组）的羔羊获得的卵泡数目多于体重较轻（L组）和较重（W组）的羔羊组,但各组之间差异不显著;M组卵母细胞数目多于其他两组,且差异显著（P<0.05）。(2）M组羔羊获得的卵母细胞体外发育卵裂率高于L组和W组,但各组间差异不显著;W组桑囊率高于其他两组,且与L组之间差异显著（P<0.05）。(3）重复处理组与初次处理组相比较,卵巢直径差异不显著,而重复处理组羔羊卵泡数目和获得的卵母细胞数目明显少于初次处理组,差异极显著（P<0.01）,同时,重复组获得的卵母细胞卵裂率和桑囊率均低于初次组。结论：羔羊体重居中,其卵母细胞数目和细胞的发育率均好于体重过轻过重的羔羊,重复处理后羔羊所获卵母细胞数目少于初次处理。      

免疫抑制素/卵泡抑素对家畜胚胎体外生产效率的提高

在家畜卵母细胞体外成熟培养过程中添加不同浓度的抗抑制素抗体或抗卵泡抑素抗体,通过观察卵母细胞的成熟率、激活后的卵裂率及囊胚发育率,研究免疫抑制素与卵泡抑素对家畜卵母细胞体外发育能力的影响。结果显示:就水牛、奶牛及猪而言,在卵母细胞成熟过程中分别单独添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体均能显著提高卵母细胞的体外成熟与卵裂率,添加的适宜浓度为50~100μg/ml。而添加抗卵泡抑素抗体还能显著提高水牛和猪的囊胚发育率。卵母细胞体外成熟期添加抗抑制素抗体与抗卵泡抑素抗体能显著提高卵母细胞的发育能力,提高早期胚胎的发育数量和质量,为改善家畜胚胎体外发育和生产提供了新方法。     

不同直径卵泡对猪卵母细胞体外成熟的影响

以TCM-199成熟培养猪卵巢表面直径2～3mm,3～5mm和5～8mm卵泡内的卵母细胞,比较了成熟培养液中添加以上各组卵泡液(pFF)对猪卵母细胞体外成熟(IVM)的影响,以成熟培养48h后排出第一极体为成熟标准对猪卵母细胞进行成熟鉴定。结果表明,2～3mm,5～8mm和3～5mm3组卵泡内卵母细胞的体外成熟(IVM)率依次升高,分别为12.7%,31.3%和46.0%,各组间差异显著(P<0.05);添加3～5mm卵泡液的卵母细胞体外成熟率(42.0%)也显著高于5～8mm组(11.0%)和2～3mm组(12.7%)(P<0.05)。试验同时观察记录了不同直径卵泡内卵母细胞的等级,结果发现5～8mm组中A级卵母细胞的比例(37.7%)显著高于3～5mm组(23.9%)(P<0.01),但其B级卵母细胞的比例(45.9%)却显著低于2～3mm(62.1%)组和3～5mm(59.2%)(P<0.05)。这说明,2～3mm,3～5mm和5～8mm3组卵泡中,卵泡直径增大,其在猪卵母细胞体外成熟中的优势渐增。     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨。试验表明:添加10%和15%的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25%和83.75%)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00%);在基础培养基中10%的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26h卵母细胞体外成熟率(75.00%和80.00%)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30%);从3~6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50%)明显高于从1~3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30%)。     

培养条件对牛卵母细胞体外受精后胚胎发育的影响

以屠宰场牛卵巢为材料,采用体外成熟、体外受精、早期胚胎的体外培养等方法,研究了牛卵泡液(BFF)浓度、颗粒细胞单层(GCM)和培养微滴大小对牛卵母细胞体外发育潜力的影响。结果表明:(1)与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%,20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05),但20%组和40%组出现卵母细胞或胚胎粘连。因此,成熟培养液中以添加10%的混合BFF较为适宜。(2)添加GCM对1级卵母细胞的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率无显著影响(P>0.05);但添加GCM的2级、3级卵母细胞受精后的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率分别显著高于未添加组(P<0.05)。(3)将取自每头牛的约20枚卵母细胞,分别置于不同大小的微滴(30,50,100和200μL)中培养、受精,结果表明,30和50μL组的囊胚发育率显著高于100和200μL组(P<0.05)。     

羔羊体外胚胎高效生产技术研究（英文）

该研究旨在比较良种肉羊5周龄、13周龄羔羊激素处理后卵巢卵泡发育及体外胚胎发育的影响。通过FSH和孕马血清促性腺激素(PMSG)处理,比较卵巢上2~8 mm卵泡的数量及体外胚胎的发育情况。结果表明:5周龄羔羊卵巢发育的卵泡数和采集到的卵母细胞数(58.6±1.9、47.4±4.2)都高于13周龄羔羊卵泡数和卵母细胞数(14.4±4.1、11.6±1.7),且差异显著(P0.05)。5、13周龄羔羊卵母细胞受精后的卵裂率(60.0%±1.9%、61.6%±5.2%)及囊胚率(27.4%±2.1%、28.2%±3.7%),两者间差异不显著。     

卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响

 以屠宰场牛卵巢为材料，研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1：按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体（COCs）分为4个试验组：＞8 mm组、2～8 mm组、腔前卵泡（PF）卵母细胞组和混合（将前3种卵母细胞混合）组。结果表明，卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育，同时，源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养，可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2：将源自优势卵泡（＞8 mm）、小卵泡（2～8 mm）和混合（所有卵泡液混合）的牛卵泡液（BFF），按照10%添加到成熟培养液中，3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05)，但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连，易于造成丢失。试验3：与未添加BFF的对照组相比，成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF，均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05)，但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此，成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。     

玻璃化冷冻对猪卵母细胞体外发育能力的影响

采用猪未成熟(GV期)和体外成熟(MⅡ期)卵母细胞分组进行冷冻保护剂毒性试验,试验组经冷冻液处理,对照组不用冷冻液处理。结果表明,GV期与MⅡ期卵母细胞相比,两者经冷冻保护剂处理后,其存活率、体外受精胚卵裂率均无显著差异(P>0.05);试验组GV期卵母细胞存活率、体外成熟率及体外受精胚卵裂率虽略低于对照组(85.9%,72.4%和50.9%对91.3%,73.9%和53.3%),但差异不显著(P>0.05);试验组MⅡ期卵母细胞存活率虽显著低于对照组,但卵裂率与对照组无显著差异(P>0.05)。表明所用冷冻液及其处理程序,对卵母细胞无明显毒性。分3组对猪卵母细胞进行冷冻保存试验:I组为对照组;II组为GV期卵母细胞冷冻组;III组为MⅡ期卵母细胞冷冻组。结果表明,经开放式拉管(Open pulled straw,OPS)法玻璃化冷冻后,GV期和MⅡ期卵母细胞均获得较高的形态正常率,但GV期卵母细胞冷冻后存活率要显著高于MⅡ期卵母细胞(P<0.05)。经玻璃化冷冻后,GV期卵母细胞的体外成熟率和卵裂率均明显低于新鲜卵母细胞(42.6%和7.79%对73.9%和53.3%,P<0.05),MⅡ期卵母细胞冷冻-解冻后未获得卵裂。在GV期卵母细胞冷冻组,154枚卵母细胞冷冻后经体外成熟、体外受精及体外培养,共有12枚发生卵裂,其中6枚发育至8-细胞,3枚发育至16-细胞,3枚发育至桑椹胚。本研究表明,所用冷冻方案更适合于猪GV期卵母细胞的冷冻保存。     

羔羊体外胚胎高效生产技术研究

该研究旨在比较良种肉羊5周龄、13周龄羔羊激素处理后卵巢卵泡发育及体外胚胎发育的影响.通过FSH和孕马血清促性腺激素(PMSG)处理,比较卵巢上2~8 mm卵泡的数量及体外胚胎的发育情况.结果表明:5周龄羔羊卵巢发育的卵泡数和采集到的卵母细胞数(58.6±1.9、47.4±4.2)都高于13周龄羔羊卵泡数和卵母细胞数(14.4±4.1、11.6±1.7),且差异显著(P<0.05).5、13周龄羔羊卵母细胞受精后的卵裂率(60.0%±1.9%、61.6%±5.2%)及囊胚率(27.4%±2.1%、28.2%±3.7%),两者间差异不显著.     

牛卵巢的保存与卵巢内卵母细胞采集的研究

利用屠宰牛的卵巢,研究了卵巢内(Interior Ovary,IO)卵母细胞的回收方法与影响IO卵母细胞回收数量的因素,以及卵巢保存方法对卵母细胞体外受精后卵裂率与体外发育能力的影响.结果表明抽吸采取表面卵泡卵母细胞以后,用间隔1.6 mm的4个刀片平行排列构成的切割刀,纵横切割秦川牛卵泡期卵巢,其卵母细胞回收数量最高.两次回收平均每个卵巢可获得26.45个A、B级可用卵,较单纯抽吸采卵(5.15个)提高了约4倍.刀距增宽或缩小都会降低卵母细胞的回收数量.牛品种不同对IO卵母细胞的回收数量有显著影响,以中国荷斯坦牛最多(34.25个/卵巢),秦川牛次之(21.75个/卵巢),山丹牛最少(8.25个/卵巢).牛繁殖状态不同对IO卵母细胞的回收数量有显著影响,以卵泡期最多(21.75个/卵巢),黄体期和妊娠期次之(分别为11.75、10.75个/卵巢),老龄退化期最少(4.25个/卵巢).回收的IO卵母细胞直径和透明带外径分别达(126.9±9.98) μm和(151.85±10.39) μm,均较表面卵母细胞(分别为136.05±6.09 μm和160.80 μm±4.23 μm)要小的多(P＜0.01).卵巢保存温度25～29℃与30～37℃对IO卵母细胞体外受精后卵裂率与6～8细胞胚发育率无显著影响(P＞0.05),但保存时间则有显著影响,超过6 h会显著降低卵裂率和6～8细胞胚发育率(P＜0.05).     

山羊大腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

从屠宰场采集卵巢。抽吸法回收2～6mm大腔卵泡卵母细胞。随机抽样后,测量其直径为167.42±17.43μp。A,B级卵泡卵母细胞进行体外成熟培养,其成熟率为67.50％。山羊新鲜精液以BO液或MD-H液处理后,与体外成熟卵母细胞进行授精,受精率分别为56.61％（17／30）和63.33％（19／30）,两组间差异不显著（P＞0.05）。BO和MD-H液均适宜于山羊精子获能处理。体外受精卵的2细胞胚发育率为16.67％（6／36）,4细胞胚发育率为2.78％（1／36）。     

对猪小腔卵泡孤雌激活胚胎发育力的初步探索

为探讨直径为2 mm以下和2～6 mm猪卵泡卵母细胞的体外培养分裂率与囊胚率差异,采用相同体外成熟培养条件,来培养从不同直径的2种卵泡中所抽出的卵母细胞,在卵母细胞成熟培养后44～48 h,对卵母细胞进行化学激活和体外培养,观察胚胎体外发育能力;在培养48 h时进行分裂数据统计,培养168 h时统计囊胚个数。结果发现,2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均分裂率差异显著,分别为62.46%、81.76%(P0.05);2 mm以下猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率与2～6 mm猪卵泡卵母细胞孤雌激活后胚胎的体外培养平均囊胚率差异不显著,分别为11.71%、15.30%。说明正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞在体外成熟后,孤雌激活胚分裂率依次降低,孤雌胚胎的分裂能力随卵泡直径的增大而增强;正常卵泡、小腔卵泡的卵母细胞体外成熟后,孤雌激活胚囊胚率随卵泡直径的增大有一定增高,但变化不显著。     

獭兔体外成熟卵母细胞孤雌激活及体细胞核移植

[目的]建立利用獭兔体外成熟卵母细胞进行孤雌激活及体细胞核移植的技术体系,促进獭兔现代育种技术的发展。[方法]以獭兔屠宰场废弃卵巢为试验材料,利用体外成熟、孤雌激活、体细胞核移植等方法,研究了獭兔体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力。[结果]1)直径大于1 mm卵泡内的卵母细胞孤雌激活后的发育能力显著强于0.7~1.0 mm卵泡内的卵母细胞。2)卵母细胞体外培养(IVC)15~21 h后孤雌激活,卵裂率显著高于IVC 12 h组。3)2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)与5μg·m L-1亚胺环己酮(CHX)联合处理1 h,孤雌激活效果最好。4)IVC 14 h后,78%的卵母细胞极体与核偏移角度小于10°;IVC 18 h后,34.6%的极体偏离核的角度大于45°。5)体外成熟的獭兔卵母细胞可以较好支持体细胞核移植的重构胚,核质作用期间采用MG132处理,降低了重构胚的囊胚率。[结论]从大于1 mm卵泡内回收卵母细胞并IVC 18 h后,采用2.5μmol·L-1Ionomycin处理5 min,再用2 mmol·L-16-DMAP与5μg·m L-1CHX联合处理1 h,是獭兔孤雌激活和体细胞核移植的最佳方案。     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

牛卵巢内卵母细胞体外成熟与受精的研究

利用屠宰牛的卵巢 ,研究了卵巢内 (IO)卵母细胞体外成熟、受精及发育能力。结果表明 ,成熟培养液中添加FSH (10 μg·mL-1)、hCG (2 0 μg·mL-1)和E2 (1μg·mL-1)等激素对IO卵母细胞受精发育能力有极显著促进作用(P <0 0 1) ;单独添加发情牛血清即可起到相同的效果。IO卵母细胞体外成熟培养 2 1～ 2 4h ,其卵裂率为 34 2 1%～36 80 % ,6～ 8细胞胚发育率为 2 3 6 8%～ 2 4 5 3% ,延长或缩短培养时间都会降低卵裂率 (P <0 0 1)和 6～ 8细胞发育率 (P <0 0 5 )。采用TALP液法处理精子虽与BO液法具有相似的卵裂率 ,但TALP液法能显著提高 6～ 8细胞胚发育率(P <0 0 5 ) ,授精前机械脱除卵丘会显著降低卵裂率和 6～ 8细胞胚发育率 (P <0 0 5 )。成熟培养液中的卵丘细胞与颗粒细胞单层均能显著提高IO卵母细胞受精后 6～ 8细胞胚的发育率 (P <0 0 5 )。     

颗粒细胞和培养微滴大小对牛卵母细胞体外受精后胚胎发育的影响

以屠宰场牛卵巢为材料,研究了颗粒细胞单层(GCM)和培养微滴大小对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1从卵泡抽取卵丘卵母细胞复合体(COCs),并根据卵母细胞外面卵丘细胞的层数将其分为3类,分别在体外成熟(IVM)和早期胚胎的体外培养(IVC)培养液中添加GCM,与不添加的对比;添加GCM对1级卵母细胞的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率无明显影响,但添加GCM的2级、3级卵母细胞,受精后的卵裂率、6~8细胞发育率和囊胚率分别高于未添加组(P<0.05)。试验2将取自每头牛的约20枚卵母细胞,分别置于不同大小的微滴(30μl,50μl,100μl和200μl)中培养、受精,30μl和50μl组的囊胚发育率明显高于100μl和200μl组。     

绵羊卵巢运输、保存温度及时间对其卵母细胞孤雌发育能力的影响

为研究绵羊卵巢不同运输温度、保存温度及时间对其卵母细胞孤雌发育能力的影响,将采集卵巢随机分别置于(10～15),(20～25),(30～35)℃3种不同温度生理盐水中运输到实验室培养,然后优选较好运输温度将采回卵巢随机分为3个试验组,分别保存在4,(14～18),(25～30)℃生理盐水中,保存15～17h后进行成熟培养并孤雌激活。结果表明:(1)在不同运输温度的卵母细胞中,温度为20～25℃时卵母细胞能够进行最好的发育,其成熟率和囊胚率分别为67.44%,35.93%;(2)将绵羊卵巢在14～18℃保存15～17h,对卵母细胞的成熟率(61.81%)、孤雌激活后囊胚的发育率(29.03%)均无显著影响,而将卵巢保存在4℃或25～30℃却显著降低了卵母细胞的成熟率(41.90%,18.40%)与卵裂率(9.09%,13.04%),没有发育到囊胚。从而得出,绵羊卵巢卵母细胞体外培养的长距离运输适宜温度为20～25℃。卵巢在14～18℃保存过夜,不影响卵母细胞的发育能力。     

卵巢质量及培养条件对郏县红牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的郏县红牛卵巢,研究卵巢质量及培养条件对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:A类卵巢平均获得的卵母细胞数(2.0枚)明显低于B类卵巢获得的卵母细胞数(5.4枚),从A类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(55.00%)、卵裂率(37.50%)显著或极显著低于B类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(80.00%)(p<0.05)、卵裂率(60.17%)(p<0.01);将随机分成三组的卵母细胞分别培养20h(Ⅰ组)、24h(Ⅱ组)、28h(Ⅲ组),三组成熟率(77.77%、78.57%、74.43%)之间无显著差异(p>0.05),但卵裂率Ⅰ组、Ⅱ组(51.79%、58.16%)明显高于Ⅲ组(36.98%)(p<0.05),Ⅰ组、Ⅱ组差异不显著(p>0.05);以M-199为基础液,比较单独添加ECS和FCS与激素配合的情况下,两种血清种类对卵母细胞成熟的影响,结果表明卵母细胞成熟率(73.33%、75.00%)、卵裂率(52.21%、54.35%)均无显著差异(p>0.05)。