斑点酶联免疫吸附试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体方法的建立

首次建立了斑点－酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ，美洲株）抗体的方法。特异性鉴定表明，ＰＲＲＳＶ不与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒阳性血清反应；与美国进口的ＰＲＲＳＶ抗体ＥＬＩＳＡ诊断试验盒检测结果比较，３５份猪血清的阴、阳性检出总符合率为８２．９％（２９／３５），其中Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率略高于进口试剂盒的检出率。     

斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ＝ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１＝３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检地的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄ     

斑点酶联免疫吸附试验检测小鹅瘟病毒的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）能检出少至４．８８３ｎｇ／ｍｌ的小鹅瘟抗原。与鸭瘟病毒（ＤＰＶ）、雏鸭病毒性肝炎病毒（ＤＶＨＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ）等对照，病毒不发生交叉反应。能从人工感染１２小时后的雏鹅组织中检出小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）。对１８只人工感染死的雏鹅的检同率为１００％，其中对不同组织的阳性检出率为：肝脏、肾脏、空肠为１００％，心脏、脾脏、十二指肠为９４．４％，回肠８８．９     

衣原体单克隆抗体在牛羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞亲交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，对本地区所采集的１２８份羊血清、９０份牛血清进行检测，结果，羊血清阳性检出率为２５．８％，牛血清阳性检出率为３２．２％，选择５０份羊血清、５０份牛血清用已建立的检测衣原体抗体ＥＬＩＳＡ与间接血凝试验（ＩＨＡ）进行比较，牛血清ＥＬＩＳＡ阳性检出率为３２．０％，ＩＨＡ为２４．０％，ＥＬＩＳＡ比ＩＨＡ试验高出８个百分点；羊血清ＥＬＩＳＡ阳性检出率为２６．０％，ＩＨＡ为２２．０％，ＥＬＩＳＡ比ＩＨＡ高出４个百分点。     

应用单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验检测兔出血症病毒

应用建立的单克隆抗体夹心酶联兔疫吸附试验（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）,检测了人工感染兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）ＤＪＲＫ细胞毒、肝毒的兔以及自然感染ＲＨＤＶ的兔的组织样品。结果表明,感染死亡兔的肝、脾、肾、骨髓样品病毒抗原的检出率为１００％,淋巴结和肌肉的检出率分别为９７．５％和７９．５％。ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ能检出肌肉中血凝试验不能检出的ＲＨＤＶ抗原。此外,还用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测了肝毒人工感染兔血中ＲＨＤＶ的动态,并对１０份兔出血症脏器灭活苗的效价作了滴定。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳     

诊断B组轮状病毒的三种酶联免疫方法的建立

用从当地分离鉴定的山羊Ｂ组轮状病毒ＫＢ－６３毒株，在剥夺初乳的山羊羔体内传代繁殖病毒，制备抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）及生物素－亲和素系统酶联免疫吸附试验（ＢＡＢ－ＥＬＩＳＡ）。这三种方法经阻断试验、重复性试验以及交叉试验表明，其特异性、重复性好。以双盲法将此三种方法与对流免疫电泳法（ＣＩＥ）和聚丙烯酰胺凝胶电泳法（ＰＡＧＥ）作了对比研究，     

用酶联免疫吸附试验（ELISA）评价小鸡IBD免疫效果

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）评价小鸡ＩＢＤ免疫效果曹永长，毕英佐，朱基美（华南农业大学动物科学系，广州５１０６４２）酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）用于生产场疫苗的免疫效果评价还是最近几年才发展起来的￣［１，２］。我们采用美国ＩＤＥＸＸ公司提供的Ｉ...     

Ab─ELISA和Ag─ELISA诊断骆驼伊氏锥虫感染的比较

采用四种方法：即①单克隆抗体检测抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＵＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（３４％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出９０头阳性（４９％）。其中ＢＣＥ未能检出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头（７５％）。所有阳性头数中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出９３％，Ａｂ－ＥＬＩＳＡ９５％。根据５５头的结果，阳性与阴性之间Ａｇ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异极显著（Ｐ＜０．０００１），Ａｂ－ＥＬＩＳＡＯＤ值差异不显著。因此，用Ａｇ－ＥＬＩＳＡ或结合ＢＣＥ诊断伊氏锥虫感染比用ＡＢ－ＥＬＩＳＡ更理想。     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和试验和单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验对８１头美国进口猪轿清作猪传染性胃肠炎抗体检测。ＳＮ试验同７份阳性血清，检出率为８．６４％，Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于Ｓ     

Ab—ELISA和Ag—ELISA诊断骆驼伊氏锥虫感染的比较

采用四种方法：即①单克隆抗体检抗原的酶联免疫吸附试验（Ａｇ－ＥＬＩＳＡ）②检测抗体的在酶联免疫吸附试验（Ａｂ－ＥＬＩＳＡ）③表膜检查（ＢＣＥ）④小白鼠接种（ＭＩ），检查了肯尼亚１８３头骆驼锥虫的循环抗原，ＢＣＥ查出尼亚１８３头骆驼锥早的循环抗原，ＢＣＥ查出３７头阳性２０％），ＭＩ６０头阳性（３３％），Ａｇ－ＥＬＩＳＡ６３头阳性（４９％），Ａｂ－ＥＬＩＳＡ检出出的２４头中，Ａｇ－ＥＬＩＳＡ检出１８头     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板,将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ,确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ４℃冰箱     

斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。     

应用单抗酶联免疫吸附试验对仔猪猪瘟超前免疫抗体的监测

采用单抗ＥＬＩＳＡ酶联免疫吸附试验，监测仔猪瘟弱毒细胞苗免疫血清抗体，结果表明１６－２１日龄仔猪中，吮初乳前９０ｍｉｎ注苗，仔猪血清免疫抗体ＥＬＩＳＡＯＤ值≥０．２占５８．８％；吮初乳前４５ｍｉｎ注苗，仔猪血清免疫抗体ＥＬＩＳＡＯＤ值≥０．２占７５％；吮初乳后３０ｍｉｎ注苗，仔猪血免疫抗体ＥＬＩＳＡＯＤ值和不注苗仔猪血清母源抗体ＥＬＩＳＡＯＤ值都小于０．２。结果表明，超前免疫的效果是好的，尤以妆乳     

酶联免疫吸附测定法检测克伦特罗

用自制的β激动剂克伦特罗（ＣＬ）抗血清建立其酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法。抗血清最佳稀释度为１ｖ１００００,免疫检测范围为１５．６μｇ／ｍ ｌ～１．９０ｎｇ／ｍ ｌ。用该法检测了饲料、尿样与脏器等样品,表明该法简便、特异和灵敏,具有实用价值     

酶联免疫吸附试验检测羊传染性脓疱病毒

用辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记经兔体高免提纯的兔抗羊传染性脓疱病（Ｏｒｆ）ＩｇＧ，用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测不同毒株的传染性脓疱病毒及病毒基因在载体中重组克隆后转化到受体菌中的表达情况。结果表明，ＨＲＰ标记的ＩｇＧ，经自动酶标光度计检测，对ＨＣＥ、ＨＬＲ、ＬＭＥ、ＤＰＥ、ＨＢＧＥ、ＹＬＧＥ毒、ＬＴＥ囊膜蛋白及ＨＣＥ１０代细胞毒都呈现特异性反应。在模式２的检测中，ＯＤ值均在０．０７以上，在模式３的检测中，都呈现阳性。受检的４株重组转化大肠杆菌中，一株表现阳性，说明重组菌对Ｏｒｆ病毒的抗原产生表达。试验证明，ＥＬＩＳＡ是对羊传染性脓疱病毒进行诊断检测的一种快速、灵敏、准确的方法。     

现地马传贫琼扩阴性 酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验

在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性４匹、ＤＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为陧阳性，用马传盆病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５