鸽新城疫浓缩抗原的制备及稳定性测定

采用聚乙二醇浓缩法，制备鸽新城疫血凝抑制试验浓缩抗原，在不同温度、地点和环境下，测定浓缩抗原的稳定性。结果表明，浓缩抗原血凝图型清晰、稳定，洗脱时间由４０ ｍｉｎ 延长到４ ｈ ；加入甘油保护剂的浓缩剂的浓缩抗原在０ 和４ ℃条件下，保存半年以上，血凝滴度无明显变化。     

鸡新城疫诊断抗原制备方法的研究

将疑似新城疫病料无菌采集后进行RT-PCR鉴定,将阳性病料研磨后接种SPF鸡胚,收获的阳性尿囊液进行血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)检测病毒效价,病毒效价达到2~7~2~8,病毒凝集效价达到10log2。使用10%蔗糖溶液及18-25k Da透析袋对阳性尿囊液进行浓缩,浓缩至原体积的1/5;10%福尔马林灭活诊断抗原,经过6h后灭活达100%;诊断抗原效价测定:血凝效价为2~(10);血凝抑制效价为10log2。利用制备的鸡新城疫诊断抗原和鸡新城疫标准诊断抗原与鸡新城疫标准检测抗体进行血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI),对比结果:鸡新城疫诊断抗原病毒效价为2~(10),高于鸡新城疫标准诊断抗原的2~9,鸡新城疫诊断抗原凝集效价为10log2,等同于鸡新城疫标准诊断抗原,证明所制备鸡新城疫诊断抗原符合要求,可以应用到生产实践中。     

进口法国种鸽新城疫病毒的分离和鉴定

用鸡成纤维细胞和鸡胚从30只进口法国种鸽中分离出一株病毒,细胞培养物的HA效价为3log2,尿囊液的HA效价为4log2,新城疫阳性血清能抑制这种血凝作用,HI效价均为7log2,禽流感阳性血清不能抑制这种血凝作用.通过透射电镜观察、毒力测定等最终确认,分离出的病毒为新城疫病毒.     

宁夏地区部分蛋鸡场新城疫卵黄抗体效价的检测与分析

本研究旨在检测宁夏地区部分蛋鸡场新城疫卵黄抗体效价的水平及差异,通过血凝试验检测本实验室制备的新城疫病毒抗原的效价并校正血凝单位,血凝抑制试验检测宁夏地区14个蛋鸡场140枚鸡蛋卵黄抗体的效价。试验结果显示,新城疫病毒的血凝效价为8 log2,卵黄抗体效价平均在10 log2~13 log2。因此,宁夏地区蛋鸡场新城疫卵黄抗体效价较高,研究结果为了解宁夏地区新城疫防治的效果提供了试验数据。     

命新城疫浓缩抗原的制备及稳定性测定

采用聚乙二醇浓缩法，制备命新城疫血凝抑制试验浓缩抗原，在不同温度、地点和环境下，测定浓缩怕的稳定性。结果表明，在浓砀血凝固型清晰、稳定、洗脱时间由４０ｍｉｎ延长到４ｈ；加入甘油保护剂的浓缩剂的浓缩抗原在０和４℃条件下，保存半年以上，血凝滴度无明显变化。     

2种不同红细胞悬液对鸽血清抗体监测的影响

本试验分别利用鸽红细胞悬液和鸡红细胞悬液进行血凝和血凝抑制试验,检测鸽血清中的禽流感H5抗体和新城疫抗体水平,比较两者检测结果的差异。结果表明,在血凝试验中,对于无论是禽流感抗原还是新城疫抗原,鸽红细胞检测的血凝价均小于鸡红细胞检测的结果。在血凝抑制试验中,鸽红细胞检测鸽血清中的抗体水平大于鸡红细胞检测。     

一例藏鸡新城疫病毒的分离鉴定与病指数试验

取疑似新城疫病毒(NDV)感染的病料进行9日龄鸡胚接种,结果分离到一株病毒.该病毒具有血凝性,血凝活性能被新城疫阳性血清所抑制.减蛋综合征(EDS)阳性血清,传染性支气管炎阳性血清、禽流感H5、H9单因子血清进行血凝抑制(HI)交叉试验发现,该病毒不能抑制血凝活性,动物回归试验出现与新城疫病毒感染鸡相一致的症状,可确认该病为新城疫病毒感染.根据NDV毒力测定标准,MDT＞90 h,ICPI为0.38,IVPI值为0,可判定为新城疫弱毒株.     

鸡肾型传染性气管炎病毒分离及其血凝特性

从４个不同的发病鸡场分离出４株肾传支病毒，命名为Ｘ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ２株，并成功地感染鸡，复制出肾传支病例。选Ｂ２株与以前本室保存的肾传支病毒Ａ株经鸡胚培养、浓缩、胰酶处理制成ＨＡ抗原，对该抗原的稳定性与肾传支阴性血清，新城疫阳性血清、肾传支高免血清进行ＨＩ试验。结果表明，由Ｂ２毒株制备的ＨＡ抗原稳定性很好，新城疫阴性血清和肾传支阴性血清均不能抑制其血凝活性，肾传支高兔血清能充分地抑制其血凝活性。     

费县养鸡场新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测

本次检测费县某蛋鸡场血样30份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体监测。结果表明,该鸡场新城疫HI抗体效价≥5log2的占87%,新城疫免疫合格;而禽流感抗体效价≥5log2的占67%,禽流感H5亚型免疫失败,鸡场必须补免或重免禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。     

鸡肾型传染性气管炎病毒分离及其血凝特性

从４个不同的发病鸡场分离出４株肾传支病毒，命名为Ｘ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３株，并成功地感染鸡，复制出肾传支病例。选Ｂ２株与以前本室保存的肾传支病毒Ａ株经鸡胚培养、浓缩、胰酶处理制成ＨＡ抗原，对该抗原的稳定性与肾传支阴性血清、新城疫（ＮＤ）阳性血清、肾传支高免血清进行ＨＩ试验。结果表明，由Ｂ２毒株制备的ＨＡ抗原稳定性很好，新城疫阳性血清和肾传支阴性血清均不能抑制其血凝活性，肾传支高免血清能充分地抑制其血凝活性。     

云南省楚雄州部分地区猪瘟血清学调查

为了解楚雄州部分地区的猪瘟免疫情况,利用酶联免疫法(ELISA)对楚雄市、南华县和禄丰县随机采取的393份血清进行猪瘟抗体检测,并对各县(市)的调查数据加以比较,了解猪瘟在楚雄州部分地区的免疫情况。结果显示,楚雄州部分地区均有较高的猪瘟抗体阳性率,各县(市)的猪瘟抗体阳性率都在80%以上,有的县(市)猪瘟抗体甚至达到了100%。说明楚雄州部分地区的猪瘟免疫效果较好,猪瘟免疫成功。     

基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立

为建立一种检测兔出血症病毒（Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV）抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A（31～250 aa）和B（470～579 aa）两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a（＋）,转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物（AB）的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区（AB）,重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。     

鸡新城疫病毒与传染性支气管炎病毒同胚培养的试验研究

将鸡新城疫病毒（NDV）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）按一定的稀释比例等量混合接种9~10日龄SPF鸡胚,让其在同一鸡胚中增殖（简称同胚培养）。试验结果表明,用5倍稀释的ND-Lasota病毒液与 5000倍稀释的IBH₁₂₀病毒液等体积混合后尿囊腔接种鸡胚,能在同一鸡胚中正常增殖,接种后96 h收毒,用红细胞凝集试验（HA）测得NDV、IBV两种病毒的血凝价分别为11 log2和12 log2,不低于各自病毒单独增殖的HA滴度,病毒的增殖基本趋于平衡。同时也证实了在合适的培养条件下,IBV对NDV的复制不会产生干扰。     

绵羊肺炎支原体分离株交叉反应性的测定

绵羊肺炎支原体分离株致敏经过鞣酸和戊二醛处理的绵羊红细胞,制备成试验用抗原,与通过攻毒取得的几种血清进行间接血凝试验来检测其交叉反应性。通过检测,绵羊肺炎支原体分离株同无乳支原体、巴氏杆菌等几种可以引起肺炎症状的菌种无交叉反应性。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱毒株特异性抗原表位的鉴定

通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virtls,Hp-PRRSV）HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2（Nonstnduralprotein2）蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western blot分析。结果表明表达的融合蛋白F65-11（^749KGEPvsdqpak^759）能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4 F5感染猪的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变（S754）处存在一个免疫优势抗原表位。将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸（^754SDQPAK^759）C端缩短到第3个氨基酸（^749KGEPVSDQ^757）时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为^753VSDQ^756。选取GenBank中提交的部分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65—11变异位点C^754→7^754为HuN4株系列传代毒株所特有。本研究结果证实抗原表位F65—11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原。     

鸡新城疫高免血清的制备

采用鸡新城疫Lasota株病毒（NDV）和鸡新城疫灭活疫苗按6组不同的免疫程序免疫12只12周龄SPF公鸡,以探索快速制备效价较高的鸡新城疫高免血清的方法。结果表明,不同的NDV剂量可以影响抗体水平增长的速度,免疫剂量越大,抗体水平增长越快;但是NDV两次免疫后只能使抗体水平增长到10log2,而再以灭活疫苗免疫可使抗体水平达到14log2。     

Observations on the preparation and stability of infectious bronchitis virus hemagglutination antigen from virus propagated in chicken embryos and chicken kidney cell cultures

A total of 166 infectious bronchitis virus (IBV) hemagglutination (HA) antigen preparations were made during a 30-month period from allanto-amnionic fluid (AAF) from chicken embryos inoculated with 10 different IBV strains (Mass 41, Conn 46, H52, Florida 18288, Ark 99, JMK, T, Holte, EF, SE17). Antigens were prepared by inoculating 9- or 10-day-old embryos with 10(5.0) to 10(6.5) EID50 IBV, harvesting AAF after a 30-hour-postinoculation incubation, and phospholipase C (PLC) treatment of virus concentrated by pelleting from the AAF. Longer (48 hr) incubation times were tried, but production of H52 HA antigen was successful only from AAF harvested after 30 hours of incubation. AAF from JMK-infected embryos had lower infectivity titers and frequently yielded lower HA antigen titers than the other strains. The treatment of AAF with fluorocarbon did not enhance or diminish HA activity but did yield clearer antigens by removing extraneous material. Polyethylene glycol precipitation of virus was an acceptable alternative to pelleting virus at 39,000 X g. Inactivation of IBV with 0.1% betapropiolactone did not affect HA activity, whereas inactivation with 0.1% formalin caused a marked reduction in HA titer. Different buffer formulations including phosphate, tris, or HEPES were tried to optimize the conditions for PLC treatment of virus concentrate, but there were no apparent differences in the antigens prepared in the different buffers. The HA antigen preparations were stored and were stable at 4 C. Antigen titers of greater than or equal to 64 after storage for 20 months or longer were not uncommon. Addition of merthiolate as a preservative had no deleterious effect on HA activity. Antigen stability appeared to be enhanced by incorporating EDTA in buffer for virus pellet recovery and during enzyme treatment. Attempts to produce HA antigens from cell-culture-adapted virus propagated in chicken kidney cells were less satisfactory. An acceptable HA antigen was prepared from only two (Mass 41, SE17) of the seven strains that were tried. Virus propagation in chicken embryos is the better method of the two for IBV HA antigen production. Aside from the need to concentrate virus and treat the concentrate with PLC, there appeared to be considerable latitude in the procedures that can be used to make acceptable IBV HA antigens.     

新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合征三联油乳剂苗免疫对比试验

用血凝抑制试验（ＨＩ）监测自制ＮＤＲＩＢＥＤＳ、ＮＤＫＩＢＥＤＳ三联油乳剂灭活苗免疫鸡的抗体水平,并进行相应强毒攻击,同时以ＮＤＥＤＳ二联、ＲＩＢ、ＫＩＢ等自制油苗和进口ＮＤＲＩＢＥＤＳ三联油苗作对照。在此基础上,用自制三联苗免疫产前鸡４批共３８５２只,进行了田间免疫试验。结果表明：１用各种疫苗免疫后,第２０天鸡体ＨＩ抗体达峰值,维持３个月左右,至免疫后３６０天,ＮＤ抗体仍维持在８０ｌｏｇ２以上,ＲＩＢ、ＫＩＢ和ＥＤＳ的ＨＩ抗体均在７０ｌｏｇ２以上。经检验不同疫苗免疫的鸡相应抗体在同时期内均无显著差异（Ｐ＞００５）。２攻毒试验也表明,自制苗和进口苗具有同等的免疫效果,均获良好的免疫保护。３田间免疫试验表明,自制三联苗免疫效果良好。     

马流感病毒A/Equine/Huabei/01/07(H3N8)对灵缇犬的实验性感染

为了解灵缇犬对马流感病毒A/Equine/Huabei/01/2007(H3N8)的易感性,将马流感病毒培养液以1.0 mL(含105.7EID50)经静脉途径接种4条灵缇犬,另以2.0 mL(含2×105.7EID50)经滴鼻、点眼方式接种3条灵缇犬。采用临床症状和病理学观察、免疫酶组织化学染色技术、病毒分离、HI抗体检测和流感病毒受体类型检测技术,对病毒在灵缇犬体内的感染情况进行了系统研究。结果表明,感染的7条犬在整个试验观察期间体温等临床指标均无异常变化,未见明显的肉眼和组织学病变。感染后5 d,4条感染犬的气管、支气管和细支气管上皮细胞内流感病毒M蛋白均为阳性,1条犬的咽拭子病毒分离结果为阳性,1条犬的马流感病毒H3亚型HI抗体阳性。感染后14d,剩余3条感染犬中有2条犬马流感病毒H3亚型HI抗体呈阳性。试验证明,目前流行的A/Equine/Huabei/01/2007(H3N8)病毒可以感染灵缇犬,但不导致灵缇犬出现明显的临床症状。灵缇犬的喉头、气管上皮细胞具有与马流感病毒结合的SAα2,3 Gal受体。