朊蛋白与金属离子之间作用的研究进展

朊病毒(PrP^Sc)是由动物体内正常朊蛋白PrP^c构象改变形成的,PrP^Sc与PrP^C在氨基酸序列上完全一致,PrP^C中α-螺旋丰富而PrP^Sc富含β-折叠。目前,科学家还未研究清楚PrP的生理机能。人们普遍认为:人和动物感染朊病毒病时除PrP外还存在一些重要的辅助因子影响着PrP^C变构、PrP^Sc传播、PrP^Sc引起神经细胞凋亡等病变过程,因此,研究朊蛋白的各种辅助因子将有助于阐明这方面的问题,这些辅助因子包括各种金属离子,如Ca²⁺、Cu²⁺、Fe²⁺、Mn²⁺。作者概述金属离子对朊蛋白结构和功能的影响,以及它们在朊病毒病的发病过程中可能起的作用。     

冷藏期家蚕滞育卵和即时浸酸卵的H2O2含量及过氧化氢酶基因表达的变化

将产下后48h的家蚕滞育卵和即时浸酸卵进行低温(5℃)冷藏处理30d以上,滞育卵孵化率显著上升,而即时浸酸卵孵化率显著下降。为了探讨低温处理对滞育卵和即时浸酸卵的孵化产生不同影响的分子机制,测定了冷藏期间2种卵中的H2O2含量、过氧化氢酶(CAT)基因mRNA转录水平和CAT活性变化。结果表明:2种卵在冷藏期间随着卵中的H2O2含量显著增加,CAT基因mRNA转录水平也上调;虽然冷藏后的10～70d,2种卵中的H2O2含量、CAT基因mRNA转录水平及CAT活性都显著上升,但滞育卵的H2O2含量仍显著高于即时浸酸卵,而CAT基因mRNA转录水平和CAT活性则显著低于即时浸酸卵。即时浸酸卵在冷藏过程中H2O2含量显著增加,可能造成了对胚胎的氧化伤害,从而降低其孵化率。然而,滞育卵在冷藏过程中的CAT基因mRNA转录水平及CAT活性相对较低,H2O2相对较高,胚胎却未受到氧化伤害,推测低温处理可能诱导了滞育卵中其它抗氧化反应。     

猪胰高血糖素样肽2及其长效化物在大鼠体内的药代动力学研究

本试验旨在研究猪胰高血糖素样肽-2(p[Gly2]GLP-2)、聚乙二醇修饰猪胰高血糖素样肽2(PEG-p[Gly2]GLP-2)和p[Gly2]GLP-2微球在大鼠体内的药代动力学过程,为利用p[Gly2]GLP-2修复断奶仔猪肠道损伤提供参考依据。选取18只280 g左右的雄性SD大鼠,随机分为3组,分别单次皮下注射p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)、PEG-p[Gly2]GLP-2(5.64 nmol/kg)和p[Gly2]GLP-2微球(15 mg/只),定点采血后,酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定胰高血糖素样肽-2(GLP-2)的血药浓度。结果表明:1)PEG-p[Gly2]GLP-2的半衰期(t1/2)是p[Gly2]GLP-2的4倍,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)和平均滞留时间(MRT0-t)是p[Gly2]GLP-2的3倍,清除率(CL)是p[Gly2]GLP-2的1/2,两者的达峰浓度(Cm ax)相差不大,PEG-p[Gly2]GLP-2的达峰时间(Tm ax)滞后于p[Gly2]GLP-2。2)p[Gly2]GLP-2微球的达峰时间与p[Gly2]GLP-2、PEG-p[Gly2]GLP-2相差不大,但半衰期为(72.20±6.02)h,平均滞留时间为(90.66±7.41)h。结果提示,经聚乙二醇(PEG)修饰后p[Gly2]GLP-2的药代动力学行为发生了很大的改变,半衰期延长、达峰时间滞后、平均滞留时间延长、血浆清除减慢、生物利用度更高;p[Gly2]GLP-2微球半衰期更长,且持续稳定的释放,操作便利。     

H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响

研究了H2O2与Fe2+等金属离子产生的自由基胁迫对桑树生理特性的影响,旨在为桑树的抗逆栽培提供理论参考。以桑树叶片为材料,研究H2O2与Fe2+、Cu2+、Zn2+协同作用对桑自由基伤害和保护酶活性的影响。结果表明:经H2O2-Fe2+、H2O2-Cu2+和H2O2-Zn2+3种体系溶液处理的桑.OH含量分别提高34.38%、8.14%和5.43%;O2.-含量分别降低78.77%、54.75%和63.84%;1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)清除率分别降低44.60%、57.34%和54.64%;超氧化物歧化酶(SOD)活性分别提高44.45%、36.02%和28.28%;多酚氧化酶(PPO)活性分别降低68.18%、86.58%和54.78%;过氧化氢酶(CAT)活性分别降低97.46%、96.57%和68.02%;过氧化物酶(POD)活性分别降低22.22%、提高7.42倍和66.67%。H2O2与Fe2+等的协同作用破坏了桑细胞内自由基动态平衡,导致自由基含量提高,保护酶活性受到显著影响。     

猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化及品种与营养影响特点

选用荣昌（RC）猪和杜×长×大（DLY）杂交猪为试验动物,采用相对定量RTPCR测定10～120kg体质量时背最长肌中I、2a、2x和2b4种MyHC的基因表达,以探讨猪背最长肌肌纤维类型的发育性变化,并分析品种及营养对它的影响特点。结果表明：（1）10～20始,2个品种的背最长肌肌纤维类型的百分组成发生显著改变,MyHCI和2x型纤维比例显著降低,而2b型纤维比例显著提高;（2）20～120kg,背最长肌肌纤维的变化规律因品种和纤维类型而异,除MyHC2b外,2个品种的MyHCI、2a和2x型肌纤维的发育规律存在一定差异;（3）背最长肌肌纤维类型的百分组成在10～50kg阶段未见品种间显著差异,但在80kg,RC猪的MyHC2b型纤维比例显著低于DLY猪,而2a型纤维比例则正好相反;（4）饲粮营养水平对2个品种猪背最长肌肌纤维类型的百分组成均无显著影响。以上结果提示,2个品种的背最长肌肌纤维类型的发育性规律及组成存在差异,且纤维组成差异主要表现在80kg,RC猪的MyHC2b型纤维比例显著低于DLY猪,可能与其优良肉质相关。     

黄芪多糖分级组分对鸡血清中IL-2含量的影响

本试验旨在探讨黄芪多糖分级组分对鸡血清中IL-2含量的影响。将黄芪多糖经过不同浓度的乙醇进行分级沉淀,得到3个分级组分:A1、A2、A3;将320只鸡随机分为8组,分别皮下注射A1、A2、A3、A1+A2,A1+A3、A2+A3、A1+A2+A3和蒸馏水,每隔7 d采血检测血清中IL-2的含量。结果表明,A2、A3、A2+A3、A1+A2+A3能显著提高血清中IL-2含量。黄芪多糖免疫功能的有效组分为A2、A3,尤以A2作用显著。     

Runx2研究进展

Runx2是转录因子Runxx家族成员之一,作为骨细胞的特异转录因子,对骨组织的形成和重建起着重要作用。Runxx调控间充质干细胞向成骨细胞分化,促进软骨细胞的成熟和软骨的血管化,与破骨细胞分化及细胞外基质的形成密切相关,与骨髓内皮细胞的迁移和浸润、血管增生和肿瘤细胞的浸润、牙齿和皮肤毛囊发育也密切相关。通过对Runx2基因调控机制的研究,已为骨折的愈合及骨代谢性疾病的预防和治疗提供了新的思路。     

猪群HEV血清抗体调查及一株新的猪HEV ORF2部分基因序列分析

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)主要引起人的戊型肝炎,新近研究发现猪在病毒传播中可能发挥重要作用.本研究对我国部分省区HEV感染血清学调查,在被检的1 138份血清中,有666份(57.5%)为HEV抗体阳性,猪群抗体阳性率随着月龄增长而升高.通过RT-PCR方法从一份猪粪中扩增并克隆了HEVORF2 N端主要抗原决定区339bp基因片段,序列分析显示,该段基因与我国人群HEV基因4型毒株核苷酸序列同源性为85.9%,但氨基酸序列完全一致.这一结果提示我国猪群存在广泛的HEV感染,并在一定程度上与人群HEV毒株密切相关.     

猪瘟病毒E2基因活载体疫苗研究进展

猪瘟病毒(CSFV)E2囊膜蛋白是猪瘟病毒的主要保护性抗原蛋白,也是研究猪瘟基因工程疫苗的首选抗原。常用的猪瘟病毒E2基因活载体主要有腺病毒载体、逆转录病毒载体、痘病毒载体、伪狂犬病病毒载体、杆状病毒载体等,且每种病毒载体各有其优势特点。国际上应用病毒载体已成功研制出猪瘟新型疫苗并应用于临床。论文主要介绍了目前常用的病毒载体,并分别列举了使用这些表达载体进行猪瘟基因工程疫苗研究的进展情况。     

不同剂量纳米氧化铜对肉鸡免疫功能的影响

将180只1日龄健康AA肉仔鸡随机分为6组,每组设3个重复,第1、2、4、6组分别以硫酸铜、氧化铜、纳米氧化铜、纳米铜的形式在基础日粮中添加铜8mg/kg,3组和5组以纳米氧化铜形式在基础日粮中分别添加铜4mg/kg和16mg/kg,研究不同剂量纳米氧化铜对肉鸡免疫功能的影响.结果表明,与硫酸铜、氧化铜组相比,在饲料中以纳米氧化铜形式添加铜8mg/kg和16mg/kg,显著提高肉鸡免疫器官指数、新城疫抗体效价、淋巴细胞转化率和白细胞介素-2(IL-2)活性,以纳米氧化铜形式添加铜4mg/kg未引起机体免疫低下.由此可见,与硫酸铜相比,日粮中添加纳米氧化铜可提高肉鸡免疫功能.     

紫外法检测预混料中VB2含量

采用紫外分光光度计检测维生素预混料及复合预混料中VB2的含量。该方法线性关系良好（r=0．9999），回收率为98．86％，操作简便，结果准确可靠。     

PRRSV NSP2基因在重组杆状病毒中的表达与鉴定

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP2)之间的差异和生物学特性,本研究根据PRRSV、S1、SY0608株NSP2基因序列保守区设计引物,通过RT-PCR扩增出两毒株的NSP2基因,克隆到pFastBacTM HTB杆状病毒载体中,将筛选的阳性重组载体pF-SI-NSP2和pF-SY-NSP2,分别转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-S1-NSP2和rBac-SY-NSP2.在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-S1-NSP2和rAe-SY-NSP2,Westernblot和间接免疫荧光实验结果表明,本研究成功构建了表达PRRSV S1和SY0608株NSP2蛋白的重组杆状病毒,表达的蛋白与自然感染PRRSV的猪血清均具有良好的反应原性,为进一步研究NSP2蛋白的功能及生物学和免疫学特性奠定了基础.     

实验性肉种鸡葡萄球菌关节炎的发病机制——旋氧氟沙星治疗后鸡血清细胞因子水平的动态变化

5周龄健康艾维茵肉鸡120羽随机均分为空白对照组、药物对照组、感染组和药物治疗组.人工复制鸡葡萄球菌性关节炎的病理模型,并用左旋氧氟沙星治疗,测定血清中IL-1β、IL-2、TNF-α的动态变化.结果表明整个试验过程中,感染组及感染治疗组血清中IL-1β、IL-2、TNF-α的水平与空白对照组相比,均有不同程度的升高;感染治疗组与感染组比较,血清中IL-1β的含量给药后1、7、14、21、28 d差异显著(P＜0.05);血清中IL-2的含量7、14、21、28、35 d差异显著(P＜0.05);血清中TNF-α的含量5、7、14、28 d差异显著(P＜0.05).由此认为上述3种细胞因子参与了鸡葡萄球菌关节炎的发生、发展,且IL-1β、TNF-α以损伤为主.     

铜离子对引起仔猪腹泻的大肠杆菌K88杀菌机理的研究

采用K 电极对大肠杆菌K88细胞内的K 释放进行测定;采用氧电极法对其呼吸耗氧量进行测定;采用透射电子显微镜观察细胞壁结构的完整性,从而探讨硫酸铜(CuSO4)的杀菌机理.研究表明:Cu2 在微摩尔水平时就能有效抑制微生物的呼吸代谢途径.比较了典型抑制剂对硫酸铜的叠加率,得出硫酸铜主要抑制呼吸代谢的HMP途径.而且Cu2 还可诱导K 从细胞内释放出来,使细菌死亡.但它是一个可逆的过程,营养基质和EDTA可阻止细胞内K 的释放.在透射电镜下观察细菌细胞壁的完整性被破坏.因此,硫酸铜在肠道中可有效杀死引起腹泻的病原菌大肠杆菌K88.     

凉山州腹泻仔猪猪圆环病毒2型感染情况调查

为了解凉山州腹泻仔猪猪圆环病毒2型(PCV2)的感染情况,采用PCR方法对采自四川省凉山州西昌市和喜德县7个猪场85份腹泻仔猪粪便、病变组织等样品进行PCV2检测,并将扩增到的PCV2 ORF2基因片段进行测序和序列分析。结果显示,PCV2阳性样品有22份,阳性率为25.9%,阳性猪场占71.4%(5/7)。22个ORF2基因片段长度均为459 bp,核苷酸同源性为92.8%～100%,氨基酸同源性为93.5%～100%。构建的系统进化树显示22个测序序列分别处于2个分支:PCV2b和PCV2d,但未形成明显的地理分支。结果表明凉山州猪群中PCV2感染较为普遍,且以PCV2d亚型为主,并存在一定程度的遗传变异。     

紫锥菊对传染性法氏囊疫苗免疫效果的影响

为了探讨紫锥菊作为免疫增强剂的免疫效果和机理,本试验用1日龄的罗斯308肉鸡作为试验材料并用传染性法氏囊疫苗进行免疫。紫锥菊提取物分3种剂量组(A组0.1 mL/只、B组0.5 mL/只、C组1 mL/只)在6日龄开始连续给雏鸡口服7 d,在13,20,27,34,41日龄采血检测外周血中法氏囊病毒抗体,同时测定外周血中IL-2和TNF-α的含量,计算肉鸡的生产性能。结果表明,紫锥菊提取物能明显提高鸡外周血中法氏囊病毒抗体滴度,以及细胞因子IL-2和TNF-α含量,并能改善肉鸡的生产性能。所用3个剂量组中,以B组的0.5 mL/只为最佳的用药剂量。说明紫锥菊提取物具有明显的免疫促进作用。     

不同CO2气腹压对山羊肝、肾功能的影响

选择21只健康山羊随机均分为A、B、C 3组。分别用1.33、2.0、2.4kPa的气腹压值进行充气腹试验,以探讨不同CO2气腹压对山羊肝、肾功能的影响。结果表明:CO2气腹压可引起ALT、AST、ALP、Tbil、Crea升高和U-rea降低;在放气后1或2、3 d时,B、C 2组与A组相比较对肝、肾功能的影响差异显著;在放气后4d,A组肝、肾功能基本能恢复到气腹前水平,B、C 2组放气后4d尚未恢复到气腹前水平。当气腹压≥1.06 kPa时,均能够保证山羊的腹腔充分膨胀隆起。本试验确定了在山羊腹腔镜手术充气腹时,应选用1.06kPa≤PP≤1.33kPa气腹压值为宜,从而为今后开展山羊腹腔镜手术奠定了理论基础。     

Akirin2基因在肉鸭胸肌和腿肌中的发育表达研究

Akirin基因家族中Akirin2基因与哺乳动物肌纤维类型密切相关。鸟类中仅有Akirin2基因,为研究Akirin2与鸭肌纤维类型的关系,本文比较了鸭10、14、18、22、27日胚龄及出生后1周龄(P7d)胸肌和腿肌的发育差异,并采用QRT-PCR法检测了Akirin2在以上各阶段胸肌、腿肌中的发育性表达。结果表明,Akirin2基因的表达与胸肌肌纤维的发育关系密切,其表达的增高伴随肌纤维直径的增粗;相反,在腿肌中Akirin2的表达降低伴随肌纤维直径的增粗。因此,Akirin2基因与鸟类红肌纤维发育关系密切,其有可能是鸭胸肌发育以及肌纤维类型组成的关键基因之一,值得在今后的基础研究和育种研究中引起重视。     

胎衣不下奶牛胎儿胎盘中IL-2含量的测定

通过对胎盘组织中IL-2的含量检测,探讨奶牛发生胎衣不下的免疫学机制。将20头奶牛分为健康对照组和胎衣不下组,采集健康奶牛和胎衣不下奶牛的胎儿胎盘,制备胎盘组织匀浆液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中的IL-2的含量。结果表明,胎衣不下组奶牛胎盘组织中IL-2的含量极显著高于健康组(P0.01),说明胎盘组织中IL-2含量与奶牛发生胎衣不下有密切关系。     

安徽三黄鸡β-防御素2（gal-2）在毕赤酵母细胞内的表达

目的:构建安徽三黄鸡β-防御素2(gal-2)基因的真核表达栽体,表达gal-2蛋白.方法:提取鸡肺组织中总RNA,应用RT-PCR技术获得鸡β-防御素2(gal-2)全长eDNA基因片段,经PCR获得gal-2的成熟肽基因片段,并将其克隆入真核表达载体pPIC3.5K中,构建重组表达质粒pPIC3.5K-gal-2;经测序鉴定正确后,电转化巴斯德毕赤酵母菌GS115.经甲醇诱导表达gal-2蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析.结果:通过电转化方法成功将经酶切线性化的重组表达质粒整合入宿主菌基因组中,并在甲醇诱导的条件下成功表达出了目的蛋白.结论:成功构建了重组真核表达质粒pPIC3.5K-gal-2;并借助巴斯德毕赤酵母细胞表达出了gal-2的蛋白,其分子量大约为4.1 kDa.该研究为下一步应用基因工程和蛋白质工程技术进行gal-2蛋白的规模化生产奠定了基础.