布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株建立及免疫原性测定

在建立了布氏杆菌单克隆抗体细胞株的基础上,筛选具有强保护作用的单抗细胞株A7免疫BALB/C鼠,并进行细胞融合.用竞争抑制ELISA法筛选出5个强阳性孔,经克隆化培养后首次建立了9个布氏杆菌单克隆抗独特型抗体细胞株.其中,F9株传25代后及液氮冻存复苏后仍能稳定地产生高效价的抗独特型抗体.其IgG类型鉴定为IgG2a,并证实具有抗原“内影象”.以鼠红细胞为载体将抗独特型抗体吸附其表面进行小鼠免疫试验,检测结果表明该抗独特型抗体具有良好的免疫原性,能诱导免疫小鼠产生相当效价抗布氏杆菌抗体(Ab3).     

布氏杆菌抗独特型抗体苗豚鼠免疫试验

用新研制的抗牛布氏杆菌独特型抗体苗(简称二抗苗)免疫豚鼠并于免疫后4个月进行强毒菌株攻击保护试验表明,3个不同免疫剂量组豚鼠平均保护率为79.1％,血清凝集试验结果表明,免疫豚鼠产生了一定滴度的凝集抗体,这证明该抗独特型抗体苗具有良好的免疫原性。     

牛布氏杆菌二抗苗应用安全性实验研究（Ⅱ）──实验性豚鼠兔抗体的研究（GpARA）

用牛布氏杆菌抗独特型兔源抗体（简称二抗）苗免疫实验动物豚鼠１～３次后，采用琼脂扩散的方法检测抗兔抗体的产生。初步实验结果表明：免疫一次未检出抗兔抗体，免疫２次后检出了抗兔抗体。     

Cry2A毒素抗独特型单链抗体库的构建

为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分。选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成c DNA第一链。设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接。SOE-PCR产物和p IT2载体经双酶切后连接,电转入感受态E.Coli. TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定。结果表明,免疫鼠血清的效价在1∶1.6×105到1∶6.4×105倍之间。免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17. 6%的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在。最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6. 04。     

不同免疫程序对MDV抗独特型抗体苗效果的影响

探讨不同免疫程序对MDV（Marek＇s DiseaseVirus,MDV）抗独特型抗体苗抗感染保护的影响.将MDV抗独特型抗体苗用胚内.皮下与单纯皮下相结合的方法免疫SPF鸡,以第二次免疫接种5 d攻毒后, 进行抗感染保护测定,比较各实验组淋巴细胞增生病变,病毒分离及大肠杆菌感染指标等的差异,确定MDV抗独特型抗体苗的免疫程序.结果表明,二种免疫效果相同,抗MD感染保护力达90%.     

纳米抗体在真菌毒素检测中的应用

真菌毒素是由真菌产生的次生代谢产物,给人类和禽畜健康造成严重危害,且其对农产品的污染 给全球经济造成重大损失。因此,控制毒素污染、毒素检测和降解的相关技术研发尤为迫切。目前农产品中真 菌毒素检测和大规模筛查的常用手段是以抗体为核心材料的免疫分析技术,相比于传统的单克隆 抗体和多克隆 抗体,新兴的纳米抗体具有体积小、易于体外表达、稳定性高等天然优势,因此其在真菌毒素检测技术研发中 广受重视。系统总结了黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马菌素、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇等常见真菌 毒素检测相关纳米抗体的研发进展,重点综述抗真菌毒素纳米抗体和抗独特型纳米抗体在酶联免疫吸附测定、 生物发光酶联免疫分析、电化学免疫传感器和荧光共振能量转移免疫测定等不同免疫分析方法中的应用。通过 比较不同检测方法中纳米抗体的半数抑制率、检测限和线性范围等性能参数,分析基于不同类型纳米抗体的检 测技术的优缺点。探讨新抗体研发难度大、检测毒素种类少等亟待解决的关键问题,指出纳米抗体和真菌毒素 结合机制分析、理性设计、定向进化、结合多肽的筛选和设计等前沿技术在纳米抗体设计研究中的重要方向, 以期 为进一步开发基于纳米抗体的真菌毒素检测技术提供思路。     

鸡马立克氏病毒抗独特型抗体苗免疫效果观察

探讨MDV(Marek’s Disease Virus)抗独特型抗体(Ab2)模拟抗原诱导抗MDV感染的能力。将MDV抗独特型抗体分别与福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂按1：1比例乳化制备成抗体苗．对1日龄，10日龄SPF鸡进行两次免疫，同时设火鸡疱疹病毒疫苗(HVT)和非免疫空白对照。30日龄后用马立克氏病毒(MDV)标准Ⅰ型强毒——京-1毒行腹腔攻击，在第30天，第60天，第120天采血，分别检测免疫系统一淋巴器官重量、循环血淋巴细胞数量、病理组织学变化、孵化率及免疫抑制性反应。MDV抗独特型抗体苗免疫攻毒后淋巴组织器官增重、器官未见淋巴细胞浸润．120d保护率为83．45％．未见大肠杆菌继发感染发生。HVT苗免疫攻毒后淋巴组织器官，淋巴细胞的数量下降、出现病理损伤，120d保护率为73．80％。MDV感染法氏囊、脾脏的重量及循环血中淋巴细胞的数量减少，大肠杆菌的敏感性增加。MDV抗独特型抗体能诱导机体产生抗MDV感染保护。     

猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测

【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。     

三肽囊素抗独特型抗体可变区基因库的建立

利用抗bursin单克隆抗体免疫SPF来航鸡，获得抗独特型抗体的产生细胞，从中提取总RNA，经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板，根据鸡抗体重、轻链基因设计引物，进行PCR扩增。在体外成功地扩增出该抗体的可变区重链和轻链基因。     

抗AIV(H9)独特型杂交瘤细胞株检测方法的建立

采用兔抗AIV IgG作为检测抗原,通过预试确定了包被抗原的工作浓度为800μg／mL,以间接ELISA 方法检测融合细胞培养上清液,筛选到产生抗AIV鸡和兔种间共有独特型抗体的杂交瘤细胞,间接ELISA试 验中P／N值达12,证明杂交瘤细胞分泌目的单克隆抗体旱现强阳性。运用该检测方法,排除了分泌抗鸡同种 型表位以及超变区其他表位抗体的杂交瘤细胞,从而为筛选分泌抗H9亚型AIV独特型单克隆抗体的杂交瘤 细胞确定了可靠的方法。     

单克隆抗体在水产无脊椎动物血淋巴细胞研究中的应用

近年来,单克隆抗体在水产无脊椎动物血淋巴细胞研究中的应用越来越广泛,迄今报道的研究种类主要是对虾和贝类,另外还包括一些其他水产无脊椎动物,如海参等。主要应用于血淋巴细胞的识别和鉴定,并对其个体的发生和分化方面也进行了初步的研究。对单克隆抗体在水产无脊椎动物血淋巴细胞的分类、分布、发生和功能研究等方面的应用进行了综述。     

药物单克隆抗体的制备及在药物分析中应用

概述了药物(含激素类药物)半抗原合成人工免疫原方法以及采用B-淋巴细胞杂交瘤技术制备药物单克隆抗体的要点，着重介绍了药物单克隆抗体作为几种免疫分析方法的核心试剂，在临床药理学研究及生物样品的药物残留分析中的应用，并对其进行了评述，以期了解药物单克隆抗体的应用现况及前景。     

关于辅助函数法与高等数学解题关系的探讨

探讨了辅助函数法在高等数学定理、不等式的证明,函数零点的讨论,隐函数的求导,以及微分法、最值中的应用,并对其进行了分析和论证.     

Predominant autoantibody production by early human B cell precursors

During B lymphocyte development, antibodies are assembled by random gene segment reassortment to produce a vast number of specificities. A potential disadvantage of this process is that some of the antibodies produced are self-reactive. We determined the prevalence of self-reactive antibody formation and its regulation in human B cells. A majority (55 to 75%) of all antibodies expressed by early immature B cells displayed self-reactivity, including polyreactive and anti-nuclear specificities. Most of these autoantibodies were removed from the population at two discrete checkpoints during B cell development. Inefficient checkpoint regulation would lead to substantial increases in circulating autoantibodies.     

抗O型口蹄疫病毒猪源单链抗体的筛选

为获得抗O型口蹄疫病毒(FMDV)高亲和力猪源单链抗体(scFv),建立抗原抗体(Ag-Ab)共表达细菌展示文库,抗原为FMDV结构蛋白VP1、抗体为高免猪抗体文库。采用细菌展示与流式细胞术结合方法,筛选出14株抗FMDV的scFv。将筛选获得scFv构建至pET28a载体中,经E. coli Rosetta表达,目的蛋白长度约为30ku,与scFv分子质量相符。Western blot结果表明,14株scFv均可与VP1特异性结合。ELISA结果表明,14株scFv均可与灭活O型FMDV特异性结合。应用共表达细菌展示技术,可避免抗原制备,简化操作流程,适用范围广泛;应用流式细胞仪筛选抗体库,可实现准确、快速、高通量筛选。抗FMDV猪源scFv研究可填补同源基因工程抗体空白,为进一步筛选中和抗体奠定基础。     

Control of early viral and bacterial distribution and disease by natural antibodies

Natural antibodies are often dismissed from immunological analysis as "background," but they may play an important role in conferring immunity against infections. In antibody-free mice infected with various viruses or with Listeria monocytogenes, viral or bacterial titers in peripheral organs, including the kidney and brain, were 10 to 100 times greater than in antibody-competent mice (and enhanced their susceptibility to some infections), and titers in secondary lymphoid organs were 10 to 100 times lower than in antibody-competent mice. Thus, natural antibodies play a crucial role by preventing pathogen dissemination to vital organs and by improving immunogenicity through enhanced antigen-trapping in secondary lymphoid organs.     

转基因技术在花卉改良中的应用

转基因技术在花卉改良中发挥着重要的作用.介绍了转基因技术在花卉业尤其是在改变花卉园艺性状方面的应用.通过分析,发现转基因技术在应用中存在一些问题,比如生物安全性.结合花卉产业的具体情况.提出了相应的建议和今后的规划,旨在为培育有特色的优良花卉品种、促进我国花卉业发展提供理论依据.     

椰子分子标记的研究和应用进展

分子标记广泛应用于科学研究的各个领域。简要介绍几种常用的DNA分子标记技术的原理及应用,主要综述分子技术在椰子种质资源研究的进展,介绍在椰子遗传多样性和遗传关系分析方面的研究状况,并对其应用前景进行展望。     

开放获取期刊资源分析及其应用研究

对开放获取的概念进行了简要描述,并通过对开放获取期刊资源的特点进行分析研究,指出开放获取资源对于提高图书馆资源覆盖率、提升文献保障率有重要作用。最后,给出了几种可行的开放获取期刊应用模式。