D101树脂固定中性蛋白酶的条件优化及酶学性质研究

【目的】提高中性蛋白酶的固定化效果,对D101树脂固定中性蛋白酶的条件进行优化并对固定化酶的酶学性质进行研究。【方法】以D101树脂吸附法固定中性蛋白酶,分别测定不同温度、时间和加酶量条件下固定化酶的固定化效果,并对固定化中性蛋白酶和游离中性蛋白酶的酶学性质进行比较研究。【结果】D101树脂固定中性蛋白酶的最佳固定条件为:加酶量150 U/g,温度40℃,固定时间120 min,此时固定化酶的酶活回收率最高(70%)。固定化中性蛋白酶和游离中性蛋白酶的最适温度分别为46和40℃,最适pH值分别为7.4和7.2,表观米氏常数Km分别为0.22和0.20 mg/mL,最大酶促反应速度Vmax分别为0.39和0.21 mL/min。【结论】以D101树脂固定中性蛋白酶后,固定化中性蛋白酶的活力、酶活回收率以及热稳定性和pH稳定性显著提高。     

猪血红蛋白抗氧化肽的酶法制备及其体外抗氧化活力观察

为建立猪血红蛋白抗氧化活性肽的酶法制备工艺,采用6种食品级商业蛋白酶Alcalase 2.4L、胰蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和AS1398中性蛋白酶在各自最适反应条件下分别酶解猪血红蛋白8 h,结果显示：采用AS1398中性蛋白酶获得的产物水解度最高,其酶解过程中第2小时获得的抗氧化活性肽（NDAPⅡ）还原力最高,较猪血红蛋白还原力高31.8%;AS1398中性蛋白酶的酶解条件为底物5%（质量分数）,底物中含酶400U/g,温度45℃,pH 7.0。NDAPⅡ的还原力随浓度的增加基本呈线性增长趋势,虽然在低浓度下其还原力较阳性对照物BHT及VC弱,但在40 mg/mL质量浓度条件下,其还原力已略高于天然抗氧化剂VC,极具作为天然抗氧化剂的潜力。     

海藻酸钠固定化中性蛋白酶的研究

探讨了中性蛋白酶在海藻酸钠中的固定化技术,并对影响固定化酶的固定化率和固定化酶活性的 因素进行了研究。结果表明,固定化酶的质量受海藻酸钠浓度、固定化酶量、固定化时间以及CaCl2浓度的影响,其 最佳工艺条件为:海藻酸钠浓度3．0％,固定化酶液量与海藻酸钠体积比1:2,固定化时间2．5 h,CaCl2浓度 3．0％,由此制得的固定化酶的固定化率可达97．5％,固定化酶活性为3 600 U／g,其热稳定性、pH值稳定性均极显 著高于游离酶。     

植物蛋白质酶解产物超滤分析及对成纤维细胞生长的影响

用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和A s1.398枯草蛋白酶分别对豆粕、棉粕、菜粕和花生粕的蛋白质进行酶解,并对其酶解产物进行超滤分析及用产物对小鼠胚胎成纤维细胞进行培养试验,探讨不同蛋白酶解产物的蛋白质组成及对细胞生长的影响。结果表明:酶解产物中蛋白质分子质量分布与酶的种类和植物蛋白质种类有关,其中A s1.398枯草蛋白酶对豆粕酶解能力最强,酶解产物中蛋白质分子质量小于3 ku的比例占31.67%;各酶解产物对小鼠胚胎成纤维细胞生长都有促进作用,以A s1.398枯草蛋白酶酶解的棉粕产物对小鼠胚胎成纤维细胞生长的促进作用最好,其细胞生长速度比豆粕、菜粕和花生粕酶解产物组显著提高。     

菠萝蛋白酶研究与应用

对菠萝蛋白酶的组成结构、理化性质、稳定性、制备、固定化及其在医药和食品工业中的应用进行了综述。基于国内现状,对菠萝蛋白酶产业开发作出进一步的展望。     

复合酶法制取牛血血红蛋白水解液的工艺研究

利用木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、Protamex和Flavourzyme(风味蛋白酶)对牛血血红蛋白进行水解制备水解动物蛋白,以水解度(DH)为指标对水解过程进行分析,选取中性蛋白酶作为适宜的单酶并研究其酶法水解最适宜的工艺条件.为进一步提高水解度,进行了中性蛋白酶与Flavourzyme复合酶解的研究,并对双酶水解的工艺条件进行了优化,使水解率达到52.88%,比单酶水解时提高了55%.     

共固定化双酶水解芝麻粕蛋白制备复合氨基酸研究

以海藻酸钠为载体、戊二醛为交联剂共固定化木瓜蛋白酶和中性蛋白酶,选择合适的固定化工艺,研究水解芝麻粕蛋白的优化条件和共固定化双酶的稳定性。结果表明：共固定化双酶的最佳条件为海藻酸钠3 g.dL^-1,戊二醛25 g.L^-1,氯化钙0.2 g.dL^-1,酶活力回收率为51.28%;水解芝麻蛋白的最佳条件为固液比1：25,pH 6.0,温度60℃,时间7 h,加酶量5 g.dL^-1,氨基氮含量最高为20.65 m g.g^-1,共固定化酶重复使用6次,酶活力仍保持50%以上。     

不同酶酶解贻贝蛋白的特性研究

采用中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解贻贝肉蛋白,研究了产物的氨基酸组成和风味的差异性.结果表明:中性蛋白酶和风味蛋白酶的酶解产物的蛋白质利用率较高；各酶解产物中,谷氨酸、苏氨酸和赖氨酸的含量均较高,其中中性蛋白酶的酶解产物中氨基酸的含量高达1774.105 mg,/100g;在各酶解产物中,中性蛋白酶的...     

响应面优化双孢菇预煮液酶解工艺研究

以游离α-氨基氮为指标,对比了中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶对双孢菇(Agaricus bisporus)预煮液的酶解效果,并采用Box-Behnken响应面法优化了中性蛋白酶的酶解工艺。结果表明,中性蛋白酶酶解效果优于风味蛋白酶和木瓜蛋白酶,其最优工艺为添加量0.41%,p H 6.5,55℃酶解2.95 h,在此条件下,游离α-氨基氮为419.6 mg/L。     

四氢嘧啶提高中性蛋白酶热稳定性的研究

[目的]提高中性蛋白酶的热稳定性。[方法]在中性蛋白酶酶液中添加四氢嘧啶,考察四氢嘧啶对中性蛋白酶热稳定性的影响。[结果]四氢嘧啶对经热处理的中性蛋白酶有明显的保护作用。添加浓度3 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过50℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高12.7%;添加浓度5 mmol/L的四氢嘧啶可以使经过60℃处理的中性蛋白酶剩余的相对酶活提高51.8%。[结论]四氢嘧啶是一种有效的中性蛋白酶热保护剂。     

中性条件下2种酶解方法提取蚕蛹蛋白的比较研究

为了寻求经济实用的酶解蚕蛹蛋白的方法,本研究以新鲜和烘干蚕蛹为原料,在中性条件下比较了中性蛋白酶和风味蛋白酶对蚕蛹的水解程度及蛋白收率。结果表明:在中性条件下2种蛋白酶作用后鲜蛹水解蛋白液的蛋白收率和水解度高于干蛹水解蛋白液。风味蛋白酶水解后的蛋白收率高于中性蛋白酶,但水解度小于中性蛋白酶,造成这样的原因可能是由于风味蛋白酶的内切酶活性较低。因此,在实际应用中可尽量采用新鲜蚕蛹为原料,并根据蛋白水解产物不同的需求采用不同的蛋白酶进行处理。     

蚕蛹蛋白双酶法水解工艺优化

研究了碱性蛋白酶和中性蛋白酶双酶法水解蚕蛹蛋白的工艺条件.在单因素试验的基础上,以水解度为考察指标,研究温度、脱脂蚕蛹粉浓度、水解时间、加酶量、酶质量比(碱性蛋白酶:中性蛋白酶)对蚕蛹蛋白水解效果的影响,通过正交试验优化水解工艺条件.结果表明,优化的工艺条件为脱脂蚕蛹粉浓度30 g/L,水解时间6h(其中碱性蛋白酶的水解时间为4.5 h,中性蛋白酶的为1.5 h),加酶量3％,温度55℃,酶质量比3:1,碱性蛋白酶处理时pH9.0、中性蛋白酶处理时pH7.5.在此工艺条件下蚕蛹蛋白水解度可达22.99％.     

鱿鱼肝脏活性肽的制备及生物活性研究

[目的]为鱿鱼肝脏的高值化利用提供基础研究数据。[方法]以鱿鱼肝脏蛋白为原料,通过蛋白酶水解来制备生物活性肽,研究了多种蛋白酶水解鱿鱼肝脏制得水解液的抗凝血活性、抑制血管紧张素Ⅰ转换酶（ACE）活性及抗氧化活性。[结果]当鱿鱼肝脏水解液浓度为5 mg/ml时,中性蛋白酶的水解液对ACE抑制率为68.0%;APTT值为59.8 s,TT值为34.2 s,比空白对照组分别延长26.7和20.6 s,表明鱿鱼肝脏的中性蛋白酶水解液具有抗凝血活性。中性蛋白酶解液对Fe3＋的还原力为0.588,羟自由基清除能力为64.5%,说明鱿鱼肝脏中性蛋白酶水解液具有较好的抗氧化活性;而其余的木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶的鱿鱼肝脏水解液的抗凝血活性和ACE抑制活性均低于中性蛋白酶水解液的酶解液活性。[结论]鱿鱼肝脏蛋白质具有较好的综合利用价值。     

螺旋藻蛋白酶解剂的筛选与优化

[目的]筛选并优化螺旋藻蛋白酶解剂.[方法]采用酶解法初步研究了中性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶4种蛋白酶对螺旋藻蛋白质的水解效果,同时研究了底物浓度和酶的添加量对水解率的影响.[结果]结果表明,蛋白酶按酶解螺旋藻蛋白质的水解率,可由高到低依次排列为:碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶.通过对酶解条件进行优化,发现碱性蛋白酶的作用效果受pH影响最大,最高水解率为60.5％(底物浓度20 g/L、E/S=4％、pH =8.9、55℃、酶解5 h).同时得出,碱性蛋白酶、复合蛋白酶、中性蛋白酶的最佳底物浓度均为20 9/L,最佳酶添加量均为4％,而风味蛋白酶的最佳底物浓度为20 g/L,最佳酶添加量为2％.[结论]研究可为后续功能性多肽的提取利用提供参考依据.     

高温中性蛋白酶基因的克隆、表达及验证研究

对地衣芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶基因进行了克隆、测序及表达研究.以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT9503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得特异性片段.经测序分析,其具有一个942 bp的蛋白酶完整阅读框.通过表达载体构建,获得质粒pPL-tnp,并转化至蛋白酶缺失受体菌枯草芽孢杆菌AB97013,经表达验证其蛋白酶最适作用温度和pH与出发菌相符.证明研究获得了高温中性蛋白酶基因及表达质粒pPL-tnp,并正确表达.     

不同固定化微生物颗粒降解养殖尾水中污染物的性能评价

选取3种载体（凹凸棒土、卡拉胶以及硅藻土）进行固定化微生物颗粒制备,并对不同颗粒性能、污染物去除性能及主要影响因素进行了研究。颗粒性能研究表明：凹凸棒土与硅藻土固定化微生物颗粒具有较好的机械强度,卡拉胶机械强度低;在有营养补充的前提下,凹凸棒土和卡拉胶可以稳定释放1.50×106 CFU/mL和2.60×105 CFU/mL的微生物,硅藻土固定化微生物颗粒缓释性能较差;利用Monod方程拟合可得,对于CODMn,硅藻土固定化微生物颗粒具有最大的比降解速率（μmax）,卡拉胶与之相当,凹凸棒土最低,同时硅藻土固定化微生物颗粒的Ks值显著低于其他两种颗粒;同时,氨氮降解动力学也呈现了相似的规律。环境条件对固定化微生物颗粒降解污染物的影响分析表明：中性（pH=7）条件下,凹凸棒土、卡拉胶、硅藻土固定化颗粒降解CODMn的一级速率常数最高;凹凸棒土与硅藻土固定化微生物颗粒在中性和碱性条件下的降解氨氮速率更高,卡拉胶在中性条件下降解氨氮速率最高。固定化微生物颗粒降解CODMn、氨氮的一级反应速率常数随温度的升高而增大,其中凹凸棒土固定化微生物颗粒对温度的变化更为敏感。除了硅藻土固定化微生物 颗粒以外,随着污染物初始浓度的增加,其余两种降解CODMn的一级反应速率常数k1值显著上升（P＜0.05）。不同曝气强度下3种固定化微生物颗粒降解CODMn一级反应速率无显著性差异（P＞0.05）,更高的曝气强度对氨氮降解有利。     

响应面法优化蛋白酶提取贻贝蛋白的工艺参数

以贻贝蛋白质为原料,对比研究了pH值、加酶量、物料比、时间、温度等对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和风味蛋白酶提取贻贝蛋白质的影响。结果表明,中性蛋白酶的蛋白质回收率最高。对中性蛋白酶进行优化试验,得出最佳的提取条件:pH值为6.3,加酶量为0.75%,酶解温度为42.9℃,184.9 min的酶解时间,可得到最大蛋白质回收率(72.2%)。通过氨基酸全自动分析仪分析,得出氨基酸含量酶解前后变化了1.453%。     

鱿鱼酶法脱皮技术的优化及比较

以秘鲁鱿鱼耳为研究对象,研究木瓜蛋白酶和中性蛋白酶在不同添加量、反应温度和反应时间的脱皮效果。结果表明,木瓜蛋白酶在酶添加量为0.22%～0.27%,反应时间为10～20 min,反应温度为50～55 ℃,中性蛋白酶在酶添加量为0.20%左右,反应时间为10～15 min,反应温度为50 ℃左右时,具有较好脱皮效果。正交试验对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的脱皮效果进行优化,并考察酶处理对鱿鱼胶原蛋白含量的影响。结果表明,木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的最优脱皮工艺分别是木瓜蛋白酶浓度为0.23%,处理时间为12 min,处理温度为52.5 ℃;中性蛋白酶浓度0.18%,处理时间10 min,处理温度47 ℃。中性蛋白酶较木瓜蛋白酶具有较强的脱皮效果。     

核桃饼粕酶解物抑菌性的研究

以核桃饼粕为对象,利用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶及其复配物酶解核桃饼粕,测定其对大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制效果。结果表明:核桃饼粕的4种单酶酶解物对三种菌均有一定的抑制作用;复配酶酶解物对3种菌的抑制作用明显均高于单酶酶解物,且复配酶酶解物对金黄色葡萄球菌(胃蛋白酶和中性蛋白酶)、枯草杆菌(中性蛋白酶和碱性蛋白酶)大肠杆菌(胃蛋白酶和中性蛋白酶)的抑菌圈直径分别为25 mm、22.3 mm、21 mm;对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的抑菌性与0.8%的乳酸链球菌素的抑菌效果相当,比0.8%的山梨酸钾效果好,对大肠杆菌的抑菌性均优于山梨酸钾和乳酸链球菌素。     

山羊乳酪蛋白酶解工艺研究

【目的】确定山羊乳酪蛋白的酶解工艺,为制备山羊乳酪蛋白活性肽奠定基础。【方法】选用中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶,采用对比和正交试验方法,研究山羊乳酪蛋白单酶和复合酶的酶解工艺,测定山羊乳酪蛋白的总肽键物质的量,优选山羊乳酪蛋白的酶解工艺参数。【结果】山羊乳酪蛋白的总肽键物质的量为8.5379mmol/g。单酶中,胰蛋白酶和中性蛋白酶对山羊乳酪蛋白的水解度均较大,木瓜蛋白酶次之,碱性蛋白酶最小;胰蛋白酶对山羊乳酪蛋白的水解度最高,为14.67%,其适宜的酶解工艺为:加酶量2500U/g,pH7.5,50℃下酶解2h。复合蛋白酶中,中性蛋白酶和胰蛋白酶复合及中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶3酶复合时的水解度均较大,2种复合酶的水解度、平均肽链长度和平均相对分子量分别为17.34%,21.16%;5.77,4.73和692,567。【结论】在最佳酶解工艺条件下,单酶中,胰蛋白酶和中性蛋白酶对山羊乳酪蛋白水解度均较大,复合酶中,中性蛋白酶、胰蛋白酶复合及中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶3酶复合时的水解度均较大。