单克隆抗体在狂犬病防控中的应用

狂犬病是一种人兽共患病,多发于经济欠发达地区,致死率极高。体液免疫是动物抵御外界病毒感染的有效手段,所以抗体成为控制狂犬病的一个重要武器。目前,抗狂犬病毒(RV)抗体已经由传统的多克隆抗体发展到各种单克隆抗体(mAb)、小分子抗体等,不同mAb联合使用的鸡尾酒疗法在狂犬病的防治中已经可以替代传统方法。mAb在狂犬病的检测、变异研究以及治疗方面都得到了充分的应用,但是仍然存在许多尚未解决的问题。文章就mAb在狂犬病防控中的应用进行综述。     

赤羽病病毒Gcaa465～704的杆状病毒表达和单克隆抗体制备

为制备针对赤羽病病毒(AKAV)糖蛋白Gc的单克隆抗体(mAb),本试验选取AKAV Gc蛋白第465～704位氨基酸的基因序列进行密码子优化并合成至pFastBac HTB载体;通过蓝白斑筛选和昆虫细胞杆状病毒表达系统制备重组AKAV Gc_aa465～704蛋白,纯化后免疫小鼠;通过细胞融合和亚克隆筛选阳性杂交瘤细胞,利用Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对mAb特性进行鉴定。结果显示,本试验成功筛选出1株可稳定分泌抗AKAV Gc_aa465～704蛋白mAb的杂交瘤细胞株4D1,Western blot结果显示,mAb 4D1可特异性识别AKAV Gc_aa465～704蛋白;IFA结果显示,mAb 4D1能够与AKAV感染的BHK21细胞发生反应。结果表明,本试验成功制备抗AKAV Gc_aa465～704蛋白mAb,为进一步研究AKAV Gc蛋白生物学功能和建立AKAV检测方法提供技术支持。     

猪流行性腹泻病毒单克隆抗体8A3的CHO细胞瞬时表达与稳转细胞池构建

为实现猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)的体外高效表达，首先利用基因工程技术获得了PEDV鼠源mAb 8A3的轻链和重链序列，然后构建真核表达载体pCHO1.0-8A3-H-L,再利用CHO细胞对mAb 8A3进行瞬时表达，最后经稳定转染以获得稳定表达8A3的CHO细胞池。结果显示，CHO细胞表达的mAb 8A3在免疫印迹和间接免疫荧光分析中均可特异性识别PEDV,且具有正确的IgG抗体构型；且CHO细胞表达的mAb 8A3可以中和G2a、G2b和G1基因型PEDV。实现了PEDV mAb 8A3的CHO瞬时转染表达，并获得了稳定表达8A3的CHO细胞池，为PEDV mAb稳定表达细胞系的筛选奠定了基础，同时为PEDV的诊断和治疗提供了新型基因工程抗体材料。     

重组牛γ-干扰素单克隆抗体的研制

为制备针对重组牛γ-干扰素(rBoIFN-γ)的单克隆抗体(mAb),以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BOIFN-γ为免疫原,用纯化的rGST-BoIFN-γ为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIFN-γ的mAb.结果获得13株稳定分泌抗BoIFN-γ mAb的细胞株,命名为1C12、1F7、1G5、3E6、4D5、5E11、5G4、6F8、6G6、7E9、8D3、8F8和9G11.腹水的效价除单抗9G11外,其余效价都在1:80000以上;除5G4 mAb亚类为IgG2b外,其余均为IgG1.Dot-ELISA结果表明,所得单抗只与融合蛋白rHis-BoIFN-γ和rGST-BoIFN-γ反应,而不与其它重组细胞因子和对照细菌反应,显示其良好的特异性.Western blot显示所获单抗能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性务带.同时所获单抗均能与牛IFN-γ标准品反应.13株单抗均为针对rBoIFN-γ的特异性mAb,为进一步研究rBoIFN-γmAb在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定基础.     

REV囊膜糖蛋白的表达、纯化及单克隆抗体的制备和初步鉴定

以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。     

小鼠抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备

采用杂交瘤技术,用纯化的鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV) VP3蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体(mAb),经间接ELISA方法筛选和有限稀释法进行3次亚克隆后获得一株抗鹅细小病毒VP3蛋白杂交瘤细胞株(4E5).经鉴定,该mAb为IgGl亚型,轻链为κ链.Western blot试验结果表...     

鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定

拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂.以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达.以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳...     

中华人民共和国动物防疫法

(上接2008年第12期) 第六章动物诊疗 第五十条从事动物诊疗活动的机构,应当具备下列条件: (一)有与动物诊疗活动相适应并符合动物防疫条件的场所: (二)有与动物诊疗活动相适应的执业兽医; (三)有与动物诊疗活动相适应的兽医器械和设备; (四)有完善的管理制度.     

浅析温州市新型基层动物防疫(诊疗)服务组织

<正>动物疫病防控工作的重点在基层,难点在散户,但是,基层和散户动物防疫(诊疗)工作难落实,已成为动物疫病防控工作的"短板",面对国内外动物疫情频发的严峻形势,必须提升基层动物防疫(诊疗)工作的能力和水平。为此,我市积极探索培育和扶持新型基层动物防疫(诊疗)服务组织,积极推进动物疫病防控工作向最基层延伸,有效增强了动物疫病防控能力,维护了社会公共卫生安全。1基本情况新型基层动物防疫(诊疗)服务组织(以下简称     

畜禽养殖场经营应遵循的法律法规

<正>1.动物卫生监督机构对动物饲养场实行动物卫生监管工作的法律依据。《中华人民共和国动物防疫法》(以下简称《动物防疫法》)第五十八条;《动物防疫法》第五十九条。2.养殖场应履行的法定义务。(1)符合动物防疫条件,申办《动物防疫条件合格证》。依据《动物防疫条件审查办法》第二条。(2)建立健全防疫制度。依据《动物防疫法》第十九条;《动物防疫条件审查办法》第八、第九条。(3)建立健全养殖档案。依据《中华人民共和国畜牧法》(以下简称《畜牧法》)第四十一条;《畜禽标识和养殖档案管理办法》     

齐齐哈尔市畜牧兽医局举办动物疫病防治知识培训班

<正>为进一步加强动物防疫人员和重点养殖场(户)中的动物诊疗人员业务水平,提升动物防疫人员动物诊疗人员业务素质和职业道德水平,齐齐哈尔市畜牧兽医局于2010年8月6日在齐齐哈尔大学培训中心,举办了一期全市郊区动物防疫人员和重点养殖场(户)动物疫病防治知识培训班。     

产气荚膜梭菌α毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)为基础,建立了双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法。纯化原核表达的α毒素蛋白为免疫原,制备腹水型mAb并分离纯化作为检测抗体,免疫新西兰大白兔制备抗α毒素多克隆抗体纯化后作为捕获抗体,通过试验优化反应条件,建立标准曲线;并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。DAS-ELISA方法对α毒素的有效检测范围为5.86³75μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,A375μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,A^E型产气荚膜梭菌标准菌株的培养上清中,α毒素含量差异较大,A型菌(NCTC528)中α毒素含量显著高于其他菌型。本研究成功制备了高特异性的mAb,并建立了特异、灵敏、稳定的DAS-ELISA方法,为高效检测α毒素提供了有效工具。     

温州市新型基层动物防疫(诊疗)服务组织的服务内容及建设成效

<正>生产实践表明,动物疫病防控工作的重点在基层,难点在散户。但是,基层和散户动物防疫(诊疗)工作较难落实,已成为动物疫病防控工作的"短板"。面对国内外动物疫情频发的严峻形势,必须提升基层动物防疫(诊疗)工作的能力和水平。为此,温州市积极探索培育和扶持新型基层动物防疫(诊疗)服务组织,积极推进动物疫病防控工作向基层延伸,有效增强了动物疫病防控能力,维护了社会公共卫生安全。1基本情况     

H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体的制备及鉴定

以灭活马流感病毒(EIV)A/Equine/Jilin/1/1989(H3N8)为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经常规细胞融合后,用血凝抑制试验(H1)和间接ELISA方法筛选获得3株(3C2、5G10和5A10)能稳定分泌H3N8亚型马流感病毒单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株.其中3C2和5G10为IgG2α,5A...     

重庆江津区:组织动物检疫工作记录规范应用远程培训会

<正>为贯彻落实中国动物疫病预防控制中心《关于全面落实动物检疫工作的通知》(疫控(督)〔2014〕31号)和《关于进一步规范动物产地检疫工作的通知》(疫控(督)〔2014〕50号)文件精神,5月20日,江津区动物卫生监督所组织相关人员参加了"重庆市动物检疫工作记录规范应用远程培训会"。区动物卫生监督所所长、副所长及各办工作人员和全区29个畜牧兽医站(检查站)站长参加会议。会议由区畜牧兽医局副局长古和平主持。     

动物的饲养方法

<正> 1.发明的名称:动物的饲养方法 2.专利内容: (1)一种由活性化物质使水活化的工艺及用活化水供动物饮用的优良动物饲养法。 (2)第(1)项中将上述水与饲料混合,供动物采食的动物饲养法。 (3)第(1)项中,以含稀有元素矿石为特征的上述活性化物质的动物饲养法。     

兽药残留和动物源细菌耐药性现状及应对措施

<正>一、食品动物与抗菌药物食品动物养殖业的发展,抗菌药物在动物福利(维护动物健康)、食品安全(提高动物产品产量和质量)和公共卫生(防控人兽共患病和食源性疾病)上发挥了至关重要的作用。中国是食品动物生产和产品消费大国,保障养殖业持续稳定发展有着重要的战略意义。中国猪肉、禽肉、禽蛋、水产品产量连续多年世界第一;牛奶产量世界第三。2016年全国肉、蛋、奶产量分别达到8 537.8、3 094.9和3 712.1万吨;畜牧业产值     

第十六届动物卫生国际会议通知

受国际动物卫生学会(ISAH)委托,南京农业大学和中国畜牧兽医学会联合承办的第十六届动物卫生国际会议,将于2013年5月5日～9日在南京举办,通知如下。1会议主题动物卫生、健康和福利是动物产品可持续生产的基石2会议主要内容(1)动物福利、健康及行为;(2)动物福利指标、概念;(3)动物产品生产、清洁、消毒过     

动物福利将写入我国兽医教材

<正>近日,世界动物保护协会(WSPA)和中国兽医协会(CVMA)动物卫生服务与福利分会在于苏州举行的第三届中国兽医大会(CVC)上签署了合作协议。根据该协议,双方将合力在现状调研基础上编写动物福利教材,致力于将动物福利纳入中国高等教育兽医专业的人才培养和资质考核当中,引入国际成功经验,构建完善的动物福利教育体系。     

益生型木聚糖酶设计的理论基础及其意义

<正>肠道是动物机体与外界接触最为广泛的器官,作为动物与外部环境的屏障和营养物质的主要进入门户,它具有维持动物健康必不可少的多种功能(许爱清等,2010)。肠道功能受到肠道菌群、饲料因子和内源因子(如细胞因子)等多种因素调控(Soichi Arai等,2002)。健康肠道是动物全面健康的基础和保障,以确