Bacillus subtilis fmbR抗菌物质的分离和鉴定

 【目的】对Bacillus subtilis fmbR产生的抗菌物质进行分离和鉴定研究，以确定抗菌物质的组成和结构。【方法】采用HPLC和TLC层析对Bacillus subtilis fmbR抗菌物质进行分离纯化，通过ESI-MS和MALDI-MS分析对抗菌物质的组成和结构进行初步鉴定。【结果】HPLC层析表明了Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有保留时间与surfactin相似的成分。TLC层析和原位酸解证明了Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有闭合肽键类的物质，其中之一为相对迁移率Rf与标样surfactin相近的组分。采用ESI-MS分析检测到Bacillus subtilis fmbR抗菌物质含有分子量与surfactinA相同的m/z1009.1、m/z1023.2 和m/z1037.0等3种同系物；通过MALDI-MS分析获得[M+H]+为m/z 3403.95抗菌物质，该物质分子量与Bacillus subtilis 168产生的细菌素subtilosin的m/z3403.3 相同。【结论】Bacillus subtilis fmbR抗菌物质由C13～C15的3种surfactinA同系物和一种羊毛硫抗生素subtilosin组成。     

菌株Streptomyces S_(90)抗菌物质的初步鉴定及抑菌作用机制研究

采用Doskochilova溶剂系统层析、pH纸层析和纸电泳测定表明:菌株StreptomycesS90发酵液中具有抑菌活性的物质为一种单组分碱性水溶性抗生素。采用大孔树脂吸附法提取得到了该抗菌物质的粗提物,研究其对烟草赤星病菌的作用机制表明,当抗菌物质浓度为1.6mg/mL时,对菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别达到82.06%和78.80%;随着各处理浓度的增加,抗菌物质使病菌菌丝细胞膜电导率和丙二醛含量变化均增加;抗菌物质对病菌菌丝细胞壁组成物质几丁质没有影响。     

鸡脾脏和肝脏粗提物的抗菌活性

为获得具有抗菌作用的物质,本研究对鸡脾脏和肝脏的粗提物进行了制备,并通过抑菌试验检测了粗提物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌活性。结果表明,鸡脾脏和肝脏的粗提物中存在着抗菌活性物质,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌活性。     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取、大孔吸附树脂吸附、硅胶层析和制备型高效液相色谱（HPLC）等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH 2.0～10.0、100℃和紫外照射24 h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供理论依据。     

土壤链霉菌CaiF1抗菌物质的分离纯化及活性研究(英文)

[目的]从土壤链霉菌CaiF1发酵液中分离纯化抗菌物质,并研究该物质的活性。[方法]采用乙酸乙酯萃取,大孔吸附树脂吸附,硅胶层析和制备型高效液相色谱(HPLC)等分离技术纯化抗菌物质,以金黄色葡萄球菌、白粉病菌为指示菌进行活性研究。[结果]土壤链霉菌CaiF1发酵液中抗菌物质得到分离纯化;该物质在pH2.0-pH10.0、100℃和紫外照射24h条件下抑菌活性几乎不变,对白粉病的防治效果达69.7%。[结论]分离纯化的土壤链霉菌CaiF1抗菌物质具有很好的稳定性,为其结构鉴定和开发应用提供了理论依据。     

枯草杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质的研究

[目的]探究枯草杆菌诱导家蝇幼虫产生抗菌物质。[方法]研究枯草杆菌诱导的家蝇幼虫提取物的抗菌活性及其对温度、酸碱、离子强度的稳定性。[结果]枯草杆菌诱导的家蝇幼虫提取物对6种病原菌和工程菌大肠杆菌JM109均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑制作用更强,诱导组的抗菌活性优于未诱导组。枯草杆菌诱导家蝇产生抗菌物质的具有很好的温度稳定性,在pH值4~10范围内都有较高的活性,但随着离子强度的升高抗菌活性下降。[结论]该研究为抗菌物质应用于饲料提供理论依据。     

稻蝗抗菌肽的诱导和粗提物活性研究

近年来,昆虫抗菌肽的研究逐渐成为昆虫免疫学及分子生物学研究的热点之一,它可为抗菌和抗肿瘤新药的开发提供新的来源。本文对稻蝗(Oxyachinensis)幼虫进行了紫外照射、超声波、针刺、菌液注射的处理,发现E.coli注射诱导产生的抗菌物质活性明显;通过对不同指示菌做抑菌测定,结果显示稻蝗抗菌肽仅抗革兰氏阳性菌;经高温处理、酸性处理,表明此抗菌物质为一种热稳定的碱性抗菌多肽。     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

泡菜中产细菌素的乳酸菌分离研究

实验从泡菜中分离出一株有抑制革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌作用的菌株,经鉴定为乳酸菌中的肠膜明串珠菌,该抗菌物质对蛋白水解酶敏感,耐热并在较宽的pH值范围内保持活性.在排除是有机酸和过氧化氢后,初步认为该菌产生的抗菌物质为抗菌肽,即细菌素.     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

一株链霉菌脂肽类抗生素SMN的分离、纯化及生物学活性的研究

[目的]初步研究1株链霉菌中的活性物质SMN的分离纯化及其生物学活性。[方法]对链霉菌中的活性物质SMN进行分离和纯化,并研究SMN的抑菌谱和抗肿瘤活性以及Ca2+对其抑菌活性的影响。[结果]采用大孔吸附树脂来吸附链霉菌发酵物中的活性物质,吸附量大,解吸附容易,操作简单方便。通过HPLC比较不同大孔吸附树脂吸附活性物质的峰面积,国产的大孔吸附树脂AB-8和D312均高于进口树脂Diaion HP20。SMN仅对革兰氏阳性菌尤其耐药菌株有抑制活性,且抗菌活性具有Ca2+依赖性,对6种肿瘤细胞也有不同程度的抑制效果。SMN的抗癌活性与药物剂量和作用时间呈正相关性。[结论]活性物质SMN在抗菌和抗肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。     

竹荪多糖的抑菌活性研究

[目的]为竹荪的开发利用提供理论依据。[方法]采用DEAE-纤维素柱层析法分离纯化竹荪多糖,用抑菌圈法测定竹荪多糖的抑菌效果,研究竹荪多糖的体外抑菌活性。[结果]将含有竹荪多糖的纸片置于涂布黑曲霉、草酸青霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的平板上,均出现抑菌圈,且真菌的抑菌圈直径大于细菌的抑菌圈直径;竹荪多糖对5种菌的最小抑菌浓度分别为2.50、2.50、5.00、5.00、2.50 mg/ml。[结论]竹荪多糖对黑曲霉、草酸青霉、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有一定的抑制作用,且对真菌的抑制作用强于细菌。     

番茄灰霉病内生拮抗菌的筛选及抑菌物质研究

[目的]筛选番茄灰霉病内生拮抗菌并研究其抑菌物质。[方法]从65株健康番茄植株中分离到内生拮抗细菌46株,在此基础上通过PDA培养基打孔扩散法进行复筛,获得了1株强烈抑制灰葡萄孢菌的抑菌物质产生菌。研究了该抑菌物质对灰葡萄孢菌菌丝和孢子的抑制作用,并经酸沉淀、Sephadex G-50凝胶层析纯化、琼脂糖凝胶电泳分析对其进行了初步鉴定。[结果]显微镜观察发现该抑菌物质具有列膜抑菌机制,初步鉴定抗菌物质为3.3 kDa左右的多肽类物质。[结论]为开发新的生防制剂奠定了基础。     

贻贝抗菌肽的分离纯化

[目的]从贻贝中提取具有抗菌作用的多肽。[方法]以紫贻贝为原料,采用0.5%的乙酸直接提取方式提取抗菌肽,再经过Sephacryl S-100聚丙烯酰胺凝胶色谱进行纯化,收集各馏分并用滤纸片扩散法测定其抗菌活性及对各种细菌的最低抑菌浓度,使用SDS-PAGE测定抗菌肽的分子质量,测定其在100℃条件下不同处理时间和不同pH条件下抗菌活性的变化。[结果]使用0.5%的乙酸作为提取液粗提取抗菌肽具有较高的提取效率,使用Sephacryl S-100纯化抗菌肽,可将抗菌肽纯化为单一物质。分离纯化出的贻贝抗菌肽具有较强的抗菌性,分子质量为5 908,且具有耐高温、耐酸碱的性质。[结论]该研究为抗菌肽的大规模生产奠定了基础。     

海蒿子脂溶性物质的抗食物腐败菌活性研究

[目的]研究海蒿子脂溶性物质的抗食物腐败菌活性。[方法]采用圆形纸片法,对海蒿子脂溶性物质及经柱层析分离得到的不同洗脱组分进行抗食物腐败菌试验。[结果]海蒿子粗脂对大肠杆菌和假单胞杆菌的抑菌圈分别为1.0和1.5 mm;枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌对海蒿子粗脂不敏感。苯洗脱组分对金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌抑菌圈均为1.0 mm;苯洗脱组分对大肠杆菌和假单胞杆菌无抑菌活性;石油醚洗脱组分对4种腐败菌亦无抑菌活性;乙醇洗脱组分对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和假单胞杆菌的抑菌圈分别为3.0、4.5、4.0和2.5 mm,空白对照组均无抑菌活性。[结论]海蒿子乙醇洗脱组分具有较强的抗菌活性;多数海藻脂溶性物质的抗菌活性主要体现在其强极性脂成分上。     

Purification of Two Antimicrobial Substances Produced by Bacillus subtilis Strain B11 and Their Properties

Two antimicrobial substances produced by Bacillus subtilis strain B 11 were purified by boiling, DEAE 52 anion exchange chromatography and aluminum oxide adsorption chromatography, These purified substances showed only one spot on silica gel thin layer chromatography （TLC）. Antimicrobial assays showed that antimicrobial substances A and B inhibited the growth of plant pathogens such as Fusarium oxysporum Schl f.sp. niveum, Rhizoctonia solani, Ralstonia solanacearum and Xanthomonas oryzae pv. oryzae. In addition, antimicrobial substance B could also inhibit the growth of Magnaporthe grisea. These two antimicrobial substances were resistant to proteolytic enzymes and temperature as high as 121℃.     

仙人掌醇溶物的超声波辅助提取及其对食品腐败菌的抑制作用研究

为开发仙人掌在食品工业上的应用,尤其是仙人掌醇溶物在食品防腐和抑菌上的应用,采用超声波辅助乙醇提取仙人掌醇溶物,通过正交试验对主要工艺参数进行优化,确定最佳提取工艺,并通过体外抑菌试验分析其抑菌活性。结果表明:超声波辅助乙醇提取仙人掌醇溶物的最佳工艺为粉碎度60～80目,乙醇体积分数75%,料液比1∶20,超声波提取时间30min,在此工艺条件下,仙人掌醇溶物得率为15.63%;体外抑菌试验表明,仙人掌醇溶物对细菌(大肠杆菌)、霉菌(黄曲霉)和酵母菌(鲁氏酵母)等常见食品腐败菌都有良好的抑制作用。     

丁香杀螨活性成分的追踪分离纯化与结构鉴定

采用部位提取、硅胶柱层析分离和薄层层析纯化,经体外杀灭家兔痒螨的活性检测,对丁香(Eu鄄geniacaryophyllataThunb)花蕾中的高效杀螨活性成分进行了追踪分离纯化,并进一步经理化性质、紫外光谱和红外光谱分析及与对照品活性比较进行结构鉴定。结果表明,丁香的高效杀螨活性成分主要存在于石油醚部位提取物中,其50%浓度体外杀死全部供试螨的平均时间为20min,柱层析和薄层层析分离纯化得到一种黄色油状化合物III,其50%浓度体外杀死全部供试螨的平均时间仅12min,化合物III的理化性质、紫外光谱、红外光谱及杀螨活性与丁香酚对照品完全一致,丁香酚为丁香的高效杀螨活性成分。     

东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的表达、纯化及抑菌活性分析

  【目的】利用毕赤酵母菌真核表达系统重组表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST,分析评价dybowskin-1ST的抑菌活性。【方法】采用TRIzol法提取蛙皮总RNA,经RT-PCR扩增获得抗菌肽dybowskin-1ST基因,将目的基因克隆到毕赤酵母菌分泌型表达质粒pPIC9K中,得到重组质粒pPIC9K-1ST。经电转化将pPIC9K-1ST转入到毕赤酵母菌GS115中,获得高效表达dybowskin-1ST的重组菌株。以甲醇诱导重组菌株,上清液经SDS-PAGE检测表明有目的蛋白dybowskin-1ST分泌表达。目的蛋白经Ni-agarose色谱柱分离纯化后,对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肠炎沙门氏菌和蜡状芽孢杆菌进行抑菌活性分析。【结果】成功构建了东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST的毕赤酵母真核表达系统,且dybowskin-1ST对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有良好的抑菌效果。【结论】东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST具有良好的广谱抗菌活性和潜在的研发价值。