禽霍乱、新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究Ⅰ报——疫苗的制备、免疫效果及安全性试验

采用新城疫病毒(NDV)Lasota株感染鸡胚尿液毒和多杀性巴氏杆菌(禽A型)接种固体培养基收获菌液,经灭活后制备成油乳剂灭活疫苗,应用该疫苗分别免疫18日龄雏鸡和60日龄以上的青年鸡;18日龄雏鸡免疫量为每只0.25mL,免疫后2周可测到ND抗体HI≥1∶16,3周攻毒ND保护率为100%;90～120日龄鸡免疫量为每只1mL,免疫3周攻毒,禽霍乱保护率为87.5%～100%.安全性试验表明,18日龄雏鸡注射0.5mL、120日龄鸡注射2mL疫苗,观察14天,无不良反应.     

禽霍乱、新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究I报——疫苗的制备、免疫效果及安全性试验

采用新城疫病毒(NDV)Lasota株感染鸡胚尿液毒和多杀性巴氏杆菌(禽A型)接种固体培养基收获菌液,经灭活后制备成油乳剂灭活疫苗,应用该疫苗分别免疫18日龄雏鸡和60日龄以上的青年鸡;18日龄雏鸡免疫量为每只0.25mL,免疫后2周可测到ND抗体HI≥1∶16,3周攻毒ND保护率为100%;90～120日龄鸡免疫量为每只1mL,免疫3周攻毒,禽霍乱保护率为87.5%～100%。安全性试验表明,18日龄雏鸡注射0.5mL、120日龄鸡注射2mL疫苗,观察14天,无不良反应。     

几种鸡新城疫油佐剂灭活疫苗免疫效果的比较

比较研究了鸡新城疫(ND)二价灭活苗、ND灭活苗、进口ND灭活苗、ND强毒(CNDV)灭活苗和ND克隆-30弱毒苗的免疫效果。结果表明,不同ND疫苗首次免疫鸡所产生的抗体有差异,ND二价灭活苗免疫鸡的抗体上升最快,免疫后20 d左右可达到最高峰。1日龄免疫,14日龄攻毒,ND二价灭活苗、ND灭活苗的保护率分别为5/5,4/5;10日龄和10日龄以上免疫,免疫后7 d或7 d以上攻毒,ND二价灭活苗、ND灭活苗、进口ND苗的保护率分别为4/5~5/5,2/5~5/5,0/5~2/5。攻毒后ND二价灭活苗、进口ND灭活苗免疫的与对照鸡的肛棉拭子NDV阳性数分别为0/5,5/5,5/5。结果表明,ND二价灭活苗免疫效果优于进口ND灭活苗、ND强毒灭活苗,稍优于ND灭活苗。     

H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护试验

应用表达H9亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原(SPF)鸡群,于免疫后采血测定HI抗体效价,并于免疫后第21天攻毒,攻毒后2～13d进行泄殖腔棉拭子采样,接种鸡胚测排毒情况。各免疫组在免疫后7～20d的HI抗体效价逐渐上升,但不同剂量组间、不同传代代次间有差异;攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少,且不同攻毒毒株组间无差异。重组苗组在攻毒后第2天仅有8%排毒,第5天则无排毒;灭活油苗组在攻毒后第2、5、7天分别有52%、12%、4%排毒,直到第9天才不排毒;空白攻毒组在攻毒后2～13d排毒率由92%缓慢降至8%。结果表明:研制的表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒载体疫苗具有较高的免疫保护效力,不低于灭活油苗,且在抑制早期排毒、防止群内传播方面优于灭活油苗。     

鸽新城疫油乳剂灭活疫苗的研制

鸽新城疫(PND)是一种高度接触性、败血性传染病,对养鸽业有巨大威胁.为了控制本病的发生,利用从当地鸽群分离的鸽新城疫病毒,研制了鸽新城疫油乳剂灭活疫苗,并对该疫苗的安全性、免疫效力、免疫期及保存期等进行了研究.结果表明:该疫苗使用安全,无不良反应;具有良好的免疫原性,免疫21 d攻毒保护率达100%;免疫期可持续6个月,免疫7个月攻毒保护率达80%以上;在2～8 ℃条件下保存有效期可达12个月,保存15个月进行效力检验,攻毒保护率仍达80%以上.     

新城疫分离株与La Sota疫苗交叉免疫保护性研究

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫带有新城疫母源抗体的雏鸡,免疫后每7d采集血清,用微量血凝抑制试验方法检测HI抗体.并于免疫后第21、28、35 d用鸡新城疫分离毒和NDV F_(48)E_9分别进行攻毒试验,结果显示,免疫鸡的HI抗体水平没有大的差异,分离毒株灭活苗对鸡新城疫强毒感染的免疫保护效力优于La Sota灭活苗.     

鸡传染性鼻炎多价油乳剂灭活苗的研究

应用鸡传染性鼻炎标准A型菌株 (HPG— 0 0 83)和标准C型菌株 (HPG—Modesto)与山东分离株HPG—HZ株制备的鸡传染性鼻炎多价油乳剂灭活苗 ,通过多批次免疫试验 ,安全性试验 ,攻毒保护试验 ,抗体产生及其变化规律和免疫期测定 ,结果表明 ,疫苗接种后 15天产生HPG血清凝集抗体 ,免疫接种 6个月用强毒攻击 ,免疫保护率为 10 0 % ,疫苗保存期一年以上     

雏鸡新城疫疫苗三种不同免疫程序的免疫效力

新城疫（ND）油乳剂灭活苗与LaSota株弱毒疫苗,采用三种不同方法对试验雏鸡进行免疫,依据HI抗体滴度的检测和攻毒试验,比较了雏鸡三种不同免疫程序的免疫效力,结果表明,3种程序免疫的雏鸡60日龄时对强毒攻击均得到完全保护,对母源抗体HI滴度5．2（log2HI值）的雏鸡,2日龄用ND油乳剂灭活苗和LaSota疫苗免疫优于2日龄用ND油乳剂灭活苗免疫或10日和20日龄用LaSota疫苗二次免疫。     

仔猪红黄痢疫苗的最小免疫剂量、免疫持续期和保存期试验

用大肠杆菌K88、K99、987P菌株和C型产气荚膜梭菌制备成仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗(仔猪红黄痢疫苗),以不同剂量的疫苗免疫怀孕母猪,然后对其所产仔猪用发病剂量的相应菌株进行攻毒,同时将连续3批疫苗置2～8℃保存,分别于保存后的不同时间取样进行保存期试验。结果发现,用1.6mL以上剂量疫苗免疫组仔猪的攻毒保护率均在80%以上。通过对免疫母猪所产的1、4、7和10日龄仔猪进行攻毒,仔猪的攻毒保护率均不低于80%,说明疫苗免疫产生期为仔猪吸食初乳后24h内,仔猪被动免疫持续期为7d以上。疫苗保存期检测结果显示,疫苗保存27个月后,疫苗的性状检验合格,对怀孕母猪安全,疫苗免疫母猪所产仔猪攻毒保护率均不低于80%。因此,确定疫苗的最小免疫剂量为1.6mL,仔猪被动免疫持续期为7d以上,疫苗保存期为2～8℃保存24个月。     

鸡传染性法氏囊病基因工程活疫苗(VAXXITEK HVT+IBD)免疫效果评估

为评估鸡传染性法氏囊病基因工程活疫苗(VAXXITEK HVT+IBD)的免疫效果,以最小出厂剂量(HVT:2 000 pfu/只)经皮下接种1日龄SPF鸡,28 d后以传染性法氏囊病病毒标准强毒BC6/85株攻毒。攻毒后连续观察4 d,记录临床不良反应,至第4天剖检法氏囊。结果表明:试验鸡在临床上均表现正常;法氏囊剖检显示疫苗免疫组100%正常,攻毒组100%出现典型法氏囊病变。VAXXITEK HVT+IBD疫苗免疫鸡对传染性法氏囊病强毒攻击能产生良好保护。     

禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究 (Ⅳ报)——疫苗的田间试验

[目的]评价禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗的临床应用效果,为联合防制禽霍乱和新城疫提供条件。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌1502强毒株与鸡新城疫病毒La Sota弱毒株混合,制备成5批合格的二联油乳剂灭活苗,用于鸡、鸭和鹅的田间安全性和免疫保护试验。[结果]田间安全性试验表明,免疫鸡、鸭和鹅均未出现不良反应;鸡的田间免疫效力试验表明,7～14日龄雏鸡和60～90日龄青年鸡免疫3周后新城疫血凝抑制（ND-HI）抗体效价均比对照组高2～3 log2,可持续4个月以上,禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率均达到75.0%以上,免疫效力可持续6个月;鸭和鹅的田间免疫效力试验表明,接种3周后免疫组ND-HI抗体效价均≥4.2 log2,对照组均≤2 log2;鸭、鹅的禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率分别在75.0%和62.5%以上。[结论]该二联苗免疫禽类安全可靠,具有良好的免疫效果。     

鸡新城疫V4克隆株疫苗研究与应用Ⅱ.疫苗安全性免疫效力、免疫持续期及保存期试验

用克隆株NDV4HB92接种鸡胚,制备5批活疫苗,经无菌检验合格后用于试验。安全试验表明:用10倍使用量含毒胚液,接种7日龄雏鸡,无不良反应;疫苗最小免疫量试验表明,用104EID500.1mL免疫18日龄易感雏鸡,14d后攻毒保护力达9/10以上;免疫持续期试验证明,用106EID50免疫18日龄易感雏鸡,有效抗体(HI≥1∶16)可持续4个月以上;保存期试验证明:湿苗-15℃保存有效期为18个月,4～8℃保存为4个月。     

重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在多联疫苗中的免疫效果评价

旨在研究重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在多联疫苗中的免疫效果。将50羽21日龄SPF鸡平均分为5组,分别用新流法(新城疫ND-禽流感H9-传染性法氏囊IBD)三联疫苗进行免疫,1组为非免疫对照组,2组免疫剂量0.05 mL,3组免疫剂量0.1 mL,4组免疫剂量0.2 mL,5组免疫剂量0.3。免疫后第21天采血,检测ND/H9血凝抑制抗体和IBD琼脂免疫扩散抗体。并用传染性法氏囊病毒强毒BC6/85株F₁代点眼攻毒,攻毒剂量为每只0.1 mL,观察96 h后剖检。结果表明,免疫后21 d,第5组血清中ND/H9 HI抗体分别为8.1log 2和 9.0log 2,IBD抗体4个试验组均显著高于对照组(P<0.05),5组显著高于2组。1组攻毒鸡全部发病,法氏囊外观发黄,呈胶冻样,囊内剖开有黏液,部分肉眼可见出血。1组未攻毒对照和免疫组,均未见异常,免疫攻毒保护率为100%。结果表明,重组鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白在三联疫苗中免疫剂量为每只0.05 mL,具有良好的免疫保护力,且不影响疫苗中其他抗原的免疫效果。     

EDS76—ND二联油乳剂苗的研究

本试验以减蛋综合症(EDS76)病毒株,新城疫(ND)Laosota 株为制苗毒株,分别经鸭胚和鸡胚增殖后,甲醛灭活.灭活毒液按适当比例混合加入油佐剂中,乳化制成“二联苗”.对所研制的二联苗的安全性、保存期、免疫效力等进行测试.结果表明:1.疫苗本身安全,对鸡无副作用;乳化度、稳定性和通针性良好;易于保存,常温避光6个月以上,4℃左右12个月,免疫效力无明显下降(P>0.05).2.疫苗免疫效果良好.ND于注苗后7天即产生免疫(HI抗体效价GMT log2为 7.5);EDS76免疫产生较慢,15天可产生较强免疫(HI价为7.3log2);两种HI抗体均于免疫后21天达到高峰值(ND为10.7long2.EDS76为10.2log2);免疫期可持续一年左右,即免疫活360天时,ND、EDS76两种HI抗体分别为7.1log2和6.2log2.区域试验免疫蛋鸡100多万只,临床调查可抽检证明该苗质量稳定,效果良好.     

禽霍乱·新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅲ报)——疫苗对鸭和鹅的安全性及免疫效力试验

[目的]为禽霍乱、新城疫二联油乳剂灭活疫苗免疫鸭和鹅等水禽提供理论依据。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌接种固体培养基收获的菌液与鸡新城疫病毒弱毒株La Sota接种易感鸡胚收获的感染鸡胚液混合,用甲醛溶液灭活后制备成5批二联油乳剂灭活苗,用于鸭和鹅的安全性及免疫效力试验。[结果]5批二联苗对鸭和鹅的安全性试验表明,免疫鸭和鹅均未出现任何不良反应;免疫效力试验表明,免疫后3周,鸭和鹅的新城疫血凝抑制抗体效价均≥4 log2,新城疫攻毒保护率均为100%,禽霍乱攻毒保护率为66.7%~83.3%。[结论]该二联苗用于免疫鸭和鹅安全可靠,免疫效果良好。     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

鸡传染性鼻炎灭活油乳剂苗研究

本研究用司本—８０和硬脂酸铝加入白油为油相，吐温—８０加入灭活的副鸡嗜血杆菌液为水相，制备成油乳剂苗．该苗属油包水类型，４℃放置６个月稳定，５倍量接种产蛋鸡，结果无不良反应。该苗免疫鸡群后一个月，其凝集抗体效价为１：６４～１：１２８，攻毒保护率为１００％，免疫期６个月．     

Ⅰ群禽腺病毒双价油乳剂灭活苗的研究

[目的]提高国内Ⅰ群禽腺病毒疫苗的防控能力,防止Ⅰ群禽腺病毒蔓延.[方法]优化Ⅰ群禽腺病毒的增殖条件,以Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAV-4)及血清8型(FAV-8)的抗原液制备油乳剂单价及双价灭活苗,比较甲醛及β-丙内酯(BPL)的灭活效果,并检验疫苗性状、监测免疫抗体水平及进行免疫攻毒试验和田间试验.[结果]疫苗灭活以1.00 mL/L终浓度的甲醛或0.500 mL/L终浓度的BPL为宜;3种疫苗均为白色状乳液,4 ℃下保存期均可达12个月,单价疫苗的最小免疫剂量为100 μL/羽,双价疫苗的最小免疫剂量为250 μL/羽;免疫抗体水平监测结果表明,免疫后第4周抗体水平达到峰值,且在免疫后第8周仍维持较高水平;免疫攻毒试验结果显示,3种疫苗的保护率均为100%,能完全抵抗病毒攻击;田间试验结果表明,在免疫初期3种疫苗抗体均达到预期免疫效果,免疫保护期在6个月以上,在生产中使用双价疫苗可以减少注射次数.[结论]FAV-4、FAV-8双价油乳剂灭活苗免疫效果好、保存期长、安全性好,为净化Ⅰ群禽腺病毒提供了技术支撑.     

特异性抗体对新城疫疫苗免疫原性的影响研究

对特异性抗体对新城疫活疫苗和灭活疫苗免疫原性的影响进行了研究.鸡源抗体与Ⅰ系苗制备的复合物(ND-IC)对有、无抗体的1,28日龄雏鸡安全,能诱导产生良好的免疫应答,免疫14 d后获得完全的攻毒保护;18日龄鸡胚免疫接种后不影响孵化率和8日龄内雏鸡的死亡率,14日龄小鸡血清抗体滴度在5 log 2(HI)左右及获得80%～100%的攻毒保护率.特异性抗体与灭活病毒混合后制备的油佐剂苗免疫1,28日龄鸡,血清抗体水平高于传统油佐剂苗,且免疫原性不受母源抗体的影响.以上结果表明,鸡源特异性抗体能提高Ⅰ系苗的安全性,而不影响免疫原性;对灭活抗原具有免疫增强作用.     

鸡新城疫活疫苗血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护结果相关性试验

为研究鸡新城疫活疫苗血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护结果相关性,试验分别通过血清学和免疫攻毒两种方法测定了疫苗对试验鸡只的免疫效力。结果表明,疫苗免疫鸡只的血清HI抗体效价与抗攻毒保护呈现正相关。当鸡新城疫血清HI抗体效价达到5.0 log2时,攻毒保护率为100%,此时可认为疫苗对鸡新城疫病毒达到完全保护。为保证疫苗质量,建议鸡新城疫血清HI效价5.0 log2时,可判定疫苗效力检验合格。