猪旋毛虫病快速检测试纸条的研制及特性测定

以旋毛虫重组分泌(excreting secretion．ES)抗原为基础,采用免疫金技术成功研制出旋毛虫病快速检测试纸条,试验结果显示试纸条与猪肺线虫、猪囊尾蚴、猪细颈囊尾蚴、猪米氏住肉孢子虫、猪蛔虫无交叉反应。证明旋毛虫病试纸条具有良好的特异性和敏感性,其敏感性与ELISA相当,与ELISA及消化法的检测结果符合率为100％。5min内肉眼观察获得结果,具有特异、敏感、快速、简单等特点,不需要任何专业技能和其他试剂。本方法的建立对猪旋毛虫病诊断和流行病学调查具有很大的应用价值。     

猪旋毛虫病的几种常见实验室鉴定方法效果比较

分别采用快速试纸条法、快速ELISA法、常规镜检法和人工胃液消化法4种方法对1566头屠宰猪做旋毛虫病的检测,旋毛虫检出率分别为1.66%、1.66%、1.21%和1.60%,通过对这4种方法检测效果进行比较,发现快速试纸条法具有特异、敏感、快速、简便的特点,用于现场检测可收到立等可取的效果。     

免疫层析试纸条检测实验感染猪旋毛虫抗体的研究

旋毛虫又称"旋毛形线虫",感染此病而诱发的旋毛虫病对人体危害大。目前,检验肉质中旋毛虫的方法,有肌肉压片镜检法和人工消化法,因各有弊端难以推广使用。笔者推荐免疫层析试纸条检测猪旋毛虫,方法:制备免疫层析试纸条,实验用猪30头,均采购本地规模猪场。分为2组,1组为感染组,20头;1组为正常组,10头。感染组,每头经5000条旋毛虫幼虫感染,试纸条进行血清及肉汁抗体检测,并与镜检法进行比较。结果:使用的免疫层析试纸条,具有操作简单、便捷快速、不需专业技能等优点,更便于推广应用。而且,更适合试纸条检测肉汁中旋毛虫抗体可用于新鲜肉及冷冻猪肉中旋毛虫检疫的初筛。     

旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的研制与应用

本研究建立了ＭｃＡｂ快速诊断猪旋毛虫病的ＥＬＩＳＡ试剂盒，应用旋毛虫单克隆抗体系和层析纯化抗原（ＰＡＡ）与旋毛虫肌幼虫排泄－分泌抗（ＥＳ）作常规ＥＬＩＳＡ平行检测６１头人工感染旋毛虫病猪血样，阳性率均为１００％，检测健康猪血样１０８２头，阴性率也为１００％，检测疫区自然感染猪血样１２５３头，阳性率分别为１．４４％和１．１２％，随机抽采１７５头猪血样和肉样作旋毛虫病消化法，常规法和快速法对比试验，诊     

旋毛虫肌幼虫ES Ag单克隆抗体的制备与特性鉴定

目的获得能够用于制备旋毛虫病快速检测试纸条的EsAg的单克隆抗体。方法应用旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原（ESAg）免疫诱导Balb／c小鼠,使小鼠产生较强的免疫应答,将免疫小鼠的脾细胞与NS0瘤细胞融合,利用Es45、ES49抗原通过间接ELISA对大量杂交瘤细胞培养上清的筛选,筛选出分泌高亲和力单克隆抗体的4株杂交瘤细胞。结果ES45和ES49（分子质量分别为45ku,49ku）分别被Ts-2D4、Ts-4C5和Ts-4H6、Ts-2G8单克隆抗体识别,与猪肺丝虫（Metastrongylus pudendotectus．MP）、囊虫（Cysticercus cellulosae,CC）、细颈囊尾蚴（Cysticercus tenuicollis,CT）、蛔虫（Ascaris suum,AS）、弓形虫（Toxoplasma gondii,TG）、住肉孢子虫（Sarcocystis miescheriana,SM）抗原反应测试表明,4株单抗与参试抗原均无交叉反应,所有单抗上清ELISA平均效价为1：1120,腹水ELISA平均效价为1．1×10^6,亲和力常数的平均值为6．12×10^9 L／mol。以金标免疫吸附试纸条原理为基础,利用制备的单抗成功研制了旋毛虫病快速检测试纸务,操作快速、无需设备及试剂,可以作为旋毛虫病的实时监测工具。结论ESAg单抗用于制备旋毛虫病快速诊断试纸条是理想的试剂。     

快速ELISA诊断猪旋毛虫病的研究

在快速间接ＥＬＩＳＡ中将被检血清样品和酶结合物一起保温，即简化了操作步骤，又比常规ＥＬＩＳＡ缩短了３０－９０分钟。通过对猪旋毛虫病阴阳性血清检测，表明该方法敏感性为９３．６２％，特异性为９６．８８％。为猪旋毛虫病提供了一种快速诊断方法。     

胶体金法与ELISA法检测盐酸克伦特罗的比较试验研究

[目的]本试验通过研究胶体金法与ELISA法在检测猪尿中盐酸克伦特罗的应用，得出两种方法在目前盐酸克伦特罗快速检测中结合使用的可能，从而在保证检测灵敏度和特异性的前提下，大大提高检测速度，并以此为基础建立一个不同于以前的监管模式。[方法]采用胶体金法和酶联免疫法(ELISA)进行比较。[结果]快速检测试纸条的灵敏度为5ng／nd，共检测442份猪尿样品，ELISA阳性7份，阳性率1．6％，胶体金阳性9例，阳性率2％；假阳性率为O．5％，符合率为99．5％；并可应用在宰后猪尿、猪肝检测中。【结论】胶体金法检测盐酸克伦特罗，具有操作简便、观察直观、快速、省时，其特异性、敏感性均达到ELISA水平；可作为饲养场、生猪中转站、屠宰场、菜市场筛查盐酸克伦特罗的重要手段，具有重要意义。     

口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。     

猪口蹄疫O 型抗体检测试纸条对比试验

为了解不同猪口蹄疫O 型抗体检测试纸条的性能,通过检测已知相关及非相关阳性血清样品、阴性血清样品和免疫 猪血清样品,对4种猪口蹄疫O型抗体检测试纸条的敏感性、特异性进行研究评估,并对比猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的检测结果。结果表明,仅有A试纸条的敏感性和特异性较好,且与试剂盒抗体检测结果的符合率较高（90%）;而其他试纸条的敏感性和特异性较差,与试剂盒抗体检测结果的符合率较低（40%～65%）。通过对比检测,仅有A试纸条可用于大量临床样品的快速检测和现场检测,更适合基层兽医和养殖户使用,而其他试纸条的检测性能还有待进一步优化提升。     

猪尿液中盐酸克伦特罗检测方法比较

利用快速检测试纸条法、竞争酶标免疫法(ELISA)和气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)分别对84份猪尿液样品进行盐酸克伦特罗检测。结果显示,ELISA方法与气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为90.5%。     

胶体金免疫层析检测牛结核γ干扰素方法的建立

牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研充结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91．3％。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。     

检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用

产单核细胞李氏杆菌为重要的食源性病原菌,本研究旨在建立快速、灵敏、特异的检测方法,提高检测效率和检测通量。李氏杆菌溶血素(LLO)蛋白经原核表达后, 制备单克隆抗体, 测定单克隆抗体的亚型、效价及亲和力。柠檬酸钠法研制LLO胶体金试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性、重复性、稳定性及模拟样品进行检测,并初步应用于实际海产品的检测。结果发现,制备的LLO单克隆抗体特异性强、稳定性高、重复性佳、灵敏度较高,亲和力好,亲和力常数为4.25×10⁸ L·mol^－1。人工污染样品试验表明灵敏度与纯细菌培养物基本一致,为3.0×10⁵CFU·mL^-1。将LLO胶体金试纸条应用于500份海产品的实际检测中,产单核细胞李氏杆菌的阳性检出率为2.20% (11/500),略低于国标检测方法(GB4789.30—2010)的2.40%(12/500)和PCR检测方法的2.40%(12/500),三者之间符合率为91.67%。另外缩短检测时间至15 min,检测效率大幅度提高。本研究建立的LLO胶体金检测方法可用于产单核细胞李氏杆菌的快速检测。     

牛奶中恩诺沙星和环丙沙星检测试纸的研制及性能测定

应用胶体金免疫层析技术建立了恩诺沙星和环丙沙星快速检测试纸,并对试纸条的检测限、特异性和稳定性等参数进行了确定。结果表明,该试纸条对牛奶样本的检测限为50μg/L,能够特异性地检测恩诺沙星和环丙沙星,与液相色谱-串联质谱方法检测的阴性样本符合率为97．8％。该试纸条在2℃～8℃或室温可保存12个月,可应用于恩诺沙星在牛奶中的快速筛查现场检测。     

Development of an antigen-ELISA and a colloidal gold–based immunochromatographic strip based on monoclonal antibodies for detection of avian influenza A(H5) viruses

Avian influenza A(H5) viruses (avian IAVs) pose a major threat to the economy and public health. We developed an antigen-ELISA (ag-ELISA) and a colloidal gold–based immunochromatographic strip for the rapid detection of avian A(H5) viruses. Both detection methods displayed no cross-reactivity with other viruses (e.g., other avian IAVs, infectious bursal disease virus, Newcastle disease virus, infectious bronchitis virus, avian paramyxovirus). The ag-ELISA was sensitive down to 0.5 hemagglutinin (HA) units/100 µL of avian A(H5) viruses and 7.5 ng/mL of purified H5 HA proteins. The immunochromatographic strip was sensitive down to 1 HA unit/100 µL of avian A(H5) viruses. Both detection methods exhibited good reproducibility with CVs < 10%. For 200 random poultry samples, the sensitivity and specificity of the ag-ELISA were 92.6% and 98.8%, respectively, and for test strips were 88.9% and 98.3%, respectively. Both detection methods displayed high specificity, sensitivity, and stability, making them suitable for rapid detection and field investigation of avian A(H5) viruses.     

胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较

用本实验室建立的胶体金免疫层析试纸条法检测了鸡血清中的禽流感病毒抗体，并与传统的血凝抑制试验、琼脂扩散法检测结果进行了比较。结果表明，胶体金免疫层析试纸条具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速等优点，适合于鸡禽流感病毒抗体的现场快速检测。     

Evaluation of a Rapid Reagent Strip Test for Blood Glucose Determination in Diarrheic Calves

Sixty-three blood samples from 10 diarrheic calves were tested for glucose concentration by two methods. Plasma glucose concentration was measured by the conventional glucose-6-phosphate dehydrogenase method in the clinical laboratory, and the results compared to those obtained using a rapid reagent strip test for blood glucose concentration measurement. The rapid reagent strip test result could not be used to make an accurate prediction of the actual plasma glucose concentration as determined by the conventional method, due to the wide variability in actual plasma glucose concentrations corresponding to each rapid test result.     

Evaluation of a rapid reagent strip test for blood glucose determination in diarrheic calves

Sixty-three blood samples from 10 diarrheic calves were tested for glucose concentration by two methods. Plasma glucose concentration was measured by the conventional glucose-6-phosphate dehydrogenase method in the clinical laboratory, and the results compared to those obtained using a rapid reagent strip test for blood glucose concentration measurement. The rapid reagent strip test result could not be used to make an accurate prediction of the actual plasma glucose concentration as determined by the conventional method, due to the wide variability in actual plasma glucose concentrations corresponding to each rapid test result.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金检测试纸卡的研制

为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93．3％。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。     

Comparison of two sampling techniques for the detection of Malassezia pachydermatis on the skin of dogs with chronic dermatitis

Adhesive tape strip and dry swab sampling techniques were compared for the detection of Malassezia pachydermatis on the skin of dogs with chronic dermatitis. One hundred and four dogs were sampled by each of the techniques. Two methods, a culture method and a stain method, were used to assess the sampling techniques. By the adhesive tape strip sampling technique, M. pachydermatis was detected on 83 (80%) dogs using the culture method and on 45 (43%) dogs using the stain method. By the dry swab sampling technique, M. pachydermatis was detected on 55 (53%) dogs using the culture method and on 33 (32%) dogs using the stain method. The study showed that the adhesive tape strip sampling technique, using the culture method, detected Malassezia on the skin of significantly more dogs (P<0.001) than the same technique using the stain method and also significantly more than the dry swab sampling technique, using either the culture or stain methods. It was also shown that an adhesive tape sample could be used to transfer cells to a slide for staining and microscopy prior to being used for culturing Malassezia.     

半定量检测新城疫抗体胶体金试纸条的研制

为建立半定量快速检测新城疫抗体方法，本研究利用柠檬酸钠还原氯金酸，形成胶体金颗粒，应用直径20nm的胶体金颗粒标记新城疫抗原，制作了半定量快速测定新城疫抗体的免疫胶体金试纸条。用试纸条检测60份样品，检测结果与血凝抑制试验（HI）法测得结果的符合率为93．8％，最小检测HI滴度为410g2，与其他病毒的阳性血清没有交叉反应，且室温下有效保存期为3个月。试纸条应用方便、快速，适合临床推广以及流行病学调查。