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光滑型布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:3,自引:1,他引:2
为制备抗布鲁氏菌单克隆抗体(MAb),本研究用灭活的布鲁氏菌疫苗M5-90株免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得杂交瘤细胞.以布氏杆菌疫苗株M5-90、S-19及小肠结肠炎耶尔森菌0:9的脂多糖(LPS)分别作为抗原包被酶标板,对杂交瘤细胞进行筛选,获得两株稳定分泌抗光滑型布氏杆菌LPS(S-LPS)MAb的细胞4G6和16C5.特异性分析表明,MAb 4G6除与耶尔森0:9全菌体有轻微的交叉反应外与其它革兰氏阴性菌无交叉,而16C5完全排除了与其他各菌的交叉反应.Ig亚型分析表明,所制备MAb的轻链亚类均为κ,4G6重链为IgM.16C5重链为IgG3.用Protein G亲和层析纯化MAb 16C5腹水并初步用于竞争ELISA方法,检测布氏杆菌抗体水平,结果表明了该实验方法的有效性.本研究制备的MAb 16C5具有高度的特异性和敏感性,排除了与其他革兰氏阴性菌的交叉反应,为建立一种诊断布鲁氏病的快速、有效、敏感的方法奠定了有力的基础. 相似文献
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按katendel氏法用伊氏锥虫JG株制备全虫抗原,以其免疫BALB/C小鼠。以50%PEG(MW4000,pH8.0)作融合剂。使免疫鼠脾细胞与S P2/0 Ag14(简称S P2/0)骨髓瘤细胞融合。经系统筛选和克隆化,建立了9个分泌抗伊氏锥虫抗体的杂交瘤细胞株。他们分泌的McAb,4株为IgG1、1株为IgG3、另4株为IgM。9株McAb在琼脂免疫双扩散试验中均不形成沉淀线。用ELISA检测,这些细胞系培养上清和腹水与同源伊氏锥虫虫株抗原的滴度分别为1:64-1:1024和1:6.4×103-1:6.4×105;与泰氏锥虫和弓形虫抗原则全为阴性。用2个异源伊氏傩虫虫株抗原检测时,8株无任何交叉反应,8株与2个异源株均有交叉反应,另3株则只与1个异源株有交叉反应。用增值反应检查了5株IgG类McAb识别抗原决定簇的特异性,除2株共同识别一种抗原决定簇外,另8株各自识别不同的抗原决定簇。 相似文献
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本文系肠结肠炎耶尔辛氏菌研究的综合报告。报告中对48个血清型肠结肠炎耶尔辛氏菌(Yer-sinia enterocolitica,简称 y.e.,下同)与三种布鲁氏菌之间的血清学交叉反应作了系统调查,首次发现除 y.e.0:9外,还有 y.e.0:22、y.e.0:28、y.e.0:35、y.e.0:46与三种布鲁氏菌有不同程度的交叉反应;初步探讨了交叉抗原抗体之间的关系,证实了 y.e.之间存在着共同抗原;利用 y.e.共同抗原确立了四种 y.e.与布鲁氏菌血清学交叉的鉴别方法,其中以间接血凝法为优;研制了冻干致敏血球诊断试剂;在国内,首次测定了二株 y。e.DNA 中 GC 百分含量;研制了成套的 y.e。单因子诊断血清。 相似文献
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用3M 氯化钾浸出的副结核分技杆菌细胞壁抗原(KCl-Ag)免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞和 NS-1骨髓瘤细胞融合,制备出3株抗副结核分枝杆菌单克隆抗体—McAb-JM_1、JM_2、JM_3。用 ELISA 方法对3株单克隆抗体与副结核分枝杆菌及其他6种分枝杆菌不同抗原的反应性进行了研究.McAb-JM_1与副结核分枝杆菌不同菌株间的 KCl-Ag 和部分胞浆抗原(PPD)发生交叉反应;在其他分枝杆菌抗原中,仅与牛草分枝杆菌的 PPA 和禽型结核分枝杆菌 KCl-Ag 发生交叉反应.McAb-JM_2在副结核分枝杆菌中.与强毒株抗原发生较强反应.而与弱毒株抗原反应性较弱。McAb-JM_3在分枝杆菌中.除 Teps 株和偶发分枝杆菌抗原外.均发生交叉反应。本文讨论了这些单克隆抗体在副结核病血清学诊断及抗原分析中的意义和用途。 相似文献
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《畜牧兽医科技信息》2015,(8)
为了验证荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感病毒的可行性,应用建立的荧光RT-PCR方法检测H7N9亚型禽流感抗原、H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原评估检测方法的特异性,检测不同稀释度的H7N9亚型禽流感抗原,并用建立的方法检测采自三鸟批发市场100份泄殖腔、喉拭子。结果是建立的荧光RT-PCR方法,H7体系能检测出1:10-10抗原稀释度,N9体系能检测1:10-9抗原稀释度,对H9亚型禽流感抗原、H5亚型禽流感抗原、新城疫抗原无交叉反应;检出100份泄殖腔、喉拭子结果均为阴性。结果表明,荧光RT-PCR方法H7N9亚型禽流感病毒具有快速、灵敏、特异的特点,适合对禽类的大规模监测。 相似文献
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为制备抗阪崎肠杆菌(ES)脂多糖(LPS)抗原单克隆抗体(MAb)及建立双抗夹心ELISA检测方法,本研究以热灭活的Es(ATCC51329)菌体抗原作为免疫原,ES菌体结合LPS作为筛选抗原,采用杂交瘤细胞技术筛选获得9株稳定分泌抗ES LPS特异性MAb的杂交瘤细胞株.采用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测ES的双抗体夹心ELISA方法,该方法对ES ATCC51329具有良好的特异性,最低检测限可达103 cfu/mL,为食品中ES的检测提供特异性MAb及ELISA检测方法. 相似文献
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丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制 总被引:2,自引:2,他引:0
通过向脂多糖(LPS)诱导牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)脂代谢紊乱模型中添加不同浓度(2、8、16 μmol·L-1)的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油(TG)含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组:对照组、LPS处理组、2 μmol·L-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示:LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降(P<0.05),TG含量极显著下降(P<0.01);不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降(P<0.01)、P-AMPK表达水平显著上升(P<0.05)、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升(P<0.05)、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升(P<0.05);与LPS处理组相比,(2、8、16 μmol·L-1)丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。 相似文献
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用交叉免疫电泳(ClE)及交叉线形免疫电泳(CLlE)对不同的付结核分枝杆菌菌株及其变种的抗原作了比较,同时还研究了其中一个菌株与禽结核杆菌及BCG之间的交叉反应。供试验的牛型付结核杆菌4个实验室菌株的每一株都具有44种抗原。与山羊变种(M、Ptb、CN)呈现交叉反应的有39种抗原,与绵羊变种(M、Ptb、oI)呈现交叉反应的有31种抗原,与禽结核分枝杆菌(M、avium)呈现交叉反应的有27种抗原,与卡介苗(BCG)呈现交叉反应的有24种抗原。 相似文献
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选用 2 4只 4月龄杜泊羊与小尾寒羊杂交一代 ,采用饲养试验和消化试验 ,研究生长杂种肉羊的蛋白需要量及其代谢规律。试验分高、中、低三个蛋白水平。结果表明 :试羊对日粮蛋白质的消化率和代谢率分别为 6 6 .96 %和 34.96 %。生长肉羊代谢粪氮 (MFN)和内源尿氮 (EUN)的排出量分别为 0 .16 4 0g/kgW0 .75·d和 0 .0 997g/kgW0 .75·d。生长肉羊维持可消化粗蛋白质需要量为 2 .5 9g/kgW0 .75·d ,每增重 1kg需可消化粗蛋白 374 .98g。生长肉羊的可消化粗蛋白总需要量 (RDCP ,RCP ,g/d)可按下式计算 : RDCP =2 .5 9W0 .75+374 .98△W RCP =3.88W0 .75+5 6 0△W 式中 :W0 .75,代谢体重 (kg) ;△W ,日增重 (kg) 相似文献
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动用CIE和ELISA对两种住肉孢子虫全包裹抗原及包裹各部分抗原的免疫特性进行了分析研究。结果表明:两种住肉孢子虫与网种或异种住肉孢子虫阳性血清具有强烈的交叉反应,各囊各部分抗原以缓殖子抗原免疫反应最强。 相似文献
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用分离白猪的 Y.e.0:9菌株制备抗原接种家兔。证实了 Y.e.0:9菌与布氏杆菌有强烈的交叉反应。测定了不同免疫期抗体消长的规律,10~21天为高峰期,260天消失。 相似文献