犊牛呼吸道合胞体病毒和巴氏杆菌混合感染的调查研究

为了对疑似牛呼吸道合胞体病毒和巴氏杆菌混合感染的犊牛进行病原鉴定,本研究采用常规病毒经细菌分离鉴定和PCR方法分别进行分离与鉴定。结果表明,该病毒株能在BT细胞上增殖并产生特征性合胞体形态的细胞病变;无血凝性和血吸附特性;能被牛呼吸道合胞体病毒(bovine respiratory syncytial virus,BRSV)标准阳性血清中和;分离的病毒经RT-PCR鉴定为牛呼吸道合胞体病毒;根据菌落形态、细菌染色特性及生化特性,鉴定分离的细菌为巴氏杆菌。提示,该牛场为牛呼吸道合胞体病毒和巴氏杆菌混合感染。     

小种群白唇鹿结核病的流行与诊断

青海省内某养鹿场，自1998年秋开始白唇鹿群陆续发生死亡，病变表现一致，主要是干酪样肺炎所属淋巴结肿大及干酪样坏死。通过对7例送检病料病理织织学诊断，发现都有典型结核结节及抗酸染色阳性杆菌。后对3例结核体症明显的重症白唇鹿进行剖检、病理组织学检查、结核菌培养及豚鼠接种实验确诊为结核病，经PCR检测进一步证实是因感染人型结核杆菌引起的白唇鹿结核病。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊治

通过对某猪场出现的疫情进行流行病学调查、临床症状、病理剖检、细菌分离培养鉴定及荧光定量PCR诊断,确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与副猪嗜血杆菌(HPS)混合感染。现场采集疑似副猪嗜血杆菌病的典型病料,用TSA培养基分离细菌,经菌落形态观察、镜检、卫星现象及PCR检测,确定分离菌为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果表明该分离株对先锋Ⅵ、阿莫西林、壮观霉素、庆大霉素均敏感。采用PRRSV核酸检测试剂盒对病料进行检测结果为阳性。综合判定该场为PRRSV和HPS混合感染。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定和药敏试验

采用细菌学检测方法和PCR技术对来自四川省遂宁市某规模化养猪场疑似副猪嗜血杆菌(HPS)感染的发病猪只肺脏等病料进行了HPS分离鉴定,结果分离出1株疑似HPS的细菌,经形态学、染色及培养特性检测、生化试验、血清型试验16 S rDNA序列分析,鉴定为4型HPS.动物致病性试验显示HPS分离株均具有较强致病性,药敏试验表...     

藏羊源牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及生物学特性分析

为了确定临床病例的致病原,并掌握该致病原的生物学特性,试验采用PCR检测、病毒分离培养与细胞病变观察、PCR分型鉴定、间接免疫荧光试验、中和试验、生物学特性检测等方法对临床病料样品进行研究。结果表明:病料样品经牛病毒性腹泻病毒(BVDV)特异性引物检测为阳性,病料样品可引起MDBK细胞出现典型的圆缩、拉网等细胞病变现象,PCR分型鉴定中分离毒株经BVDV-1特异性引物检测为阳性,间接免疫荧光试验中分离毒株可引起MDBK细胞出现特异性荧光,中和试验中分离毒株可被BVDV阳性血清特异性中和,分离毒株的TCID_(50)为1×10~(-5.61)/0.1 mL,对5-氟脱氧尿核苷不敏感,对乙醚、氯仿、胰蛋白酶等敏感,对酸性敏感,对碱性不敏感,54℃1 h可灭活。说明临床病例的致病原为藏羊源BVDV毒株。     

金昌市副猪嗜血杆菌的分离与鉴定

为确诊金昌市金川区某规模养猪场引起猪大量发病死亡的病因,以及时的找到有效的治疗方法,本研究针对该养殖场病死猪进行无菌采集组织病料,送往甘肃农业大学微生物实验室进行细菌学诊断的方法,对采集的病死猪肺脏、关节滑液、胸腔积液和心包积液进行了细菌分离纯化、染色镜检、生化鉴定和药物敏感试验等实验室检测,实验室检测结果显示组织病料抹片和细菌分离后染色镜检发现大量丝状革兰氏阴性杆菌,其生化试验结果与副猪嗜血杆菌生化特性一致,由此可以证实此次引起猪大规模发病死亡的病原微生物为副猪嗜血杆菌,经实验室药物敏感试验结果,可使用先锋霉素Ⅳ、阿米卡星等药物进行临床治疗。     

猪场副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

为查明贵阳市花溪区麦坪镇某猪场仔猪发生呼吸道疾病的病因,对送检的2头病猪采集病料进行细菌分离培养、染色镜检、生化试验、PCR扩增及测序、药敏试验。结果:从病料样本中分离得到1株细菌,根据形态学和生化试验初步鉴定为副猪嗜血杆菌;应用细菌16S rRNA序列分析技术从分子水平对分离细菌进行分型鉴定,运用DNAStar软件与不同血清型副猪嗜血杆菌基因序列进行比对,发现分离菌与不同血清型副猪嗜血杆菌菌株16S rRNA序列同源且相似性为97.4%～100%,其中与血清5型相似性最高;系统进化分析显示,分离菌株与血清5型副猪嗜血杆菌进化关系最近;分离菌株对利福平、头孢氨苄、阿米卡星、环丙沙星、万古霉素敏感。结论:综合分离细菌传统鉴定方法和分子生物学鉴定方法的实验结果,确定分离菌株属于血清5型副猪嗜血杆菌。     

某猪场高致病性猪蓝耳病和胸膜肺炎放线杆菌混合感染的诊断分析

为了查明贵州省某猪场从湖北引进的部分后备母猪发病及死亡原因,根据临床症状、病理解剖观察、细菌的分离培养、革兰氏染色镜检、生化鉴定、PCR/RT-PCR鉴定及小鼠致病性试验及接种Marc-145细胞等方法进行诊断。结果表明:分离的放线杆菌对磺胺甲基异唑和头孢曲松敏感,对小鼠有致病性,PRRSV-G1株的测序结果与近几年来国内各个地区流行的12株高致病性猪蓝耳病毒株同源性较高,为99.0%～99.5%,其NSP2基因均缺失了30个氨基酸,与2012年湖北分离的YC1202株(JX144928)属于同一遗传进化分支;将病料处理后接种Marc-145细胞后能产生细胞病变,最后确诊该猪场患病死亡猪为高致病性猪蓝耳病毒及猪传染性胸膜肺炎放线杆菌混合感染。     

一例牛支原体与巴氏杆菌混合感染的诊治

为了确诊贵州省清镇市某养牛场牛发病死亡的原因,通过临床症状观察、病理剖检、细菌分离培养、病原核酸PCR检测进行诊断。结果:病牛临床表现为精神沉郁、气喘咳嗽、体温升高、流浆液性鼻涕及呼吸困难;病理剖检发现病变肺脏质地变硬,肺脏表面有白色坏死灶;细菌分离培养在鲜血琼脂培养基上生长出灰白色、露珠状菌落,革兰氏染色镜检呈革兰氏阴性短小杆菌; PCR检测均扩增出牛支原体和巴氏杆菌特异性核酸片段。结论:确诊病例为牛支原体与巴氏杆菌混合感染。根据药敏试验结果对发病牛使用盐酸多西环素和氟苯尼考进行治疗,有效控制了疫情。     

一株多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与耐药性研究

从扬州大学动物医院收集送检病鸡的病料,无菌采集病死鸡的肝脏、肺脏等组织接种于麦康凯平板和血琼脂平板上进行细菌分离与培养,并对分离菌进行生化试验、16 S r RNA基因序列分析和荚膜分型PCR鉴定,同时用12种抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。细菌分离结果显示,分离菌在麦康凯平板上未见菌落生长,在血琼脂平板上呈光滑、湿润的露滴样小菌落;革兰氏染色镜检结果为革兰氏阴性小杆菌,瑞氏染色镜检可见大量两极浓染的短杆菌;生化试验结果表明分离菌株能够发酵葡萄糖、果糖、蔗糖等糖类,不能发酵乳糖和麦芽糖;同时,16 S r RNA基因序列和荚膜分型PCR测定结果显示分离菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。药敏试验结果表明,分离菌株对痢特灵、左氟沙星、强力霉素的敏感性较高,而对氯霉素、美洛西林、卡那霉素等高度耐药。     

奶牛布鲁氏菌病的病原分离与鉴定

为给奶牛布鲁氏菌病实验室诊断提供技术参考,对疑似布鲁氏菌病病例进行了病原分离培养,并采用平板直接凝集试验、革兰氏染色镜检、柯兹洛夫鉴别染色镜检和PCR方法对分离菌株进行了鉴定.结果表明：分离的4株细菌均为布鲁氏菌属细菌.     

Separation of avian heterophils from blood using Ficoll-Hypaque discontinuous gradients

Rapid separation of avian heterophils from anticoagulated whole blood was achieved using Ficoll-Hypaque discontinuous gradients. An average of 14.4% of blood heterophils was harvested with a mean purity exceeding 99%. Heterophil viability, as determined by trypan blue dye exclusion, averaged 99.8%. The integrity of isolated heterophils was evaluated by cytochemical staining and ultrastructural examination. Cytochemical staining reactions of heterophils in whole blood and of isolated cell suspensions were similar. No ultrastructural abnormalities were observed. Using this procedure, viable intact heterophils were rapidly isolated from blood with an acceptable cell yield and purity for cell function studies.     

Cytochemical staining characteristics of chicken heterophils and eosinophils

Cytochemistry was used to differentiate chicken heterophils and eosinophils in blood smears and cytospin preparations of isolated leukocytes. Cytochemical staining also was performed to evaluate any alteration of cell staining characteristics after heterophils had been isolated using discontinuous Ficoll-Hypaque gradients. Cytochemical staining reactions of heterophils and eosinophils were the same before and after discontinuous gradient cell separation. Characteristic positive reactions did not occur when chicken heterophils were stained with alkaline phosphatase, peroxidase, Sudan black B, acid phosphatase, alpha-naphthyl acetate esterase, naphthol AS-D chloroacetate esterase, periodic acid-Schiff, or Luna's eosinophil granule techniques. Chicken eosinophils stained positively when peroxidase, Sudan black B, acid phosphatase, and Luna methods were performed. In highly cellular cytospin preparations, peroxidase reactions readily distinguished the few contaminating eosinophils (< 1%) from the heterophils.     

小鼠睾丸支持细胞分离培养及生物学特性鉴定

为了揭示睾丸支持细胞在精子发生及睾丸免疫豁免中的生物学作用,采用胰蛋白酶、胶原酶分步消化法和1/3浓度的Hank′s低渗液、50mmol/L Tris-HC(l pH7.1)液分别低渗处理及油红O脂质染色法对16～22d的幼鼠睾丸进行分离、纯化和生物学特性鉴定。结果表明:分离、纯化后的睾丸支持细胞损伤少、活率高、睾丸支持细胞占培养细胞总数的90%以上;根据形态学观察及油红O脂质染色法鉴定,睾丸支持细胞的生长状态良好,细胞突起很多,核仁清晰,胞质中可见大小不等的红色空泡状脂质小滴。     

羊布氏杆菌的分离与鉴定

从一患睾丸炎公山羊中分离到一株革兰氏阴性短小杆菌,该菌经柯兹洛夫斯基鉴别染色红色,在普通绵羊血琼脂、巧克力平板上生长缓慢,对该菌的16S rDNA进行PCR扩增,测序,BLAST比较,结果显示该菌与羊布氏杆菌的16S rDNA有100%的同源性,菌体与布氏杆菌标准阳性血清起强凝集反应。结果显示,该分离菌为布氏杆菌。     

猪肺炎支原体YN200901株的分离鉴定

采集疑似猪肺炎支原体病理变化的肺脏,接种到改良牛心培养基、猪胃消化液培养基进行培养,经瑞特染色、镜检,菌落狄氏染色、PCR鉴定及序列比对、生化试验鉴定,抗猪肺炎支原体血清生长抑制试验,分离获得一株猪肺炎支原体云南地方流行菌株,命名为YN200901。试验结果为云南本地株猪肺炎支原体的后续研究提供了物质基础。     

诱导鸡胚精原干细胞向成骨细胞分化的研究

为了探讨体外培养的鸡胚精原干细胞(SSCs)的多向分化潜能,取孵化18~20 d的鸡胚睾丸,无菌获取SSCs,体外培养传代,通过地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C诱导鸡胚SSCs向成骨细胞分化,钙结节Von Kossa s法、改良的钙钴法及免疫组化法进行成骨细胞鉴定。结果显示SSCs被诱导15~21 d后分化为成骨细胞,诱导形成率为75%~80%;诱导后的细胞Von Kossa s染色可见细胞间布满黑色颗粒,提示有矿化基质沉积;改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色,免疫组化法染色细胞呈阳性。因此可以得出在不同的诱导条件下,SSCs体外可被定向诱导分化为成骨细胞,证明其具有多向分化潜能。     

水貂肺炎链球菌病的诊断与防治措施

在发生急性死亡的水貂脑中分离到9株细菌，经细菌培养、染色镜检、生化试验、动物试验证实分离菌株均为肺炎链球菌。药敏试验结果：分离菌株大部分对氟苯尼考、阿米卡星、头孢噻肟、氨苄西林、呋喃妥因敏感，应用敏感抗菌素与疫苗紧急免疫的方式，对该病的综合防治措施做了一系列探索式研究，并取得了理想的防治效果。     

东北虎巴氏杆菌病的病原分离鉴定及耐药性分析

为确定从死亡东北虎脏器组织中分离获得的1株细菌的特性，通过菌体形态、菌落形态、革兰氏和美蓝染色特性、生化特性、血清型、动物致病性试验等系统鉴定，确定其为高致病性的多杀性巴氏杆菌。20种常用抗菌药物的纸片法药敏试验结果证明，该菌株仅对新霉素、头孢唑啉和卡那霉素3种药物敏感，对大多数抗菌药物高度耐药。经电镜负染观察及传代细胞系和鸡胚进行病毒分离，结果均为阴性。     

徐州地区鸭传染性浆膜炎的病原分离鉴定及药敏试验

从徐州地区临床疑似鸭传染性浆膜炎发病鸭中分离到细菌21株，通过细菌形态、培养特怔、生化试验和动物试验，鉴定为鸭疫里默氏杆菌菌株，对不同地区分离到的21株菌进行了24种常用抗菌药物的药敏试验，结果该24个菌株对头孢类药物、红霉素、链霉素、妥布霉素、新霉素、氯霉素、泰乐菌素、痢特灵等几种药物敏感性较高，对喹诺酮类、强力霉素、丁安卡那霉素、林肯霉素、庆大霉素、氟苯尼考、利福平、复方新诺明等均不同程度地产生了耐药性。不同地区分离到的鸭疫里默氏杆菌对不同抗菌药的敏感程度存在较大差异性，研究结果为该地区鸭传染性浆膜炎的药物防治提供了很好的理论依据.