麦洼牦牛TLR1基因组织表达分析

【目的】建立一种牦牛TLR1基因表达量的荧光定量PCR检测方法,并分析TLR1基因在牦牛不同组织中的表达差异。【方法】参考牦牛TLR1基因序列,在其保守区设计特异性引物,并以牦牛β-actin基因为内参基因建立荧光定量方法;基于该荧光定量方法分析TLR1基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、乳腺、肌肉、卵巢11种组织中的表达水平。【结果】TLR1基因和β-actin基因扩增产物电泳结果呈现单一条带,其产物熔解曲线均为特异的单峰,表明引物具有较高的特异性。组织表达结果显示,TLR1基因在所检测的牦牛11个组织样本中均有表达,其中在肾、肝、脾、肺、卵巢、小肠中表达量较高,在胃、乳腺、心、大肠、肌肉组织中表达量较低。【结论】TLR1基因在牦牛各组织中转录水平差异较大,这可能与各组织对病原体的识别和抵抗能力有关。     

大白猪SLA-DQ基因表达规律的研究

采用半定量RT-PCR方法对SLA-DQA和SLA-DQB基因在1、90、180、270和360日龄大白猪不同组织与器官中表达情况进行了研究。结果表明,SLA-DQA和SLA-DQB基因在大白猪的整个生长发育期的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织与器官中均有表达,但表达量存在明显差异与变化。DQA基因在90日龄时表达量最高,在1日龄时最低;DQB基因除了在1日龄的心、肝和肾中表达量高于DQA基因外,其余各时间点的不同组织与器官内的表达量均低于DQA基因。     

不同日龄大白猪视黄酸γ基因的表达研究

[目的]探索不同日龄大白猪视黄酸γ基因的表达规律。[方法]以大白猪为试验材料,采用RT-PCR方法对其RARγ基因在1日龄9、0日龄1、80日龄2、70日龄和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。[结果]在大白猪的整个生长发育期内,RARγ基因在其子宫和卵巢中持续表达,而且在子宫中的表达量一直持续较高,且不同组织间的表达量差异不明显。在360日龄时所检的11个组织均表达该基因,且表达量较高。[结论]该研究为进一步探讨RARγ基因在猪体内运载视黄酸过程中所起的作用及其他生理功能奠定了基础。     

猪骨桥蛋白基因的组织差异表达

为了研究猪骨桥蛋白基因(Osteopontin,OPN)组织特异性的表达规律,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对猪OPN基因在心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑、垂体、下丘脑和子宫内膜等10种组织中的mRNA表达水平进行了检测.结果表明,OPN基因在子宫内膜的表达量为最高,其次是在小脑,在心、肝、脾和肺也有不同程度的表达,而在肾、下丘脑和垂体的表达量很少,从而提示OPN基因在子宫内膜中可发挥重要作用.     

不同日龄大白猪视黄素X受体α基因的表达研究

采用RT-PCR方法对大白猪的RxRα基因在1日龄、90日龄、180日龄、270日龄和360日龄的心、肝、胃、睥、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXRα mRNA在大白猪的肾脏、肺、小肠和肌肉组织中持续表达,而在心脏和子宫表达水平较低,1日龄时表达RXRα mRNA的组织最多,同时表达量也最高。     

LEPR基因在贵州白山羊组织中的表达

为探究瘦素受体基因(LEPR)在贵州白山羊组织中的表达规律,利用实时荧光定量PCR技术检测LEPR基因在贵州白山羊心、肝、脾、肺、肾、肠、背肌、腿肌和皮下脂肪9个组织的表达量。结果表明:目的基因LEPR和内参基因GAPDH的熔解曲线均呈单一峰形,说明所选条件可准确定量LEPR基因在贵州白山羊各组织中的相对表达量。具体表达量为脂肪脾肺背肌肠肝肾心腿肌。     

榕江香猪Noggin基因的组织表达

采用RT-PCR的方法对榕江香猪Noggin基因的组织表达进行研究，结果显示，Noggin基因在大脑、卵巢、子宫表达，其中大脑的表达量显著高于卵巢和子宫组织（P〈0．05）；脾、肺、脊髓、肝、肾等组织中未检测到Noggin基因的表达；对脑、子宫和卵巢检测分子长194bp的cDNA片段进行测序后，证实表达的片段为Noggin基因，与马、人、鼠、鸡和青蛙存在2～66个碱基的差别。研究结果证实Noggin基因在香猪的大脑、卵巢和子宫中表达，对这些组织可能有直接的调节作用。     

不同日龄大白猪视黄素X受体γ基因的表达研究

本研究采用RT—PCR方法对大白猪的RXR—γ基因在1日龄、90日龄、t80日龄、270日龄和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大畅、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXR—ymRNA在大白猪的心脏、脾脏、大肠、小肠和肌肉组织中持续高表达,而肾脏不表达该基因,肝脏组织也只在360日龄时有微量表达。     

单胺氧化酶A和B基因mRNA在仔猪各组织中的表达规律

单胺氧化酶（monoamine oxidase，MAO）是一种在生物体内具有重要功能的酶类，调节体内多种神经递质的浓度，如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺等，与精神性疾病密切相关。根据其底物和抑制物特异性MAO可以分为MAO-A和MAO-B 2种亚型。这2种亚型由不同的基因编码。为了了解MAO的2种亚型MAO-A和MAO-B在仔猪体内的分布情况，本研究用半定量RT-PCR的方法检测了仔猪心、肝、脾、肺、肾、胃、骨骼肌、十二指肠、结肠、大脑组织中二者mRNA的表达量（P〈0．05）。结果表明：MAO-A在各个组织中都有较高的表达，肝脏和肌肉组织中的表达量显著低于肾和大肠组织；MAO-B基因主要在仔猪的肺、心、肝、脾、肾等组织表达，在大脑、肠、胃、肌肉内表达较少（P＜0.05），或几乎不表达。     

CAPN1和CAST基因在牦牛不同组织中的表达差异研究

为检测钙蛋白酶基因(CAPN1)和钙蛋白酶抑制基因(CAST)在牦牛心、肝、脾、肺、肾、胃、眼肌、腹肌等不同组织中的表达水平,采用实时荧光定量PCR技术分析这2个基因的表达规律。结果显示,CAPN1和CAST基因在牦牛的8种组织中均有表达,但在不同组织的表达量存在差异。CAPN1基因在眼肌中的表达量最高,其次为腹肌,在肌肉中的表达量显著高于内脏组织,内脏组织中,在肝脏的表达量最高,其次为肾脏,胃中的表达量最低;CAST基因在胃中的表达量最高,其次为眼肌、腹肌,在肾脏中的表达量最低。     

神经生长因子受体TrkA在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

采用FQ-PCR方法和Western Blot技术对成年母牛卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中TrkAmR-NA和蛋白表达进行检测,旨在探讨TrkA在母牛卵泡期和黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。结果表明:TrkA mRNA和蛋白在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期输卵管中TrkAmRNA表达量极显著高于卵泡期卵巢和黄体期卵巢(P0.01),其他组织间无显著性差异。     

中国明对虾卵黄蛋白原mRNA在卵巢和肝胰腺中表达量的实时荧光定量PCR检测

中国明对虾卵黄蛋白原mRNA基因在卵巢和肝胰腺中都有表达。采用实时荧光定量PCR方法测定在卵巢不同发育时期卵巢和肝胰腺这两种组织的卵黄蛋白原mRNA的表达水平,提取组织总RNA,设计特异性引物进行荧光定量PCR扩增,对卵巢发育的各个阶段,卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期和消退期的卵黄蛋白原mRNA表达进行相对定量分析。结果表明:在卵巢中,卵黄蛋白原mRNA在前3个阶段随着卵巢的发育,表达量不断增加,分别为0.04、0.23和1.03,次级卵黄发生期开始减少到0.16,消退期卵黄蛋白原mRNA表达量又增加到1.00。而在肝胰腺,前4个阶段随着卵巢发育,表达量逐步增加,分别为0.01、0.07、0.19、和1.29,至消退期,表达量减少到0.74。研究亮点:使用实时荧光定量的方法,分析了中国明对虾卵黄蛋白原mRNA基因在卵巢发育的不同时期,卵巢和肝胰腺组织中的相对表达水平。选择敏感性和特异性较好的实验方法,在前人定性研究的基础上开始相对定量的研究,清晰地阐述了卵巢和肝胰腺中卵黄蛋白原mRNA基因的表达差异。     

脑源性神经营养因子在母牛性腺及性腺外生殖组织中的表达

采用RT-PCR方法及免疫组织化学技术检测脑源性神经长生因子BDNF基因在母牛卵泡期和黄体期的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达和定位情况。结果表明:BDNF mRNA表达于上述2个时期3种组织中,主要表达于卵巢的颗粒细胞和膜细胞、输卵管的黏膜上皮细胞、子宫内膜上皮细胞及子宫腺细胞,且各组织间免疫活性的表达强度明显不同。     

小鼠输卵管、子宫和卵巢中EGF-R mRNA表达的研究

目的 研究 ＥＧＦ－Ｒ ｍＲＮＡ在小鼠输卵管、子宫和卵巢中的表达．采用 ＲＴ－ＰＣＲ 技术检测小鼠排卵期和怀孕１～５ｄ的输卵管、子宫和卵巢中的ＥＧＲ－ＲｍＲＮＡ的表达。结果表明所研究各时期小鼠输卵管、子宫和卵巢中均有丰富的ＥＧＦ－Ｒ ｍＲＮＡ 活性,其中输卵管活性相对较弱,子宫和卵巢活性相对较强。进一步证实雌性生殖道分泌的ＥＧＦ家族生长因子对自身组织也有重要作用     

出雏至性成熟绍鸭卵巢FSH-R与LH-R mRNA表达的变化

用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测绍鸭出雏至 90日龄卵巢卵泡刺激素受体 (FSH R)和黄体生成素受体 (LH R)mRNA含量的变化。结果表明 ,卵巢FSH RmRNA水平在 30和 6 0日龄较高 ,且 30日龄时极显著高于 1和 90日龄 (P <0 0 1) ,与该阶段较高的卵巢相对生长速度相对应 ;而卵巢LH RmRNA水平随日龄逐渐升高 ,30、 6 0和 90日龄极显著高于 1日龄 (P <0 0 1) ,90日龄显著高于 30和 6 0日龄 (P <0 0 5 )。提示 :卵巢在早期发育阶段 ,尤其是快速增重期 ,对FSH的反应性较高 ;而接近性成熟时 ,可能由于卵泡发育的关系而对LH的反应性升高。     

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

 【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36 h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组（P＜0.01）,且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组（P＜0.01）,而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异（P＞0.05）;相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r = 0.741,P ＜0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。     

猪初情期NPY-Y1 mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴的表达定位

[目的]研究猪初情期NPY-Y1 mRNA在下丘脑、垂体和卵巢的分布定位。[方法]选取60日龄、体重为20 kg和160日龄、体重为80 kg的苏姜母猪各3头,麻醉后,取出其下丘脑、垂体和卵巢,制成冰冻切片。采用原位杂交技术检测各样品中NPY-Y1 mRNA的表达定位,并用PBS液取代杂交液作阴性对照。[结果]不同发育阶段的下丘脑、垂体和卵巢中均检测到NPY-Y1 mRNA的阳性杂交信号,且初情期前期（60日龄）样品的阳性信号较初情期（160日龄）强。[结论]下丘脑-垂体-卵巢轴内分布有NPY-Y1 mRNA,其对雌性生殖过程具有调控作用。     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

TRPV6在蛋鸡不同生殖器官组织的表达

【目的】研究瞬时性受体电位通道香草酸受体6（transient receptor potential vanilloid receptor 6, TRPV6）在蛋鸡卵巢、输卵管的膨大部、峡部以及子宫部的表达分布。【方法】本试验采用RT-PCR和免疫组化技术研究TRPV6在蛋鸡不同生殖器官的定性表达,同时采用Real-time PCR和Western blotting方法观察其表达量的变化。【结果】在卵巢,TRPV6蛋白主要分布在初级卵泡和次级卵泡。在输卵管的膨大部、峡部以及子宫部,TRPV6主要分布在黏膜上皮的纤毛上皮细胞游离端（面向管腔）,其中子宫部黏膜上皮的基底层也有少量分布。另外,与卵巢组织相比,膨大部和峡部TRPV6 mRNA表达量显著降低（P＜0.05）。同时,膨大部TRPV6蛋白含量也显著降低（P＜0.05）,子宫部组织TRPV6 mRNA水平低于卵巢,蛋白水平则相反,但均无统计学差异（P＞0.05）。【结论】TRPV6在卵巢、输卵管的膨大部、峡部以及子宫部均有表达,且卵巢和输卵管的子宫部表达量较高,提示TRPV6可能参与卵泡的发育成熟,对蛋鸡输卵管的子宫部Ca2+ 转运也具有重要意义。     

应用Solexa测序技术挖掘山羊卵巢组织microRNA

【目的】旨在构建、分析山羊卵巢组织miRNA表达谱,为进一步研究特定miRNA与山羊卵泡发育及性激素分泌等相关生殖活动的关系奠定理论基础。【方法】首先从山羊卵巢组织总RNA中分离小片段RNA,然后进行Solexa测序和生物信息学分析,最后利用q-PCR技术验证miRNA在山羊卵巢组织中的表达。【结果】共鉴定出508个山羊卵巢组织表达的miRNA和19个对应的miRNA*,这些miRNA在哺乳动物（绵羊、牛、猪、马、狗）进化过程中高度保守;q-PCR验证了8个miRNA在山羊卵巢组织中的表情况,定量结果与测序结果一致。【结论】成功构建了山羊卵巢组织miRNA表达文库,山羊卵巢组织miRNA表达丰富且其表达量各异。