调控民猪Tβ4基因转录因子的筛选与分析

为了筛选调控民猪胸腺β4(Tβ4)基因转录的增强子,探究该基因的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tβ4基因启动子区系列截短片段,与pMD18-T载体连接构建克隆质粒;通过双酶切和连接反应将系列截短片段定向连入pGL3-basic载体构建双荧光素酶重组质粒;将重组质粒转染PK15细胞系,利用双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;根据相对荧光素酶活性的高低进一步筛选Tβ4基因的启动子核心区域;利用3个在线软件预测核心区域内的转录因子结合位点,根据预测结果,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点构建突变载体,在PK15细胞中以野生型载体为对照检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明,试验成功构建了6个Tβ4基因系列截短的启动子片段,其中5个片段具有明显的活性。经过两轮的双荧光素酶活性检测发现,-155～-105 bp区域为民猪Tβ4基因的启动子核心区域,经生物信息学分析发现,该区域存在E2F-1、MYBAS1和ELK-1转录因子的结合位点。利用定点缺失构建了3个转录因子缺失的突变载体,经双荧光素酶检测发现仅有ELK-1结合位点的缺失,会造成启动子活性的显著下降(P0.05)。据此推测ELK-1是民猪Tβ4基因转录的正调控元件。     

猪ECH1基因部分序列的遗传变异分析

为了进一步研究烯脂酰辅酶A水解酶1(enoyl CoA hydratase,ECH1)基因的生物学功能,研究采用克隆测序结合PCR-RFLP的方法分析了民猪ECH1基因的部分DNA序列,并对其中的1个点突变进行了3个猪种内的基因型频率和基因频率计算。结果表明:研究所检测的ECH1基因序列与网上已有序列相比存在8个单核苷酸多态性(SNPs)位点,其中有2个造成酶切位点的改变;民猪和大白猪在PCR-RFLP-BamHⅠ位点的A、B基因频率均接近0.5,而长白猪B为优势等位基因。     

民猪AMPD1基因的克隆与真核表达载体的构建

为了研究腺苷-磷酸脱氨酶1(AMPD1)基因多态性,试验采用比较基因组学与克隆测序相结合的方法对比分析民猪AMPD1基因的DNA及cDNA全序列,并构建pcDNA3.1(+)-AMPD1真核表达载体。结果表明:AMPD1基因的13个外显子上有20个点突变,第1外显子第39位碱基突变造成MsⅡ酶切位点的缺失,第1 367位碱基突变造成BspAⅠ、MgoⅠ、NphⅠ等31个酶切位点的缺失并且成功构建了pcDNA3.1(+)-AMPD1真核表达载体。     

冷诱导下Y-box结合蛋白基因的表达变化

为了研究冷诱导下Y-box结合蛋白基因的表达,试验采用Real-time PCR的方法,将所得民猪的Y-box结合蛋白表达结果与长白猪的Y-box结合蛋白表达结果进行对比研究.结果表明:在-20℃条件下处理13 d后,民猪的Y-box结合蛋白基因的表达水平与常温组相比显著下降,而长白猪的Y-box结合蛋白表达无显著变化...     

猪TPST1基因的克隆、序列分析及真核表达载体的构建

酪氨酸硫化转移酶(Tyrosylrotein sulfotransferase,TPST)在酪氨酸硫化修饰过程中起调节作用.试验参照人、鼠、牛等动物的TPST1 mRNA全长序列设计引物,通过电子克隆结合RT-RCR的方法首次克隆获得包括完整CDS区的猪TPST1基因cDNA序列(HQ439987),分析其核苷酸序列及...     

维生素A对视黄素X受体β基因的诱导表达研究

采用RT-PCR技术检测分析了不同浓度的维生素A在猪的成纤维细胞内分别作用12、24和48 h后,视黄素X受体β基因（RXRβ）的表达变化情况。结果表明：不同浓度的维生素A对RXRβ基因的作用效果不同,12 h时,30.0μg·μL^-1组可显著诱导RXRβ基因的表达,24 h时,10.0μg·μL^-1组可显著诱导RXRβ基因的表达,48 h时,各组与对照组之间不存在差异。     

不同日龄大白猪视黄素X受体γ基因的表达研究

本研究采用RT—PCR方法对大白猪的RXR—γ基因在1日龄、90日龄、t80日龄、270日龄和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大畅、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXR—ymRNA在大白猪的心脏、脾脏、大肠、小肠和肌肉组织中持续高表达,而肾脏不表达该基因,肝脏组织也只在360日龄时有微量表达。     

猪PRL基因多态性与繁殖性能的关系

试验选择野家杂交猪（大白猪和野猪杂交）F1代猪群261头,采用PCR-RFLP法进行了PRL基因的基因型和等位基因频率检测及不同基因型的仔猪初生重、30日龄体重和有效乳头数效应分析。结果表明,BB型个体仔猪的初生重、30日龄体重略高于其他基因型个体,而CC型个体的有效乳头数略高于其他基因型个体,但差异均不显著。      

地层与水泥环的材料性质对油气井井筒力学状态的影响规律

井筒的完整性是保证油气井安全生产的前提。地层与水泥环的材料性质会影响井筒的力学状态,但是目前相关研究资料并不多。通过建立地层-水泥环-套管的力学模型,应用弹性力学理论,推导在地应力场中井筒第一、二界面的接触压力。引入压力传递系数概念,分析了水泥环和地层的弹性模量、泊松比对套管与水泥环力学状态的影响规律。结果表明,具有较大弹性模量与泊松比的地层有利于降低井筒载荷。推荐固井选用高强度、低弹性模量、小泊松比的水泥浆体系来提高井筒完整性。该研究成果对基于材料性质提高井筒完整性具有一定的参考意义。     

环颈雉和花尾榛鸡MC4R基因的克隆和序列分析

MC4R是由下丘脑腹内侧核分泌的神经受体,参与调节动物的体重、采食量和能量稳态。根据MC4R在物种间高度保守和只含有一个外显子的特点,参考鸡MC4R序列设计引物,利用PCR法克隆了环颈雉和花尾榛鸡MC4R的全长编码区。结果表明:环颈雉和花尾榛鸡MC4R都由331个氨基酸残基组成,二者相比只有2个氨基酸的差异,都含有7个跨膜结构,具有完全相同的结构功能域,都是疏水性蛋白;同源性分析显示MC4R高度保守,鸟类间、哺乳动物间氨基酸水平的同源性都在90%以上。表明MC4R在进化过程中承受着较大的选择压力,在动物的生长发育过程中具有极其重要的作用。