实验室常用猪精液的低温保存方法

<正>随着养猪生产的发展和产业化进程的推进。人们对猪人工授精重要性的认识越来越深刻,在现代养猪生产和育种工作中,人工授精正成为一种非常重要的生产途径。在猪的生产方面,人工授精技术的应用低温保存与冷冻精液相比,具有更好的受胎率和产仔数,而且操作简单,取材方面,更利用推广应用。现将总结的猪精液的低温保存方法介绍如下:     

抗生素替代物对猪生长性能和猪肉品质的影响

本项目以普通日粮作为对照组,苯甲酸0.4%、复合酸化剂0.4%和活性酵母菌0.05%三种添加剂作为抗生素的替代物,研究其对猪只的生长性能和猪肉品质的影响。结果表明,与对照组相比,各组的平均采食量之间没有显著差异;饲料利用率上看,试验组均比对照组的利用率高,其中酵母组利用率最高,料肉比为2.674(P≤0.05);从屠宰性能的影响来看,酵母菌组的屠宰率最高,比对照组提高了3.62%(P≤0.05);在平均背膘厚指标上,以酵母菌组最低,比对照组下降了23.71%(P≤0.05);从滴水损失来看,试验组都显著低于对照组;在瘦肉率方面,试验组与对照组比都有升高的趋势,以酵母菌组最高,但差异不显著。     

PRRSV GP5与GP4蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

[目的]实现PRRSV GP5与GP4蛋白在同一载体中表达各自编码的蛋白,发挥GP5蛋白在体液免疫中的优势和GP4蛋白在信号转导中的作用。[方法]利用RT-PCR扩增出GP5与GP4基因,克隆到pIRESneo载体的多克隆酶切位点及新霉素磷酸转移酶位点中,用XhoⅠ和NruⅠ双酶切含GP5和GP4基因的表达盒,将此表达盒克隆到犬2型腺病毒E3区缺失性载体pPolyⅡ-CAV-2-△E3中,以AsⅠc和PmeⅠ双酶切进行鉴定。[结果]将构建好的重组腺病毒免疫小鼠,可以诱导产生较强的体液免疫应答（ELISA抗体和中和抗体）。[结论]该重组腺病毒具有较好的免疫原性,可为研制有效的亚单位疫苗奠定基础。     

脑源性神经营养因子在母牛性腺及性腺外生殖组织中的表达

采用RT-PCR方法及免疫组织化学技术检测脑源性神经长生因子BDNF基因在母牛卵泡期和黄体期的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达和定位情况。结果表明:BDNF mRNA表达于上述2个时期3种组织中,主要表达于卵巢的颗粒细胞和膜细胞、输卵管的黏膜上皮细胞、子宫内膜上皮细胞及子宫腺细胞,且各组织间免疫活性的表达强度明显不同。     

神经生长因子(NGF)在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

本研究旨在探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在母牛卵泡期及黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。采用FQ-PCR方法和Western blotting技术对成年母牛卵泡期及黄体期的子宫、卵巢、输卵管中的NGF mRNA和蛋白质表达进行了检测。结果表明,NGF mRNA和蛋白质在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期子宫中NGF mRNA表达量显著高于卵泡期卵巢和黄体期输卵管中NGF mRNA表达量(P0.05),其它组织间无显著差异。     

活酵母菌对生长育肥猪生长性能的影响

抗生素在饲料中的应用所引起的药物残留问题得到了人们广泛关注,特别是欧盟2006年起禁止在饲料中添加任何抗生素以来,研究开发替代抗生素的绿色饲料添加剂就显得尤为重要。酵母菌不仅能为机体提供营养物质,还能调节胃肠道菌群平衡,提高机体免疫功能,从而能提高动物生产性能,使酵母菌成为替代抗生素的重要产品之一,也是研究者致力研究的热点。本试验采用活酵母菌替代抗生素,通过饲养试验,研究其对育肥猪生长性     

促性腺激素对输卵管黏膜上皮细胞NGF及TrkA表达影响

利用荧光定量PCR和ELISA技术研究了LH和FSH对输卵管黏膜上皮细胞表达NGF及其受体TrkA的影响.结果显示:FSH能促进NGF及其受体TrkA的mRNA的表达(P＜0.05);LH能促进NGF mRNA的表达(P＜0.05),也能促进TrkA mRNA的表达,但差异不显著(P＞0.05).ELISA结果表明,添加LH和FSH后,NGF的表达量有所增加,但是差异不显著(P＞0.05).这说明促性腺激素LH和FSH对NGF和TrkA的表达有影响.     

酵母双杂交系统研究及其应用进展

分子生物学技术的发展和人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识日益加深。基因工程领域又迎来了一个新的时代——功能基因组时代,它的任务就是解释大量生物体基因组测序结果,尤其是大量未经描述之基因的功能及其相应的蛋白质产物及功能。系统综合分析蛋白-蛋白相互作用将为了解蛋白质的功能提供重要的信息。酵母双杂交是目前研究蛋白-蛋白相互作用的所有方法中较为简便、灵敏和高效的一种方法。酵母双杂交系统（yeast two-hybrid system）在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中研究蛋白质间相互作用的一种非常有效的分子生物学方法。是一种新的直接于细胞内检测蛋白-蛋白相互作用,并且灵敏度很高的遗传学新方法,并被推广到了诸如细胞周期调控、信号传导、肿瘤基因表达等多个研究领域。     

NGF对输卵管黏膜上皮细胞促性腺激素受体表达的影响

本研究以牛输卵管黏膜上皮细胞为研究对象,利用荧光定量PCR方法检测NGF和酪氨酸激酶抑制剂K252α对输卵管粘膜上皮细胞膜促性腺激素受体FSHR和LHRmRNA表达的影响.添加30、60、100μg/L NGF可以显著增加FSHR mRNA的表达,添加30和60 μg/L的NGF同样增加LHR mRNA的表达.添加抑制剂K252α后,LHR和FSHR的表达量均比对照组显著下降.该结果说明NGF可以通过其受体调节输卵管黏膜上皮细胞促性腺激素受体FSHR和LHR的表达.     

应用基因芯片对4种产毒霉菌的检测

以霉菌的ITS2基因为靶序列，利用DNAman、DNAstar等生物信息软件在靶序列的指定片段内设计针对黑曲霉、黄曲霉、串珠镰刀菌和鲜绿青霉菌的30bp种特异性寡核苷酸探针和通用引物。将4种标准菌种的基因组通过扩增、线性Cy3或Cy5荧光标记、纯化、杂交试验，验证了探针的特异性和技术的可行性。结果表明，基因芯片可以应用于产毒霉菌的检测。