外源病毒检验用抗鸭瘟病毒特异性阳性血清的制备与检定

为制备鸭瘟种毒和鸭瘟活疫苗检验用抗鸭瘟病毒特异性阳性血清,对6个月龄左右的山羊进行五次免疫。最后一次免疫后2周采血并分离血清,血清经混合、分装、冷冻真空干燥后,对其进行了无菌检验、外源病毒检验、剩余水分测定、中和效价测定、均匀性检验。结果表明,本研究制备的抗鸭瘟病毒阳性血清特异性良好,无菌检验、外源病毒检验和剩余水分测定均符合《中华人民共和国兽药典》(2010年版三部)规定;血清中和效价大于1∶100,均匀性良好,可满足兽药典标准中鸭瘟种毒和鸭瘟活疫苗的鉴别检验和外源病毒检验。     

山羊抗犬瘟热—细小病毒二联高兔血清的研制

采用犬瘟热－细小病毒二联活苗结合它们的强毒组织灭活苗，经不同途径交替免疫成年山羊４次后，抗犬瘟热病毒血清中和抗体效价可达１：１０２４，抗犬细小病毒血凝抑制（ＨＩ）效价达１：２０４８。用该血清制剂对临床感染犬瘟热和病毒性肠炎犬，貉，狐３３６余病例进行跟踪治疗，总有效率可达８５％，治愈率为６８％，本血清具有安全性好，特异性强，治疗效果可靠等优点。     

山羊抗犬瘟热-细小病毒二联高免血清的研制

采用犬瘟热-细小病毒二联活苗结合它们的强毒组织灭活苗,经不同途径交替免疫成年山羊4次后,抗犬瘟热病毒血清中和抗体效价可达1:1024,抗犬细小病毒血凝抑制(HI)效价达1:2048。用该血清制剂对临床感染犬瘟热和病毒性肠炎的犬、貉、狐336余病例进行跟踪治疗,总有效率可达85％,治愈率为68％。本血清具有安全性好、特异性强、治疗效果可靠等优点。     

流行性乙型脑炎高免阳性血清的制备与应用

为满足乙型脑炎活疫苗的鉴别检验及外源病毒检验需求,以乙型脑炎活疫苗和灭活疫苗为免疫原,通过对SPF鸡进行反复免疫制备乙型脑炎特异性血清。当血清效价满足要求时,以心脏采血法采集血清,经分装、冻干后,开展纯净性检验、噬斑减少中和效价测定、特异性检验、剩余水分测定和均匀性检验,并对乙型脑炎活疫苗进行鉴别检验和外源病毒检验。结果显示:制备的乙型脑炎阳性血清无菌、支原体及外源病毒检验结果均为阴性,与口蹄疫病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒和牛病毒性腹泻病毒等均无交叉反应,噬斑减少中和效价大于1:1 000,剩余水分<3%,且10个样品的效价测定结果组内、组间均无明显差异(P<0.05)。结果表明,制备的乙型脑炎阳性血清效价高,剩余水分少,纯净性、特异性、均匀性均良好,可满足乙型脑炎活疫苗的检验需求。     

俄罗斯毛皮兽传染病防治

在俄罗斯养兽业毛皮兽常进行以下免疫，水貂注射犬瘟热、病毒性肠炎、肉毒中毒和假单胞菌病疫苗；狐狸、北极狐、浣熊注射抗皮肤真菌病、犬瘟热、肠道病及腺病毒病疫苗；艾虎注射犬瘟热和肉毒中毒疫苗。紫貂对上述传染病具有抵抗力，无须注射上述疫苗。毛皮兽用疫苗均为俄罗斯本国生产。用免疫电泳检测水貂阿留申病。     

猫、水貂及犬细小病毒的比较

引起猫、水貂及犬肠炎的病毒分别为猫泛白细胞减少症病毒、水貂病毒性肠炎病毒及犬细小病毒。这三种病毒均属于细小病毒科、细小病毒属。近年来,在安徽、河南、山东等地连续爆发家猫、云豹等猫科动物由猫泛白细胞减少症病毒引起的猫泛白细胞减少症。在黑龙江、辽宁等省的许多水貂场不断发生由水貂病毒性肠炎病毒引起的水貂病毒性肠炎。由犬细小病毒引起的犬、貂和狐狸的犬细小病毒肠炎,在全国许多地方亦有     

水貂肠炎病毒冻干活疫苗抗体消长规律的研究

为了探索研制的水貂肠炎细小病毒活疫苗中和抗体水平与免疫保护的相关性,研究以中和试验用水貂肠炎细小病毒冻干活疫苗免疫水貂进行中和抗体水平动态监测.结果表明:疫苗接种第7天抗体达到保护水平,第28天抗体水平达到高峰;免疫180 d后抗体仍在保护值以上.免疫180 d后80%免疫水貂获得保护,说明水貂肠炎细小病毒活疫苗免疫保...     

犬腺病毒（Ⅱ型）阳性血清的研制及应用

为研制犬腺病毒相关制品的检验用阳性血清,以健康易感山羊为免疫靶动物,深入优化免疫原和免疫程序,无菌采血后分离血清,并分装冻干。通过常规检验方法进行纯净性检测、特异性检测、抗体效价测定和中和指数测定,并将其应用于代表性的含犬腺病毒组分的活疫苗制品的外源病毒检验和鉴别检验等。结果显示,该批血清的纯净性检验和特异性满足要求,中和抗体效价为1∶9364,中和指数10~(6.0)。结果表明,该血清对犬腺病毒具有良好的中和作用,能够应用于犬腺病毒相关制品的外源病毒检验和特异性检验等,是兽用生物制品国家标准物质的重要候选标准品。     

猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验阳性血清制备

为制备猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验阳性血清,本实验将4头非免疫健康猪进行猪瘟活疫苗基础免疫和猪瘟石门强毒株反复强化免疫后,采血分离血清,过滤、分装、冻干、熔封,获得4批产品,并进行了检验和验证。结果显示:物理性状、无菌检验、安全检验、均一性检验、支原体检验、真空度测定均合格;剩余水分均小于4%;特异性检验表明,口蹄疫病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒抗体均为阴性;残余猪瘟病毒免疫荧光和套式RT-PCR核酸检测结果均为阴性;兔体中和效价分别为1∶800、1∶800、1∶800和1∶1 600;对猪瘟兔化弱毒种毒和5种猪瘟活疫苗的验证结果均良好。该4批血清可以用于猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验。     

水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)效力检验用实验动物抗体效价的对比研究

为了变更"水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)"质量标准中效力检验用的试验动物,试验采用血凝抑制试验方法,对比检验水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)对水貂和兔产生的抗体效价水平。结果表明:水貂和兔接种疫苗后14～180天的血清HI抗体水平差异不显著(P0. 05),均达到效力检验质量标准要求。用兔替代水貂进行水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗(MEVB株)的效力实验的抗体监测科学、方便、可行。     

水貂肠炎细小病毒灭活疫苗抗体消长规律的研究

应用血凝抑制试验对水貂肠炎细小病毒灭活疫苗免疫水貂进行抗体水平动态监测,结果表明,疫苗接种14 d抗体达到保护,21~30 d抗体水平达到高峰;免疫180 d抗体仍在保护值以上。攻毒试验证实,免疫180 d后90%免疫水貂获得保护,确定水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗免疫保护期可持续6个月。     

新生水貂肠炎病毒母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果研究

本研究旨在探索水貂肠炎病毒（mink enteritis virus,MEV）的母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果。以免疫母貂所生仔貂为研究对象,采集21、30、45、60日龄仔貂血清,测定水貂病毒性肠炎母源抗体HI效价（MEV HI）;选取25只47~52日龄健康水貂接种制备MEV基因工程亚单位疫苗,免疫前后14 d采血测定MEV HI效价;免疫后14 d进行水貂肠炎病毒攻毒临床症状观察,并测定粪便HA效价;攻毒后14 d对濒死和存活水貂安乐死,采集十二指肠、空肠和回肠进行病理组织学观察和免疫组化检测。结果显示,免疫母貂所产仔貂的MEV HI效价随着日龄的增加逐渐降低,在21日龄时较高,45日龄时少部分仔貂MEV HI效价<1：32,60日龄时大部分仔貂HI效价≤ 1：4;使用制备合格疫苗免疫后14 d对照组水貂的MEV HI效价均不高于1：4,免疫组MEV HI效价升高至1：64~1：512;攻毒保护试验表明,免疫组水貂100%抵抗水貂肠炎病毒强毒的攻击,水貂的精神、饮食、粪便等均未见异常,且攻毒后粪便HA效价为1：8~1：16;病理组织学和免疫组化检测结果表明,MEV基因工程亚单位疫苗能够很好地阻止病毒在肠黏膜上皮细胞的复制和对肠黏膜上皮细胞的损伤。因此,免疫母貂所生仔貂21日龄时体内抗体效价最高,制备的疫苗免疫50日龄左右的水貂时能够突破母源抗体干扰并产生高水平的抗体,能够抵抗水貂肠炎病毒强毒株的攻击。     

我国“貂瘟”、“狗瘟”病原分离、鉴定的研究

研究了我国的“貂瘟、狗瘟”病原。用敏感动物和鸡胚、犬肾单层细胞分离获得 HMDV、JMDV、LCDV 三株病毒。分离毒在鸡胚、犬肾、水貂睾丸,仓鼠肾等单层细胞上生长良好,产生病变具有付粘病毒“属”的特性。以法国犬瘟热弱毒苗及分离毒制备了阳性血清,作血清学病毒鉴定,病毒血凝和血抑效价1:320,血清抗体中和效价为1:160……,免疫前血清为1:20。本病毒属 RNA 病毒、不耐醚。电镜观察:病毒有囊膜和纤突、核衣壳呈螺旋对称型,病毒颗粒为132～175nm,位于细胞质内,其结构形态特点与美国犬瘟热弱毒Distemink.TC 株相类似。综合研究结果,鉴定本病毒为犬瘟热病毒,发生于我国的“貂瘟、狗瘟”定性为犬瘟热病。     

1种犬瘟热阳性血清的制备方法

采用兔多次免疫犬瘟热弱毒来制备犬瘟热阳性血清,经检测阳性血清无菌、支原体,外源病毒检验、特异性检验和效价检测均符合相关要求,可用于犬瘟热活疫苗检验使用。本制备方法操作简单,成本低,特异性好,并且减少了外源病毒的污染风险。犬瘟热阳性血清的成功制备,为犬瘟热活疫苗的研究和质控提供了基础保障,同时为犬瘟热紧急治疗提供了新的解决思路。     

水貂犬瘟热病毒RC01株和细小病毒RC02株的分离鉴定及攻毒保护试验

取某水貂养殖厂疑似犬瘟热病毒和细小病毒混合感染病料,采用犬瘟热抗原快速检测试纸、HA和PCR、RTPCR法检测CDV和MEV。分别以抗CDV和抗MEV阳性血清中和后接种敏感细胞进行蚀斑纯化,成功分离一株细小病毒(MEV-RC02株)和犬瘟热病毒(CDV-RC01株)。将纯化后的MEV-RC01株和CDV-RC01株分别回归本动物,结果显示,分离株均具有较强的致病性。将水貂犬瘟热(CL08株)、病毒性肠炎(NA04株)二联活疫苗免疫健康非免貂后进行攻毒保护试验,结果表明,该二联疫苗对分离的MEV-RC02株和CDV-RC01株流行毒株具有很好的保护作用。     

水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗保存期试验

对2~8℃条件下保存90,120,150,180,210,240,300,360 d的水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗接种水貂进行免疫试验,结果表明:保存300 d的疫苗接种水貂30 d后血清中水貂肠炎细小病毒(MEV)HI抗体均在1∶32以上,免疫水貂强毒攻击均获得100%保护,确定水貂细小病毒细胞灭活疫苗保存期为300 d。该结果为水貂细小病毒细胞灭活疫苗运输和保存提供了理论依据。     

肉食兽细小病毒研究进展

在我国肉食兽养殖业细小病毒病十分常见,具有较高的发病率和死亡率,猫泛白细胞减少症病毒(FPV),水貂肠炎病毒(MEV),貉细小病毒(RDPV),蓝狐细小病毒(BFPV),犬细小病毒(CPV)均属于细小病毒科细小病毒属成员。对我国肉食兽动物的养殖有着十分严重的危害。为更好地解决细小病毒病带来的困扰,本文就几类肉食兽细小病毒的亲缘关系,常见的诊断方法,疫苗的研制展开研究。     

水貂CDV-MEV二联多表位抗原的设计

正犬瘟热和水貂病毒性肠炎是在毛皮动物养殖业中广泛流行的两类急性、接触性传染病,病原分别是犬瘟热病毒(CDV)和水貂肠炎病毒(MEV)。疫苗接种是主要的预防手段[1-2]。但当前市售MEV灭活苗更新速度慢、灭活剂致癌,不能诱导细胞免疫反应;CDV弱毒苗易受母源抗体干扰,存在一过性免疫抑制、返祖散毒等问题[2-4]。因此,笔者设计了安全、特异性高的CDV-MEV二联多表位抗原,并对其免疫效     

鸡抗血清3型鸭甲型肝炎血清的制备与初步应用

通过使用血清3型鸭甲型肝炎疫苗毒免疫SPF鸡,制备血清3型鸭甲型肝炎诊断用标准阳性血清,对制备血清进行无菌、支原体和特异性检验以及效价测定,并用该抗血清进行鸭病毒性肝炎治疗试验。结果表明,该血清无菌检验合格,无支原体污染,特异性良好,无禽类常见13种外源病毒抗体,血清中和效价为10-2.8。发病雏鸭紧急治疗保护率为91.67%,而与血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1)无交叉保护。     

水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗与水貂犬瘟热活疫苗混合免疫效果评价

为评价水貂病毒性肠炎杆状病毒载体灭活疫苗(简称MEV亚单位疫苗)与水貂犬瘟热活疫苗(简称CDV活疫苗)混合免疫的效果,本研究将两种疫苗混合后在室温静置不同时间测定犬瘟热病毒(CDV)含量,并选用30只健康水貂随机分为6组进行比对试验,其中G1和G2组免疫MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗的混合疫苗,G3组为CDV活疫苗单独免疫组,G4组为MEV亚单位疫苗单独免疫组,G5和G6组分别为CDV攻毒组和MEV攻毒组。免疫后21 d采血检测CDV中和抗体,同时对G1、G3、G5组进行CDV攻毒;免疫后14 d采血检测MEV血凝抑制(HI)抗体,同时对G2、G4、G6组进行MEV攻毒。结果：两种疫苗混合后在室温静置2 h, CDV含量无明显下降。免疫后21 d, G1和G3组CDV中和抗体效价达到1∶64.6～1∶128.8,CDV攻毒后混合疫苗和CDV活疫苗免疫组的保护率均为100%。免疫后14 d, G2和G4组的MEV HI抗体效价达到1∶128～1∶1 024,MEV攻毒后混合疫苗和MEV亚单位疫苗免疫组的保护率均为100%。研究表明,MEV亚单位疫苗稀释CDV活疫苗,混合免疫后各疫苗的免...