丙乳砂浆在头屯河水库除险加固工程的应用

阐述了丙乳砂浆的性能、应用部位和组成，结合头屯河水库除险加固工程详细介绍了丙乳砂浆的施工工序。     

我国宠物用病毒类生物制品质量情况分析与建议

对2008-2020年我国宠物用病毒类生物制品质量情况进行总结,分析了宠物用病毒类生物制品质量检验中发现的问题,提出了完善兽用狂犬病灭活疫苗效力检验方法、加强纯净性检验方法研究、建立以单抗为基础的宠物用标准物质库、加快宠物用制品重点品种研制等提升宠物用病毒类制品质量和研究的建议。     

论小型水利工程质量监管存在的问题及对策

阐述了水利工程质量存在的问题，提出落实项目法人责任制、提高设计质量、保证施工质量、提高监理工作水平、做好政府质量监督工作等方面的对策措施和建议。     

犬腺病毒（Ⅱ型）阳性血清的研制及应用

为研制犬腺病毒相关制品的检验用阳性血清,以健康易感山羊为免疫靶动物,深入优化免疫原和免疫程序,无菌采血后分离血清,并分装冻干。通过常规检验方法进行纯净性检测、特异性检测、抗体效价测定和中和指数测定,并将其应用于代表性的含犬腺病毒组分的活疫苗制品的外源病毒检验和鉴别检验等。结果显示,该批血清的纯净性检验和特异性满足要求,中和抗体效价为1∶9364,中和指数10~(6.0)。结果表明,该血清对犬腺病毒具有良好的中和作用,能够应用于犬腺病毒相关制品的外源病毒检验和特异性检验等,是兽用生物制品国家标准物质的重要候选标准品。     

牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎可视化基因芯片检测方法的建立

针对现有牛病病原检测方法指标单一,操作复杂的现状,拟建立一种可高效检测牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎的基因芯片技术。根据已公布的各病原核酸序列,设计引物和探针。利用多重PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针特异性杂交,芯片反应显色后肉眼观察进行检测结果判定。优化反应条件、建立检测方法,同时对检测方法的灵敏度、可重复性、特异性、保存期等进行评价。结果显示,该基因芯片检测方法单一病原灵敏度检测可达1.0×10~(-6) ng/μL,混合病原灵敏度检测可达1.4×10~(-5) ng/μL;各病原间无交叉反应,检测健康牛血清、组织,牛流行性热病毒也均无响应;针对同一阳性质控品,芯片重复率达100%。保存期试验表明,芯片在2～8℃至少可保存6个月。检测30份临床样本,结果与标准方法结果一致。实验建立的方法具有高通量、高灵敏度、高特异性等特点,可在3 h内完成同时对七种牛重要疫病的检测,在牛群疫病诊断、净化及流行病学调查等方面有良好的应用前景。     

小反刍兽疫病毒反向遗传学研究进展

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的山羊、绵羊等小反刍动物的急性、高度接触性传染病。反向遗传学是在获得生物基因信息的基础上,对基因进行突变、缺失等操作,进而研究基因变化对表型的影响。本文综述了包括PPRV在内的单股负链RNA病毒反向遗传学的最新研究进展,以期为PPRV及同科属病毒的反向遗传操作系统的建立提供新的思路。     

副流感病毒5型荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立检测副流感病毒5型(PIV5)的荧光定量RT-PCR方法,针对PIV5 L基因设计筛选出一对特异性引物和探针,对退火温度、引物浓度、探针浓度进行了优化,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示：最适退火温度为54.7℃,最适引物浓度为0.5μ mol/L,最适探针浓度为0.1μ mol/L。检测灵敏度为10 copies、0.8-1TCID50,特异性结果显示与BPIV3等22种常见病毒均无交叉,重复性试验显示不同模板浓度重复检测变异系数均小于1.5%,重复性良好。     

细胞源猪瘟活疫苗E2基因遗传稳定性和免疫原性分析

测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的E2蛋白N-糖基化位点、E2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的E2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。     

副流感病毒5型SH蛋白单克隆抗体的制备

为获得副流感病毒5型SH蛋白的单克隆抗体，将构建的重组表达质粒pET43a-SH转化BL21(DE3)plys，经IPTG诱导表达、过镍柱纯化后将重组蛋白作为免疫原，免疫8周龄Balb/c雌性小鼠，并按常规方法制备杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光方法进行筛选，获得3株杂交瘤细胞株，命名为5B9、3G8、4E11，并进行了培养特性、分泌抗体活性、分泌抗体亚类的鉴定。结果显示：3株细胞株连续传代10代均稳定分泌单克隆抗体，细胞上清液IFA效价稳定，分泌单克隆抗体亚型均为IgG2a。制备并纯化了1株(5B9)单克隆抗体，浓度为4.26 mg/mL，纯度不低于90%，IFA效价不低于1∶2000，与猪牛等常见病毒均无交叉反应。     

绵羊痘种毒保存期试验

鸡胚化绵羊痘羊体反应细胞毒(以下简称“绵羊痘种毒”)是制备绵羊痘活疫苗的基础种子，对于预防和控制绵羊痘疫情具有重要意义，定期对其检定十分必要。2000年版《中华人民共和国兽用生物制品规程》(以下简称“《规程》”)规定：绵羊痘种毒在-30℃以下，保存期为10年。为进一步探究绵羊痘种毒的保存期，本试验选取1981年1月、1983年1月、1990年4月和2006年2月冻干并于-70℃保存至今的4株绵羊痘种毒，进行病毒含量测定和最小发痘量测定。结果显示，4株绵羊痘种毒的最小发痘量均达到10^-5/0.5 mL,符合《规程》之规定；病毒含量分别为10^3.3、10^3.8、10^4.8和10^5.5 TCID₅₀/0.1 mL,且与最小发痘量在一定范围内呈正相关。结果表明，冻干绵羊痘种毒在-70℃条件下保存39年仍符合生产活疫苗的免疫原性标准，因此可将绵羊痘种毒的保存期延长至-70℃保存30年，本试验为绵羊痘种毒的保藏检定和疫苗生产提供数据支撑。