发酵天数和生物发酵剂互作对6种中药渣营养价值的影响

试验旨在探讨不同生物发酵剂处理和发酵天数互作对中药渣发酵后营养价值的影响。试验选取6种常见中成药渣，采用4×4双因素试验设计，以不同生物发酵剂（对照组、复合酶组、复合菌组及复合酶+菌组）和发酵天数（3、6、9、12 d）为两个试验因素，每个因素4个水平，开展不同因素及水平互作对发酵后中成药渣营养成分含量的变化。结果显示，不同发酵剂处理及不同发酵天数对6种中药渣常规营养成分含量变化的影响存在极显著交互作用（P<0.01）。当添加复合酶粉与复合菌粉协同发酵后，发酵中药渣品质显著提升，纤维含量下降，粗蛋白质含量提升；随着发酵天数延长，发酵中药渣品质呈现先升高后降低，在发酵12 d时达到与发酵3 d相近的发酵效果。研究表明，选择复合酶粉与复合菌粉混合处理组为适宜的发酵剂，适宜的发酵时间为3 d。     

水貂绿脓杆菌分离株的生物学特性和血清型分析

为了解国内水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌的生物学特性和血清型分布,2002—2010年间从国内5个省水貂养殖场暴发出血性肺炎的水貂肺中分离获得45株绿脓杆菌,测定了分离株的生化特性、血清型、抗生素敏感性和对小鼠和水貂的半数致死量(LD50)。结果表明:分离菌株的主要生化指标除甘露醇和ONPG与人医临床分离株的不同外,其余均与绿脓杆菌的生理生化特性相同。45株菌共分为3种血清型:G型(42/45),B型(2/45)和I型(1/45),此结果与国外近几十年流行的水貂出血性肺炎和人医临床分离的绿脓杆菌主要流行血清型相同。45株菌对5种抗生素均较敏感,敏感性与分离的年份和菌株的血清型无关系。经动物试验证明,所选的4株菌毒力均不同,2株B型菌株毒力均较G型弱,4菌株对水貂的毒力均强于对小鼠的毒力,说明菌株对水貂较易感。     

水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗保存期试验

对2~8℃条件下保存90,120,150,180,210,240,300,360 d的水貂细小病毒性肠炎灭活疫苗接种水貂进行免疫试验,结果表明:保存300 d的疫苗接种水貂30 d后血清中水貂肠炎细小病毒(MEV)HI抗体均在1∶32以上,免疫水貂强毒攻击均获得100%保护,确定水貂细小病毒细胞灭活疫苗保存期为300 d。该结果为水貂细小病毒细胞灭活疫苗运输和保存提供了理论依据。     

水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用

为建立检测水貂犬瘟热病毒(mink canine distemper virus, CDV)的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量方法，以便提供水貂CDV在诊断检测方面的技术支持，本研究根据实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法原理，建立了水貂CDV数字PCR方法，并优化了反应条件，评估了特异性、敏感性以及重复性。结果表明：ddPCR方法检测CDV的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为55℃,升降温度为2.5℃/s,最低检测下限为4.4拷贝/μL;除CDV特异性扩增，其他常见病毒特异性检测结果均为阴性；重复性试验的变异系数均小于5%。采用该微滴数字PCR和荧光定量RT-PCR方法对30份犬、貂、狐、貉等组织(其中CDV阳性样品7份)样品进行检测，检测结果与临床检测结果相符。本研究建立的微滴数字PCR方法对CDV定量检测特异性强、灵敏度高，重复性好，可以用于水貂CDV临床样品的核酸检测，对水貂CDV发病早期的诊断提供新的定量检测方法。     

水貂肠炎细小病毒PCR检测方法的建立和应用

根据GenBank上已发表的水貂肠炎细小病毒基因序列,在其编码VP2结构蛋白基因的高度保守区内,设计合成1对特异性引物,建立水貂肠炎细小病毒PCR诊断方法。经过敏感性及特异性检测,该引物能与MEV标准株和地方分离株核酸发生特异性结合,扩增出一段长度为570bp的DNA片段,而与CDV、ADV等病毒的PCR反应均呈阴性。设计的该对引物可用于MEV的临床检测。     

北极狐白介素-18基因的克隆与序列分析

根据GenBank中登录的犬白介素-18（IL-18）基因序列,设计了1对特异性引物。将北极狐外周血淋巴细胞经植物血凝素（PHA）诱导,用TRIzol裂解,提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应（RT—PCR）扩增狐狸IL-18基因,连接pMD18-T载体,转化DH5d感受态细胞,获得阳性重组质粒。核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长590bp,含582bp的开放阅读框,编码193个氨基酸,与已知犬IL-18序列的同源性高达98．7％,氨基酸同源性为96．4％。     

生物反应器悬浮培养Vero细胞制备水貂犬瘟热活疫苗

为实现利用生物反应器制备规模化、自动化生产水貂犬瘟热Vero活疫苗,在7 L生物反应器中悬浮培养Vero细胞,并考察培养基、细胞初始接种密度、培养方式、病毒感染复数和感染时间等参数对细胞增殖、病毒滴度以及细胞代谢的影响。结果显示,在含有5 g/L微载体的DMEM培养基中接种Vero细胞(30～40 cells/球),设定p H、温度、溶氧值和转速分别为7.2、37℃、50%和55 r/min,培养方式为批次培养(0～48 h)+灌流培养(48～96 h)组合方式,培养Vero细胞3～4 d或细胞密度达到200 cells/球以上时,按照MOI=0.0001～0.001吸附接毒,调低温度(33℃)继续培养100～120 h,即可获得高滴度病毒液(10~(6.5)～10~(7.2)TCID_(50)/0.1 m L),经无菌检验合格后,配制水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV3-CL株,悬浮培养),疫苗符合《中国兽药典》三部(2015版)的规定。试验建立了7 L生物反应器悬浮培养Vero细胞制备水貂犬瘟热活疫苗的新工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。     

广州部分城区绿地系统结构分析

以广州市区的绿地系统为研究对象,在不同城区选取公园、广场、道路等不同绿地类型,对各样点的不同植物进行盖度、胸径、高度、间距、重要值、物种多样性指数、群落相似系数等数量参数的调查,从生态学和统计学的角度进行分析;发现广州市区的绿地生态系统群落结构还较简单,群落植物种类相对单一,分布也不够合理;在此基础上,对存在的问题提出改进的方法和措施,为广州的城市生态系统优化提供参考。       

果子狸细小病毒分离及VP2基因的进化分析

采用F81细胞从患有肠炎的果子狸粪便样品中分离出2株病毒,经形态学、血清学、生物学和病毒分子生物学鉴定分离的病毒为CPV突变株。对2株细小病毒VP2基因进行克隆和基因进化分析表明,2株病毒与肉食动物细小病毒有很高的同源性。属于CPV-2a突变株,分别命名为PV／PL/HeN02／08和PV／PL／HeN03／08。进一步分析表明,PV／PL/HeN03／08株接近于CPV-2a型毒株,仅在第297位氨基酸发生A→突变;PV／PL/HcN02／08株在第300位氨基酸发生G→A突变,第305位氨基酸发生Y→D突变,除第87位氨基酸外,该毒株更接近于CPV-2型毒株。     

饲喂水平对冬毛生长期北极狐能量、氮及气体代谢的影响

本试验旨在研究饲喂水平对冬毛生长期北极狐能量、氮及气体代谢的影响。选取36只161日龄、平均体重为(7285±6)g的健康雄性北极狐,随机分成4组,每组9个重复,每个重复1只。各组北极狐饲喂相同的饲粮,但饲喂水平分别为自由采食(Ⅰ组)、自由采食量的80%(Ⅱ组)、自由采食量的60%(Ⅲ组)和自由采食量的40%(Ⅳ组)。试验共分6期完成,每个饲喂水平进行3期,每期选取6只北极狐随机放到6个呼吸代谢室中,每个呼吸代谢室中放入1只北极狐。采用狐用呼吸测热装置完成消化代谢试验、呼吸测热试验和绝食代谢试验。试验从2017年10月2日开始至2017年12月14日结束。结果显示:1)随着饲喂水平的降低,摄入总能(GEI)、粪能(FE)、尿能(UE)、消化能(DE)、代谢能(ME)和净能(NE)均极显著降低(P<0.01),总能消化率(DE/GE)和总能代谢率(ME/GE)未发生显著变化(P>0.05),但消化能转化成代谢能的效率(ME/DE)和代谢能转化成净能的效率(NE/ME)显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);此外,饲粮净能摄入(NEI)显著降低(P<0.05),而饲粮消化能摄入(DEI)和代谢能摄入(MEI)无显著变化(P>0.05)。2)随着饲喂水平的降低,摄入氮(NI)、粪氮(FN)、尿氮(UN)、沉积氮(RN)、RN/NI和RN/消化氮(DN)均显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),而氮表观消化率未受饲喂水平的显著影响(P>0.05)。3)在呼吸测热试验中,Ⅲ组的呼吸商(RQ)极显著高于其他3组(P<0.01),Ⅱ组的O 2消耗量(VO 2)和CO 2产生量(VCO 2)显著高于其他3组(P<0.05);在绝食代谢试验中,饲喂水平对RQ、VO 2和VCO 2无显著影响(P>0.05)。由此得出,在本试验条件下,限饲显著降低了冬毛生长期北极狐各种有效能的摄入与利用及DE和ME的转化效率、氮的摄入与沉积;同时,适量限饲未显著降低冬毛生长期北极狐对氮的利用,且提高了营养物质氧化代谢的程度,增加了O 2消耗和CO 2排出;通过建立RN与NI的回归方程,推算冬毛生长期北极狐的维持净氮和净蛋白质需要量分别为676.3 mg/(kg BW 0.75·d)和4.227 g/(kg BW 0.75·d)。