肠毒素性大肠杆菌菌毛对产蛋鸡免疫性的研究

采用热抽提法提取4种肠毒素性大肠杆菌菌毛蛋白。K88、K99、F41和987p菌毛蛋白分别制成弗氏佐剂苗;K88还制成白油佐剂苗,氢氧化铝胶苗和蜂胶佐剂苗;另将4种菌毛等比例混合制成弗氏佐剂苗。分别对产蛋鸡进行免疫,用微量凝集反应和血凝抑制试验检测卵黄抗体效价。结果表明,K88菌毛较其他3种菌毛免疫性好,诱导抗体效价最高而且能长时间维持;987p菌毛能快速诱导抗体的产生,但整体效价低。K88不同佐剂苗中,铝胶佐剂能较快地诱导抗体的产生,蜂胶佐剂苗抗体持续时间短,弗氏佐剂能诱导高效价的抗体产生而且能长时间持续。     

适用于蛋鸡免疫的猪源ETEC菌毛蛋白佐剂的筛选

为筛选卵黄抗体的优良佐剂,以3株猪源致病性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白为模式抗原,分别与6种佐剂制备多价菌毛蛋白疫苗,免疫海兰褐壳蛋鸡。结果显示,3次免疫后,所有试验组蛋鸡产蛋率均有不同程度下降,但SPA、ISCOMs、弗氏佐剂、蜂胶佐剂组的产蛋率下降程度较为轻微;对鸡体血清抗体和制备获得的卵黄抗体的效价检测结果均显示:SPA和ISCOMs组虽较SPB、SPC、弗氏佐剂组抗体水平略低,但持久度较好,且通过对蛋鸡外观形态和注射部位组织变化情况的观察显示,两者不会刺激鸡体热反应或炎症反应,无任何表观副作用。因此,更适合作为蛋鸡制备猪源ETEC卵黄抗体的优良佐剂。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒不同佐剂灭活疫苗免疫BALB/c小鼠的比较试验

用血凝/血凝抑制试验（HA/HI）检测自制的猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）氢氧化铝胶灭活苗和蜂胶佐剂灭活苗免疫BALB/c小鼠后的抗体效价,依据小鼠抗体效价比较不同免疫佐剂的效果。结果表明,用氢氧化铝胶佐剂配制的疫苗可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、维持时间长,其效果优于其它佐剂,有望成为HEV灭活疫苗的候选佐剂。     

蛋鸡首免乙型脑炎病毒后卵黄抗体变化规律的研究

本试验旨在研究疫苗、免疫剂量和注射方式对卵黄抗体效价规律的影响,探讨制备抗猪乙型脑炎病毒卵黄抗体蛋鸡的最佳免疫程序。选用无免疫褐羽蛋鸡180只,随机分成18组,每组10只。1、2组均为对照组,注射无菌生理盐水;3~10组采用皮下和肌肉两种注射方式,并依次注射灭活苗0.2、0.5、1.0和1.5 mL;11~18组同样采取两种注射方式,依次免疫相同剂量弱毒苗。各试验组分别于免疫前1 d、免疫后第3、7、10、14、18、21和28天采集当日鸡蛋6枚,提取卵黄抗体,测定效价。试验结果显示,1~6、11、12组卵黄抗体效价均为0,未产生明显免疫应答;7~10组注射灭活苗后7 d,平均卵黄抗体效价达到峰值,抗体持续时间为14 d;13~18组注射弱毒苗后14 d达到最高值,抗体持续时间为21 d;注射剂量相同但注射方式不同的两组之间比较,卵黄抗体效价差异不显著（P>0.05）;相同注射方式,相同疫苗的各试验组间,随着免疫剂量的增加卵黄抗体效价逐渐加强,且差异显著（P<0.05）。以上结果表明,肌肉或皮下两种注射方式,蛋鸡产生明显免疫应答至少需要免疫灭活苗1.0 mL或弱毒苗0.5 mL。比较弱毒苗与灭活苗,灭活苗刺激机体产生的抗体速度较快,但维持时间较短;较少剂量弱毒苗就可刺激机体产生抗体,但速度慢、维持时间长。     

免疫蛋禽血清和卵黄禽流感抗体的相关性研究策

对免疫蛋禽血清和卵黄中的H5亚型高致病性禽流感抗体进行监测,比较血清和卵黄中HI效价的差异并找出其相关性.试验结果表明,蛋鸡和蛋鸭接种H5亚型高致病性禽流感疫苗后,在抗体的上升期,血清和卵黄HI效价差异显著或极显著(0.01＜P＜0.05,P＜0.01);而在抗体稳定期,血清和卵黄HI效价差异不显著(P＞0.05).在抗体稳定期,血清和卵黄抗体水平之间的相关系数都在0.85以上,(0.66＜r＜1.00),呈强直线相关.试验证明,无论是蛋鸡还是蛋鸭在抗体稳定期内均可以使用卵黄替代血清进行HI抗体监测.     

鸡抗大肠杆菌血清抗体和卵黄抗体变化规律研究

用猪源大肠杆菌四价(K88、K99、987P、F41)灭活疫苗免疫蛋鸡,微量凝集法定期检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体的效价。结果表明,血清抗体比卵黄抗体出现早,免疫蛋鸡血清中和卵黄中4种抗体的消长规律基本相似,但不同抗体水平之间存在明显的差异,整个试验期间血清抗体水平均比卵黄抗体水平高。     

牛支原体P48蛋白卵黄抗体的制备

为了研究牛支原体P48抗原蛋白的免疫学功能及相应卵黄抗体的生物学特性,探究其抗体效价随免疫时间的变化规律,试验采用牛支原体P48蛋白疫苗免疫健康产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋,用水稀释法结合硫酸铵盐析法制备特异性卵黄抗体,利用间接ELISA法检测血清抗体(IgG)和卵黄抗体(IgY)效价。结果表明,低、中、高剂量组均能诱导蛋鸡产生有效免疫应答,血清抗体效价与卵黄抗体效价的变化趋势基本一致,但卵黄抗体的产生滞后于血清抗体,在首次免疫后8~10周Ig Y效价达到峰值,其中中剂量组的免疫效价最高,最高效价为1:212。经SDS-PAGE检测,制备所得的纯度达86%以上,得率在8.6 mg/m L以上。说明采用牛支原体P48蛋白免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度的抗牛支原体P48蛋白卵黄抗体,从而为卵黄抗体在牛支原体的检测与防控方面的研究奠定了基础。     

鸡新城疫血清抗体和卵黄抗体效价比较研究

蛋鸡进行鸡新城疫疫苗免疫接种后,体内B细胞通过对抗原的识别、活化、增殖,最后分化成浆细胞并分泌抗体,产生的抗体进入血液后,血液中的抗体能从输卵管上皮层分泌滤泡分泌到卵黄内。免疫蛋鸡后采血测定血清中抗体效价或制备血清抗体过程中,抓鸡采血时经常造成惊吓而引起产蛋率降低,因而人们想到能否用卵黄抗体代替血清抗体进行上述工作。本研究的目的是对免疫后的蛋鸡血清抗体和卵黄抗体进行测定比较,看两者之间的差异程度     

猪圆环病毒2型灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

以猪圆环病毒2型(PCV2)遗传标记毒株为毒种,经细胞培养传代,优化了病毒增殖条件,获得较高滴度的病毒培养物用于PCV2灭活疫苗的研制。为了比较不同免疫佐剂的效果,本试验对国产矿物质白油和铝胶两种佐剂以及赛比克公司提供的MONTANIDETMISA206、ISA15VG、IMS1315VG3种佐剂配制的灭活疫苗进行了猪体免疫试验。通过临床观察、血清抗体效价测定,确认ISA15VG佐剂配制的疫苗在增强免疫效果方面优于其它佐剂。按5种佐剂免疫效果排序为ISA15VG、IMS1315VG、铝胶、ISA206、国产白油。ISA15VG佐剂属于水包油剂型,可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、持续时间长,有可能成为新型PCV2灭活疫苗佐剂的候选。     

纳米氢氧化铝吸附禽流感病毒灭活疫苗的研制及其对肉鸡抗体效价的影响

自制纳米氢氧化铝佐剂,通过吸附H5N1灭活抗原,制备了纳米铝佐剂疫苗,按照中华人民共和国农业行业高致病性禽流感免疫技术规范标准,免疫肉鸡。经检测发现纳米铝佐剂疫苗组肉鸡产生有效保护抗体时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前3d和7d,抗体峰值达到时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前14d。结果表明,纳米氢氧化铝作为高致病性禽流感H5N1的免疫佐剂,可以更早的刺激动物产生有效保护抗体,纳米铝佐剂禽流感疫苗具有广泛的应用价值。     

中药黄芪多糖的免疫佐剂作用

分别将黄芪多糖提取物、白油-吐温、氢氧化铝作为佐剂制备金黄色葡萄球菌灭活苗混合免疫家兔和奶牛,观察家兔免疫前后血清抗体滴度变化以及攻毒后白细胞数目变化和淋巴细胞百分比变化。对奶牛免疫后测其血清抗体和乳汁中体细胞数变化,结果注射疫苗后乳汁中体细胞数都有所下降,黄芪多糖组较其它组下降较快,幅度较大。黄芪多糖和抗原混合物免疫动物后未见不良反应,且抗原免疫血清抗体比氢氧化铝和白油-吐温佐剂组的抗体滴度增加快,幅度显著增高且抗体维持一个较高水平,而攻毒后家兔白细胞数和淋巴细胞数也较氢氧化铝和白油-吐温佐剂组增加较多。因此黄芪多糖是一种有效的佐剂。     

产蛋鸡抗大肠杆菌F4菌毛的血清抗体和卵黄抗体消长规律的研究

从浙江省10多个规模化猪场采集仔猪断奶腹泻病料,分离致病性大肠杆菌。血清学和PCR方法鉴定菌毛型主要为F4和F18。挑取1株致病性和菌毛表达较强的F4阳性菌株,接种改良M inca培养基培养,热抽提法分离菌毛并纯化菌毛蛋白。将50只蛋鸡随机分5组,分别肌注1 mL免疫原/只:A组菌毛蛋白(250μg/只),B、C和D组菌毛蛋白(250,50,10μg/只) 弗氏佐剂,E组为空白对照。21 d加强免疫。定期采血分离血清,水稀释法和饱和硫酸铵盐析法分离卵黄抗体。ELISA法检测血清和卵黄抗体效价。结果表明,F4菌毛蛋白具有良好的免疫原性:在弗氏佐剂的辅助下,二免后21 d抗体效价达最高峰,血清和卵黄抗体效价分别为4.7 lg和4.4 lg,二免后56 d血清和卵黄抗体效价仍维持在4.0 lg;另外二免后21 d,10μg/只免疫剂量与50μg/只及250μg/只相比,诱导产生的卵黄抗体效价之间差异不显著(P>0.05)。     

鸡新城疫减蛋综合征和大肠杆菌病三联油佐剂苗免疫试验

应用鸡新城疫（ＮＤ）、减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）、大肠杆菌病三联油佐剂灭活苗进行田间免疫试验，结果表明该三联苗免疫鸡不仅抗体水平高，而且免疫持续时间长，具有与单苗同样的免疫效果。被检血清中ＮＤ抗体ＨＩ平均效价比卵黄高１￣２个滴度；血清与卵黄中ＥＤＳ－７６抗体ＨＩ平均效价基本相同（Ｐ〉０．０５），可用卵黄代替血清作为血清学检验材料。卵黄中未检出大肠杆菌凝集抗体。     

蛋鸡H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫血清抗体与卵黄抗体检测比较分析

为分析蛋鸡免疫后卵黄抗体与血清抗体的相关性,试验采集经H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫的黔东南小香鸡、乌蒙乌骨鸡、威宁鸡血清样本和卵黄样本,采用血凝抑制试验进行相关免疫抗体检测。结果:3个地方品种鸡的血清样本和卵黄样本中均可检测出H5、H9亚型禽流感和新城疫免疫抗体,且几何平均效价均大于24以上,达到免疫合格标准,不同地方品种鸡群间差异不显著(P>0.05);免疫后30d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,但差异不显著(P>0.05);免疫后60d,卵黄样本免疫抗体几何平均效价低于血清样本,差异显著(P<0.05)。结果表明:卵黄抗体与血清抗体呈正相关性,卵黄抗体几何平均效价均低于血清抗体。在临床上可用卵黄抗体替代血清抗体进行H5、H9亚型禽流感和新城疫疫苗免疫效果的评价,但应选择在免疫后30d以内。     

不同白油佐剂制备的H9N2灭活疫苗在SPF鸡上的免疫效果初试验

为了比较不同厂家的注射用矿物白油佐剂的免疫效果,试验采用3个不同黏度的国外白油样品,按照《中华人民共和国兽药典》进行注射用白油质量检验、制备3批H9N2油乳剂灭活疫苗,分别以0.3ml/只剂量,胸部肌肉注射接种28日龄SPF鸡,接种后14d、21d、28d、35d、42d分别进行疫苗的药物残留吸收检查和血清抗体效价检测。结果表明:3种佐剂疫苗的安全性、稳定性均良好;应用WG40白油佐剂的灭活疫苗,免疫SPF鸡产生的H9N2禽流感HI抗体水平优于其它两种佐剂,免疫3周后检测到的H9N2禽流感抗体水平均合格,WG40确定为最佳白油佐剂。     

不同白油佐剂制备的H_9N_2灭活疫苗在SPF鸡上的免疫效果初试验

为了比较不同厂家的注射用矿物白油佐剂的免疫效果,试验采用3个不同粘度的国外白油样品,按照《中华人民共和国兽药典》进行注射用白油质量检验、制备3批H_9N_2油乳剂灭活疫苗,分别以0.3ml/只剂量,胸部肌肉注射接种28日龄SPF鸡,接种后14、21、28、35、42d分别进行疫苗的药物残留吸收检查和血清抗体效价检测。结果表明:3种佐剂疫苗的安全性、稳定性均良好;应用WG40白油佐剂的灭活疫苗,免疫SPF鸡产生的H_9N_2禽流感HI抗体水平优于其它两种佐剂,免疫3周后检测到的H_9N_2禽流感抗体水平均合格,确定WG40为最佳白油佐剂。     

间接ELISA检测猪链球菌病二联灭活疫苗抗体动态变化

为了评价猪链球菌病二联灭活苗的免疫效果,建立了检测该疫苗抗体的间接ELISA方法。以HRPSPA（酶标葡萄球菌蛋白A）作为第二抗体,疫苗菌株超声波破碎抗原为包被抗原。试验证明所建立的间接ELISA特异性好．比琼扩试验敏感200倍。用此方法检测了氢氧化铝胶、蜂胶、矿物油三种佐剂疫苗的抗体消长情况,铝胶苗抗体产生的时间比较早,抗体水平比较高,4～5周达到高峰,随后开始下降,二免后抗体水平迅速回升,120d时仍保持较高的效价（1：1000）;蜂胶苗和油佐剂苗抗体上升比较舒缓,持续时间长,7周后还能维持一定的抗体水平（1：400）。     

人参茎叶皂甙对口蹄疫病毒灭活疫苗免疫后抗体产生的影响

分别用人参茎叶皂甙(GSL)、白油或两者混合物作为免疫佐剂,与Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)灭活疫苗混合免疫小鼠,检测免疫后的血清特异性抗体水平.结果表明,GSL具有佐剂作用,能显著促进机体产生抗FMDV抗体的水平,其佐剂作用呈量效关系.当GSL和白油混合形成复合佐剂时,具有组合效应,能产生比2种佐剂单独应用时更强的抗体效价;且GSL和白油混合产生的组合效应主要促进IgG2a和IgG2b的产生.     

使用不同佐剂去势疫苗免疫效果的比较

分别应用明矾、氢氧化铝和弗氏佐剂的去势疫苗免疫 SD大鼠 ,检测大鼠 LHRH抗体效价、睾酮水平、观察睾丸肉眼及组织学变化 ,以及精子数量、畸形率的变化 ,确定去势疫苗的效果。结果表明明矾、氢氧化铝和弗氏佐剂组均能够较好的诱导大鼠产生 L HRH抗体 ,引起睾酮明显降低。三个免疫组与阴性对照组相比 ,都能使大鼠明显增重 ,并起到萎缩性腺的作用     

“兔瘟”疫苗中不同佐剂对免疫效果的影响

利用“兔瘟”病毒枣(?)毒株(RVZ85)制备的不含佐剂疫苗,甘油佐剂疫苗、氢氧化铝佐剂疫苗和矿物油佐剂疫苗免疫接种易感家兔,定期测 HI 抗体效价并进行人工攻毒试验.结果证明,不含佐剂的疫苗产生的保护力最早,免疫后三天即4/4保护.用四种疫苗免疫接种后一年内,对攻毒的保护率均为100%.四种疫苗中,以矿物油佐剂疫苗免疫兔的HI抗体效价最高,氢氧化铝佐剂疫苗次之,甘油佐剂疫苗及不含佐剂疫苗的HI效价较低。氢氧化铝佐剂疫苗在室温保存8.5个月,免疫兔4/4保护;室温保存14个月.免疫兔2/3保护:4℃保存14个月,免疫兔4/4保护.