斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Dot─ELISA诊断法的建立及应用

以醋酸纤维素膜作为固相载体，辣根过氧化物酶标记鸡抗传染性法氏囊病病毒抗体（ＩＢＤ—ＩｇＧ），饱和二氨基联苯胺为底物显色，建立了鸡传染性法氏囊病双抗体夹心Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ诊断法。经方阵实验确定最佳反应条件为：ＩｇＧ的包被液为０．０５ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ９．６）碳酸盐缓冲液，包被浓度为１：５０；酶标抗体的工作浓度为１：１００；洗涤液为含０．０５％吐温—８０的０．０２ｍｏｌ／Ｌ（ｐＨ７．４）磷酸盐缓冲液；封闭液为含０．２％明胶的洗涤液；封闭时间、抗原及酶标抗体的作用时间均为３７℃３０ｍｉｎ。应用本方法和琼扩试验同步检测２０份已知阳性病料、１２０份待检病料和胚毒尿囊液、１０份正常鸡样品，结果表明，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性率为９０％，而琼扩试验为４０％；凡琼扩试验阳性者，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ均呈强阳性，而在Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ阳性样品中，只有４４％呈琼扩试验阳性，Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ的敏感度为琼扩试验的１００倍。     

间接法Dot－ELISA检测传染性法氏囊病病毒的研究

本文应用间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ进行鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗原的检测，其最低检出量为０．４３μｇ／ｍｌ。对人工感染／自然病例的各组织脏器进行检测，结果法氏囊的ＩＢＤＶ检出率为１００％，脾脏的检出率为８０％／８４．９％，其它器官组织如肾、胸腺、心、肝、肺、盲肠扁桃体、胸肌等均含有一定量的病毒（１１～６０％）。经统计学分析，法氏囊与脾脏的病毒检出率之间具有显著性差异（人工感染差异极显著Ｐ＜０．０１，自然病例差异显著Ｐ＜０．０５），进一步证实法氏囊是ＩＢＤＶ最主要的靶器官。试验结果表明，该法检测ＩＢＤＶ抗原，敏感性高、特异性强、重复性好，并且经济、方便、快速，适于大批量样品检测，可作为一种诊断ＩＢＤ的比较理想的方法。     

抗鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体中和株的建立

将纯化的鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）组织毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，用ＥＬＩＳＡ，病毒中和试验检测分泌抗体，获得了６株稳定分泌抗ＩＢＤＶ单隆抗体的杂交瘤细胞，命名为ＮＩＢ－１，ＮＩＢ－２，ＮＩＢ－３，ＮＩＢ－４，ＮＩＢ－５，ＮＩＢ－６；６株ＭＣＡｂ均具ＥＬＩＳＡ特性和免疫沉淀特性，亚类鉴定表明，前４株属于ＩｇＧ２ａ，后２株属于ＩｇＧ１。杂交瘤细胞冻存６个月后复苏，均     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎抗体的间接ＥＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１：８０，酶结合物，抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母原抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。     

单抗介导的斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

用群特异性的单克隆抗体作第一抗体,用酶标兔抗体ＩＢＶＩｇＧ作第二抗体,建立夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测鸡传染性支气管炎病毒抗原。试验表明,本程序检测ＩＢＶ抗原高度敏感性和特异性。最低抗原检出量为０．５μｇ,约１００个气管环半数感染量（１００ＴＯＣＩＤ５０）,阳性检出率为９６％。     

间接酶联免疫吸附试验检测禽流感抗体的最佳工作条件

禽流感病毒（ＡＩＶ）感染的鸡胚尿囊液经差速离心后,再经蔗糖密度梯度离心,提纯ＡＩＶ,纯化的ＡＩＶ经ＮＰ４０处理并反复冻融,即为ＡＩＥＬＩＳＡ抗原,用该抗原包被聚苯乙烯微量反应板。将健康鸡ＩｇＧ提纯后免疫兔,制备兔抗鸡ＩｇＧ,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡ＩｇＧ。确立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测禽流感抗体的最适工作条件,即：抗原包被浓度１．９～３．８μｇ／ｍｌ,每孔１００μｌ,４℃冰箱过夜;用含０．５％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的磷酸盐缓冲液,３７℃封闭６０分钟;待检血清最佳稀释度为１８０～１６４０,作用６０分钟;酶标抗体作１２０００稀释,作用６０分钟。根据对５２份ＳＰＦ鸡血清的检测结果制定了判定标准。     

鸡传染性腔上囊病病毒的提纯和检测

在人工感染ＩＢＤＶ鸡的腔上囊组织液中加入氯仿，经４０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，除去腔上囊组织蛋白，然后用硫酸铵沉淀病毒。提纯后的病毒颗粒直径为６０ｍｎ左右，无囊膜。用紫外分光度计测定，病毒蛋白含量为４．０ｍｇ／ｍＬ；用琼脂扩散试验检测，其效价为１：１６；用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ诊断盒检测，其效价为１：３２０。