禽流感（AIV）的实验室检测方法

1 病原学检测 将病料以尿囊腔途径接种于9～11日龄的SPF鸡胚．收集死亡鸡胚尿囊液，将收获的鸡胚尿囊液进行血凝价检测，当血凝滴度达1：16以上时，确定病毒分离为阳性。若初次传代获得的尿囊液未检测到血凝性，需再盲传2代。若仍未检测到血凝性则认为病毒分离阴性。     

鸡胚中沉积的尿酸盐对血凝试验的影响

在新城疫La Sota半成品检验过程中,发现接种后培养120 h的活胚,经过-20℃低温速冻1 h,有的鸡胚尿囊液中有尿酸盐产生,且出现的几率比较大,而经过2~8℃低温冷冻24 h的鸡胚,产生白色尿酸盐的几率相对小一些。凡是有尿酸盐产生的鸡胚,均没有血凝现象产生。但用含有尿酸盐的尿囊液接种鸡胚,继续增殖,会有病毒大量复制,试验说明有新城疫病毒存在的尿囊液中,若有尿酸盐沉淀,则血凝现象会被遮盖。     

金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明金银花抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药3种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在3种不同的加药方式中,不同浓度的金银花提取液均能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,其作用效果与提取液浓度呈正比例相关。结果表明,金银花提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;金银花提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

鹅副黏病毒甘肃地方毒株的分离和初步鉴定

鹅副黏病毒病是一种由鹅传播的新型急性传染病,该病与鸡感染新城疫具有相类似的临床症状和病理变化。2019年1月从甘肃某鹅场病鹅体内分离到一株副黏病毒,将病料处理后接种10日龄鸡胚,进行血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI),最后进行动物试验。结果表明:该病毒具有血凝活性,可以用标准的新城疫阳性血清抑制血凝活性,可能导致未接种新城疫免疫鸡胚的100%死亡。动物试验证明该病毒对鸡具有100%的发病率和致死率。     

鸡传染性支气管炎和鸡新城疫混合感染的诊断

某养鸡场28~43日龄的肉鸡临床出现呼吸道症状,通过鸡胚接种、血凝及血凝抑制试验,进行实验室病毒分离鉴定,本病确诊为鸡传染性支气管炎(IB)和鸡新城疫(ND)混合感染。对混有IB病毒和ND病毒的鸡胚尿囊液进行酸处理,去除ND病毒,获得纯IB病毒。分离的传染性支气管炎毒株,体外和体内试验表明该传染性支气管炎病毒株对鸡新城疫病分离毒株的血凝性有强的干扰作用,对鸡新城疫的疫苗Lasota株干扰作用不明显。     

中药蟾甘口服液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药蟾甘口服液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药蟾甘口服液混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度5log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药蟾甘口服液对鸡胚无毒性作用。中药蟾甘口服液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

中药金丝桃素注射液对鸡新城疫病毒抑制作用研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药金丝桃素注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药金丝桃素混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度5log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药金丝桃素注射液对鸡胚无毒性作用。中药金丝桃素与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

2017年盐田区禽流感预警监测结果与分析

一、样品采集与检测项目共进行了4次检测样品采集,共采集鸡喉拭子109份分别进行禽流感病毒分离,具体情况见表1。二、检测内容及结果将鸡喉拭子样品做10000xg,4℃,15min离心处理,经0.45μm过滤器过滤除菌,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚,3枚/份,0.1ml/枚,置37℃孵化机孵化。弃24h内死亡的鸡胚,收集并检测24h至72h的鸡胚尿囊液,进行血凝试验(HA),对HA价达2log以上胚液,分别用H5亚型禽流感HI标准血清、H7亚型禽流感HI标准血清、H9亚型禽流感HI标准血清进行血凝抑制试验(HI)。对HA检测阳性样品鸡胚尿囊液进行RNA抽提,经禽流感(H5、H7、H9)特异性引物进行RT-PCR扩增,检测结果具体情况见表2。     

新城疫病毒LaSota株在鸡胚中的繁殖动态

用新城疫病毒（ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ株尿囊腔接种１０日龄非免疫鸡胚，以血凝（ＨＡ）试验检测接种后２４、４８、７２、９６，１２０、１４４和１６８小时所收集的鸡胚液（尿囊液和羊水）、胚体、尿囊膜的ＨＡ价。结果表明，在上述时间内，胚体、尿囊膜的含毒量很低，无收获价值；病毒在鸡胚液中自接种后２４小时繁殖呈线性上升，至１２０小时，胚液中含毒量最高，以后则下降，故此时是收获的最佳时间。     

一起猪无名高热综合征病例的病原分离鉴定

某猪场发生以体温升高为特征的病例。笔者对其送检的内脏样本进行了病原学检测和病原的分离与鉴定,结果从其内脏样本中检测和分离到多种病原。从其内脏组织中分离到2株细菌,通过细菌学方法鉴定,一株为副猪嗜血杆菌,另一株为猪链球菌;将送检样本接种到Marc 145细胞,能观察到细胞病变,收获的病毒液经PCR检测,为蓝耳病病毒阳性;将送检的样本接种SPF鸡胚,收获的鸡胚尿囊液有血凝性,血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）鉴定为猪副黏病毒。     

中药泽漆注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药泽漆注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用.试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药泽漆混合液,HA滴度为0;第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度为4loga;第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度为8log2;第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度为0.结果表明,中药泽漆注射液对鸡胚无毒性作用.中药泽漆与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖.     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

中药蟾酥注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒的试验研究

采用鸡胚培养法和血凝抑制试验，测定了2种中药配方对新城疫病毒的抑制作用。试验共5组，第1组接种病毒尿囊液与中药1号混合液，HA滴度0。第2组接种病毒尿囊液与中药2号混合液，HA滴度2 log2。第3组接种病毒尿囊液与金刚烷胺，HA滴度2 log2。第4组接种病毒尿囊液与生理盐水，HA滴度7.5log2。第5组不接种病毒尿囊液，不用药，HA滴度0。结果表明，中药1号配方好于2号配方，中药2号配方与金刚烷胺效果相同。     

中药炎康注射液对伪狂犬病病毒的抑制试验

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药炎康注射液对伪狂犬病病毒的抑制作用。试验共分4组:第Ⅰ组同时接种病毒尿囊液与中药炎康混合液,HA滴度为0。第Ⅱ组同时接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度为4 log2。第Ⅲ组同时接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度为7 log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度为0。结果表明,中药炎康注射液对鸡胚无毒性作用;中药炎康与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制伪狂犬病病毒在鸡胚中增殖。     

鸽新城疫病毒在鸡胚中的生长规律

目前,国内用于ND免疫预防的主要措施是以鸡胚作为病毒繁殖的载体,收集尿囊液,经灭活制成不同佐剂的灭活疫苗。为了探索ND在鸡胚中的生长规律,笔者采用ND接种9日龄鸡胚,以HA检测不同时间的胚体、卵黄、尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中ND的血凝效价,从而掌握ND在鸡胚内的生长规律。1材料与方法1.1材料1.1.1鸡蛋来源于非疫区的非免疫区的非免疫鸡场。1.1.2鸽新城疫种毒种毒为自行分离,经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定确认为ND。1.1.3红细胞采自20周龄健康非免疫的伊沙蛋用公鸡,由本所提供。1.2方法1.2.1病毒的接种将种毒作1∶100稀释…     

鸡新城疫及其在某鸡场鸡群发病样本的实验室检查

新城疫是一种高度接触性传染病，鸡、火鸡、野鸡易感，经呼吸道和消化道传播，病原为新城疫病毒，以发病急、呼吸困难、头冠紫黑、下痢等为主要症状，分为最急性、急性或慢性三型，病理变化为腺胃和肌胃交界处出血，扁桃体肿大、溃汤等为主，通过血凝试验、血凝抑制试验等进行诊断，可通过抓好饲养管理、防疫、加强新城疫抗体的监测进行防制。2013年2月10日沛县魏庙镇某鸡场饲养的罗曼蛋鸡疑似发生新城疫，通过采集部分病死鸡的气管、肺、脑等组织，用含特定抗生素的磷酸盐缓冲液（PBS）制成10%的组织悬液，离心取上清液接种5枚10日龄SPF鸡胚，接种胚于接种后48~72小时之间死亡，胚体全身出血。收获尿囊液，通过血凝试验与血凝抑制试验进行病毒鉴定，确定分离到的病毒为新城疫病毒，根据以上结果确诊该鸡群发生新城疫。     

猪源新城疫病毒的分离鉴定

从发生呼吸道症状的病猪鼻腔中分离到1株病毒，经电镜观察、血凝和血凝抑制试验，确定为新城疫病毒。经对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、对鸭胚和鸡、鸭的致死性测定及荧光PCR检测，证明分离毒为温和型毒株。     

中药"金不换"注射液在鸡胚中对鸡新城疫病毒的抑制试验

用鸡胚培养法和红血球凝集（HA）试验,测定中药“金不换”注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验共分4组,第Ⅰ组接种病毒尿囊液与中药金不换混合液,HA滴度0。第Ⅱ组接种病毒尿囊液与西药金刚烷胺混合液,HA滴度3log2。第Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9log2。第Ⅳ组不接种病毒尿囊液,不给药,HA滴度0。结果表明,中药“金不换”注射液对鸡胚无毒性作用,与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

四种消毒剂对鸡新城疫病毒杀灭效果的比较

应用血凝试验检测中日合资爱丽丝畜牧有限公司送检的四种５％的消毒剂对鸡新城疫病毒的杀灭效果。经过消毒剂对鸡胚致死性实验和ＮＤＶ城鸡胚中使用浓度的选择实验,确定将消毒剂分别做１：２５０,１：５００,１：１０００,１：２０００稀释后,与１：５００的ＤＮＶ等量混合,在体外作用不同时间后,接种鸡胚尿囊腔内培养７２ｈ,以收取的鸡胚尿囊液血凝价为指标,判断四种消毒剂对ＮＤＶ的杀灭效果。结果表明Ⅲ,Ⅵ号消毒剂对Ｎ     

鸡减蛋综合征病毒血凝特性和在鸭胚中繁殖规律的研究

EDS病毒CH—1分离株能凝集鸡、鸭和鹅等禽类的红细胞,但不能凝集兔、小白鼠和人O型血红细胞。该病毒的血凝特性对缓冲液种类和浓度无严格要求。可耐受56℃24小时,但80℃作用30分钟,则几乎完全丧失血凝活性。1.0％胰酶和0.5％β—巯基乙醇对病毒血凝活性无明显影响,用0.1～0.4％甲醛37℃作用24小时血凝活性无变化,而0.5～1.0％甲醛处理后,病毒血凝价下降4～7个滴度。病毒反复冻融6次对血凝特性无影响。EDS病毒接种10日龄鸭胚后24小时就可检测到病毒的血凝滴度(2~(3.2))、96～120小时病毒在鸭胚液中的血凝滴度达到高峰(HA>2~(14)),此时胚液量也最大。病毒在鸭胚尿囊液和尿囊膜中的血凝滴度最高,其次是羊水,胚体中血凝滴度最低。