从腹泻猪粪便中首次发现呼肠孤Ⅱ型病毒

近日,日本学者从3头患有腹泻和2头健康的3月龄猪粪便中分离到呼肠孤病毒株OS-320至OS-324,通过交叉中和试验,把分离物分类为呼肠孤病毒Ⅱ型。血凝试验表明,分离物与其它的呼肠孤病     

从腹泻病犬分离出呼肠病毒3型

从用腹泻犬粪样接种的犬原代肾细胞培养中分离出的３株病毒，经理化特性鉴定为呼肠病毒，以呼肠病毒标准株进行血凝抑制和中和试验发现它们具有呼肠病毒３型的抗原特性，因此认为腹泻犬的分离呼肠病毒。     

禽呼肠孤病毒鸡源分离株的鉴定与人工感染试验

从临床患病鸡关节病料中分离到一株病毒，在电镜下观察到病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，外衣壳直径约75nm，内核约50nm；分离病毒株对酸、热有较强的抵抗力，对乙醚不敏感；病毒感染鸡胚成纤维细胞上能产生以融合细胞为特征的CPE；爪垫接种1日龄雏鸡表现出明显的病毒性关节炎临床症状，并伴有吸收障碍型和坏死型的病理变化；血清中和交叉试验表明，该病毒分离株与国内的2株番鸭源呼肠孤病毒（YH和YB）分离株和国外S1133呈不同程度的交叉反应。通过对分离病毒株进行电镜观察、理化特性试验、病毒感染力测定、致病性试验、血清学试验，可以确定该分离病毒为禽呼肠孤病毒。     

犬呼肠孤病毒3型（AMMS株）的分离与鉴定

从 １ 只临床表现呼吸道症状的濒死病犬肺脏分离到 １ 株病毒,经理化特性、血凝性、核酸型、血凝抑制试验和电镜观察,鉴定为犬呼肠孤病毒 ３ 型。这是国内首次分离到此病毒。     

牦牛源正呼肠孤病毒2型的检测和分离鉴定

旨在调查川西北牦牛哺乳动物正呼肠孤病毒（MRV）的感染情况并分离病毒。采用RT-PCR方法，对采自川西北15个牧场的72份牦牛腹泻粪便样本和其中5个牧场的15份腹泻牦牛血清样本进行MRV检测，阳性样本进一步用分型PCR确定其血清型。结果显示，粪便样本中MRV检出率为20.83%（15/72），血清2型的比例为60%（9/15）；血清样本中MRV检出率为40%（6/15），血清2型的比例为83.33%（5/6）；未检测到其他血清型。成功地从腹泻粪便中分离到1株MRV血清2型毒株（TCID₅₀为4×10^-8.56·mL^-1），并获得长度为23 587 bp的分离株全基因组，该分离株与中国猪源毒株的遗传关系最近；与GenBank中所有的MRV S1基因相比，该分离株有4个独特的氨基酸突变。本研究从牦牛中检测到MRV，并分离到1株牛源MRV血清2型毒株，为进一步研究MRV血清2型生物学特性奠定了基础。     

一株雏鹅呼肠孤病毒的分离与鉴定

2013年福建省某鹅场发生一起以肝脏和脾脏均有灰白坏死点(肝白点)为典型病变特征的急性传染病。本研究利用10日龄非免疫番鸭胚,从病死雏鹅肝脏中分离到1株病毒。病毒分离株没有血凝活性,其ELD50为10-3.25/0.2 m L,可被鹅呼肠孤病毒高免血清特异性中和。利用鹅呼肠孤病毒特异性检测引物对FJ-06株病毒尿囊液进行RT-PCR检测,可扩增到约572 bp特异性目的条带。将RT-PCR产物进行克隆测序,Blast分析表明,克隆的基因片段为鹅呼肠孤病毒δC蛋白基因片段。结果表明成功分离到1株鹅呼肠孤病毒。     

一株肉鸡呼肠孤病毒变异株的分离鉴定

旨在研究肉鸡呼肠孤病毒分离株致病与基因组变异情况。2017年从山东潍坊地区跗关节肿胀、出血严重商品肉鸡中收集病料,进行病毒分离,通过RT-PCR检测、电镜观察对病毒进行鉴定;将分离到的病毒回归商品肉鸡;设计18对引物对分离株全基因组扩增测序,并进行了遗传进化分析;将分离毒株与经典毒株S1133进行血清交叉中和试验。结果表明分离到一株禽呼肠孤病毒(命名为WF17),回归商品肉鸡能完全复制出临床症状,并能从试验鸡中重新分离到该病毒。该分离株基因组完全符合禽呼肠孤病毒基因组结构特点,主要抗原σC蛋白基因与台湾918株最接近,相似性为92.7%,与S1133株的相似性只有55.9%。WF17株与S1133株的抗原相关指数(R值)只有0.19。目前以S1133株为主的商品化疫苗无法对禽呼肠孤病毒变异株产生有效保护。     

从腹泻病狗中分离到Ⅲ型呼肠孤病毒

从腹泻病狗中分离到Ⅲ型呼肠孤病毒狗普遍发生呼肠孤病毒感染已得到兽医血清学的证明。１９６３年Ｌｏｕ和Ｗｅｎｎｅｒ从患呼吸道疾病狗的肺中分离到Ⅰ型呼肠孤病毒，他们用分离物注射狗产生了轻度的呼吸道疾病。此后又相继报道了从呼吸道和粪便中分离出呼肠孤Ⅰ型和Ⅱ型...     

四川省美姑县羊蓝舌病病原分离鉴定

对采自四川省美姑县的疑似蓝舌绵羊、山羊血清１４份,全血１３份,进行蓝舌病抗原、抗体检测和病毒分离鉴定。结果在１０份血清样品中检测到蓝舌病抗体,在１３份全血样品中分离到２株病毒,经蓝舌病病毒群、血清型鉴定,分离毒株的血清型为ＢＴＶ－１型。     

鸡呼肠孤病毒分离与鉴定

从广西玉林市某鸡场出现跛行、瘫痪、跗趾关节和腱肿胀等症状的不同发病鸡群中分离到两株病毒。经病毒分离培养、理化特性鉴定、血清中和试验、动物回归试验、抗体检测以及PCR诊断,确定所分离到的两个病毒株为禽呼肠孤病毒。     

一株鹅源呼肠孤病毒的分离与鉴定

一株从雏鹅肝脾脏病料中分离到的病毒，在电镜下观察到病毒粒子呈球形，无囊膜，有可见的双层衣壳结构，外壳直径75nm，内核直径50nm；经病毒分离培养、理化特性鉴定、动物回归试验、抗体检测，确定所分离到的毒株为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属鹅呼肠孤病毒。     

从患生殖——呼吸道综合征病猪分离出猪呼吸道冠状病毒

采集３／１５头猪生殖－－呼吸道综合征病毒患猪的扁桃体和肺脏，在猪肾细胞（ＣＰＫ）上分离出４株致细胞病变的病毒。分离毒在生化学和形态学上类似于冠状病毒。用于多克隆抗体的中和试验，分离毒与传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）不能鉴别，而用能鉴别ＴＧＥＶ和猪呼吸道冠状病毒（ＰＲＣＶ）的单克隆抗体，则可与ＴＧＥＶ相区别。这表明此分离毒是ＰＲＣＶ。从２个猪场５０日龄猪中各采集３０份血清样品，用血清学方法检测，抗分离     

雏半番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

自以肝脏、脾脏、胰腺、肾脏表面出现多量针尖大的白色坏死点和法氏囊出血为特征的病死雏半番鸭脏器中 ,以番鸭胚分离到病毒 ,经对分离的病毒株 (FZ2 株 )进行形态学观察、理化特性测定以及血清定性中和试验等 ,发现该病毒无囊膜 ,直径为 5 5～ 70 nm;对氯仿处理敏感 ,对乙醚处理不敏感 ;无血凝活性 ;可被鸡关节炎病毒阳性血清、雏番鸭呼肠孤病毒阳性血清所中和 ,但与鸡传染性法氏囊病病毒、鸡减蛋综合征病毒无血清学关系。据此 ,确定 FZ2 株病毒为呼肠孤病毒     

伪狂犬病病毒Qihe547分离株主要保护性抗原基因序列的变异分析

2012年以来伪狂犬病(PR)在全国多省份暴发。为了解流行PR病毒(PRV)主要保护性抗原基因的变异情况,本研究从山东齐河地区经PRV Bartha-K61疫苗株免疫猪群中分离到一株PRV命名为Qihe547株,并采用PCR方法对该病毒分离株编码主要保护性抗原糖蛋白gB、gC和gD基因进行扩增及测序分析。结果显示,该病毒株与新近PRV分离株同属基因Ⅱ型。与Bartha株相比,Qihe547分离株在gB的优势抗原表位区(aa59~aa126)、gC膜外区(aa23~aa453)和gD主要抗原表位区,潜在的抗原位点及O-糖基化位点存在明显变异,推测这些变异可能影响Qihe547分离株的抗原性,利于病毒逃避宿主免疫反应,也可能是Bartha-K61疫苗诱导产生的中和抗体不能完全中和病毒的原因之一。本研究为PRV的有效防制及其疫苗研制提供了相关的数据。     

禽传染性支气管炎病毒分离毒株的血清型鉴定与免疫防制研究

应用基于单克隆抗体的间接免疫荧光实验和病毒血清中和实验，分别对１１个禽传 性支气管为为病毒分离毒株进行血清型鉴定。其中３株为Ｍａｓｓ型，２株为Ａｒｋ型，２株为Ａｒｋ／Ｍａｓｓ混合弄其余４株为不可分类型或未知型。     

山东省部分地区猪伪狂犬病病毒分离株gC抗原基因的变异分析

为了解当前山东省猪伪狂犬病病毒(PRV)流行特点及病毒gC抗原基因的变异情况,本研究对2018年来自山东省不同地区的23份猪伪狂犬病疑似病料进行PRV的分离鉴定,并对分离株的gC抗原基因进行扩增及序列分析。结果表明,共分离到9株PRV;gC基因同源性比对结果显示,分离株与2012年之后国内PRV变异株的核苷酸及氨基酸序列的同源性均高于欧美毒株;遗传进化树及推导氨基酸序列分析结果显示,分离株与国内2012年后分离到的变异毒株同属于GenotypeⅡ;因此,推测目前山东省流行的PRV以变异毒株为主。9株分离株与Bartha-K61疫苗株相比,糖基化蛋白gC在潜在抗原位点和O-糖基化位点的重要位置(aa23～aa453)发生改变,这或许会影响分离株的抗原性,从而有助于其逃避宿主免疫防御,最终造成疫苗诱导产生的中和抗体不能有效地中和目前流行的变异PRV。本研究为变异PRV的防控及相关疫苗研制提供了一定的理论依据。     

1株感染洛氏鱥呼肠孤病毒的分离与培养

利用细胞培养技术从养殖发病洛氏鱥中分离出1株病毒,经人工感染试验、电镜观察、核酸基因组SDS-PAGE电泳、RT-PCR检测确认为呼肠孤病毒。人工感染发病的症状与自然发病症状相同;病毒感染可使鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)产生典型细胞病变效应,收集细胞上清,负染后电镜下可观察到大小均一,直径约70nm,近球形,无囊膜结构的病毒粒子,初步判断为呼肠孤病毒;病毒基因组SDS-PAGE结果表明,病毒基因组由11个分段的RNA核酸片段组成,为典型的水生呼肠孤病毒核酸带型。病毒基因组S10节段RT-PCR结果表明,有特异性条带,其与GenBank中登录的呼肠孤病毒S10节段(JN206665.1)序列同源性为91%,该分离株应为呼肠孤病毒,本研究首次在洛氏鱥鱼内分离到呼肠孤病毒。     

猪小汤结肠炎耶氏菌变异株的分离及毒力特特性的测定

１９９２年月至１９９３年４月从个猪场收集２８６份腹泻猪和健康猪粪便，分离到３５株小肠结肠炎耶氏菌变异株。其特点是：ＶＰ，山梨糖，肌醇和岩藻糖均阴性，血清型０３，生物型３，５项毒力测定均阳性。这是我国首次报告从猪中分离 到这种变异株。     

种番鸭呼肠孤病毒的分离及RT-PCR鉴定

从表现为肝、脾表面坏死的240日龄种番鸭组织脏器中分离到1株病毒,暂命名为ZJ-10-06株,参照胡奇林等发表的文献进行RT-PCR[3]初步认定所分离到的毒株为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒。序列分析表明,ZJ-10-06与引起鸭脾坏死症HC/China病毒株同源率最高(95.3%),遗传进化分析可将番鸭呼肠孤病毒分成2个分支,ZJ-10-06和HC/China共处一相对独立小分支。     

即墨市猪Ⅱ型圆环病毒的ELISA检测和PCR初步鉴定

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对即墨市某发病猪场8份血清进行猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)抗体检测,结果表明总体阳性率达62.5%,初步表明此猪场已感染了猪Ⅱ型圆环病毒。同时利用已建立的聚合酶联式反应(PCR),从此发病猪场中,无菌采取淋巴结、脾脏和肺,经过研磨、冻融、抽提,得到DNA模板,进行了PCR扩增,并分别从淋巴结、脾脏和肺中获得预期长度的猪Ⅱ型圆环病毒的DNA片段,从而从分子生物学方面初步证明了此猪场已感染了猪Ⅱ型圆环病毒,也为即墨市猪Ⅱ型圆环病毒KF株的进一步分离鉴定奠定了基础。