蛹虫草液体发酵培养基的优化

采用统计学方法对1株蛹虫草Cordyceps militaris DY-1菌株进行液体发酵配方优化,以期得到适合蛹虫草生长的最佳培养基配方。以菌丝体干质量浓度为指标,首先采用单次单因子方法筛选出培养基中的最优碳源、氮源及无机盐和正交试验方法得出最佳的碳氮比(C/N);然后采用Plackett-Burman(BP)设计筛选出影响菌丝体干质量浓度的关键因素,通过中心组合和响应面法确定关键因素的最佳浓度,从而得到出菌株DY-1的液体发酵最佳培养基配方为:葡萄糖16.40 g·L-1,酵母浸膏粉5.00 g·L-1,硝酸钾1.00 g·L-1,硫酸镁0.20 g·L-1,磷酸二氢钾1.80 g·L-1,硫酸亚铁0.02 g·L-1。经验证,菌丝体干质量浓度为32.11 g·L-1,与模型的预测值基本一致。运用最佳培养基配方进行液体发酵,菌丝体干质量浓度较基础培养基提高了4.12倍。     

高寒地区蛹虫草摇瓶液体培养基优化

[目的]筛选出高寒地区蛹虫草摇瓶液体培养基的最佳配方.[方法]以菌丝体干质量浓度为指标,首先采用单因素试验方法筛选出液体培养基中的最优碳源和氮源,然后运用方差分析得出最佳碳氮肥比(C/N).[结果]辽宁某企业提供的蛹虫草菌株液体培养基的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,碳氮肥比为2∶1和1∶1时均可使菌丝达到较大的生物量.[结论]该研究为高寒地区蛹虫草的液体发酵培养提供理论依据.     

蛹虫草液体培养基的优化试验研究

本试验对蛹虫草液体培养基进行优化研究。通过碳源、氮源单因素对比试验,筛选出蛹虫草液体培养基最佳碳源为蔗糖,其次为麦芽糖;最佳氮源为酵母膏,其次为蛋白胨。通过正交试验筛选出蛹虫革液体培养基最佳配方为：蔗糖3％、酵母膏3％、KH2PO40．1％、MgSO40．15％。该研究为蛹虫草液体培养提供理论依据。     

蛹虫草母种培养基配方优化研究

采用6种不同配方的固体培养基对蛹虫草菌株的菌丝体进行培养,以菌种初萌发时间、菌丝长速、菌丝长势、菌丝长满斜面所需时间为指标,筛选出蛹虫草母种最佳培养基。结果表明:母种培养基的最佳配方为:20%马铃薯提取液中加入1%葡萄糖、1%蛋白胨、2%琼脂、0.5%KH2PO4、0.3%MgSO4、VB1(10 mg·L-1),pH值5.8。在该培养基上,菌种的初萌发时间最短,为2 d;菌丝长速最快,为6.3 mm·d-1;长势最强;菌丝满管时间最短,为10 d。     

不同种类氨基酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量的影响

[目的]研究液体培养基中添加氨基酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量的影响,并确定8种氨基酸最佳添加浓度。[方法]考察24种氨基酸(添加浓度为1 g/L)对虫草素含量的影响,采用DPS V18.10软件进行差异显著性分析,并对促进虫草素合成作用显著的8种氨基酸添加浓度进行研究。[结果]L-赖氨酸、L-半胱氨酸、L-精氨酸、L-天门冬酰胺、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、肌氨酸对蛹虫草发酵液中虫草素含量具有不同程度的提高作用;4 g/L的L-甘氨酸对虫草素的合成促进作用最强,发酵液中虫草素含量为1 022.25 mg/L。[结论]该研究为蛹虫草液体发酵生产虫草素提供参考依据。     

不同人工栽培培养基对蛹虫草子实体发育的影响及效益分析

[目的]蛹虫草(Cordyceps militaris)又名北虫草、北冬虫夏草,是一种药(食)用真菌,具有替代名贵中药冬虫夏草的潜力,目前已大规模开发利用;但在人工栽培过程中,仍存在栽培基质配方不佳、子实体形成及优质率不高等问题.[方法]从新疆天山区域采集野生蛹虫草子实体,经分离纯化,筛选出优良菌株,设计不同的人工栽培培养基配方,在恒温培养条件下,明确不同培养基对新疆蛹虫草的子实体生长影响.[结果]不同培养基对蛹虫草的菌丝生长及子实体形成发育具有差异性影响.与对照处理相比,其它处理对蛹虫草的子实体长度、鲜重、干重、鲜干比、生物转化率,以及每瓶投入、产出和净利润等方面均呈显著性差异(P＜0.05);不同的培养基配方对蛹虫草的菌丝、子实体形成具有重要的影响,处理1(大米培养基,20 9/瓶)和处理10(大米:小麦:水稻壳=6:3:1)表现最好.[结论]蛹虫草人工栽培可使用处理1或处理10配方培养基适宜新疆地区蛹虫草的规模化生产,丰富该地区人工栽培蛹虫草培养基配方,为伊犁乃至新疆大面积人工栽培蛹虫草提供技术支持.     

蛹虫草原生质体的制备与再生

为了建立原生质体介导的蛹虫草遗传转化系统,考察了各种细胞壁裂解酶和渗透压稳定剂等对蛹虫草原生质体形成和再生的影响.蛹虫革菌丝体形成和释放原生质体最适裂解酶和酶解时间分别为:1%Cellulase,30℃作用2 h;最适渗透压稳定剂是0.8mol·L-1MgSO4;最适合原生质体再生的培养基为含0.6mol·L-1蔗糖的PDA培养基.原生质体液涂布双层再生培养基的方法再生率最高,为4.38%.     

不同配方下固体培养蛹虫草活性成分含量比较

以蚕蛹、黄豆、玉米糁、蛋白胨为原料固体栽培蛹虫草,研究不同配方培养基对蛹虫草虫草素、腺苷、多糖、虫草酸含量的影响。结果表明,配方5下蛹虫草虫草素含量最高,配方1下腺苷含量最高,配方4下多糖、虫草酸含量最高,在纯蛹培养基中添加适量黄豆、玉米糁、蛋白胨有利于蛹虫草活性物质的提高。     

蛹虫草菌丝体液体发酵培养条件的优化研究

以蛹虫草菌丝体发酵液中的菌丝体干重和粗多糖产量为指标,筛选出液体培养基的最适碳源为蔗糖,最适氮源为黄豆粉。通过四因素三水平的正交试验,优化出液体发酵培养基的最佳配方为马铃薯20%,蔗糖5%,黄豆粉2%,磷酸二氢钾0.1%,硫酸镁0.1%,维生素B10.01%。并确定了摇瓶最优发酵工艺条件为装液量100 mL·250mL-1三角瓶,菌龄为72 h,接种量为15%,起始pH 6.0,温度24℃,摇床转速150 r·min-1,最适发酵周期为120 h。     

蛹虫草废弃培养基二次应用于蛹虫草栽培的探索

以不添加废弃培养基的普通栽培的蛹虫草为对照,研究蛹虫草废弃培养基二次应用于蛹虫草栽培对于蛹虫草子实体鲜质量、虫草素及腺苷含量的影响。结果表明:与对照组相比,废弃培养基添加量为10%、20%、30%时,蛹虫草子实体鲜质量高于对照组,但无显著差异;废弃培养基添加量大于30%时,蛹虫草子实体鲜质量则低于对照组,差异显著;虫草素含量则随废弃培养基添加量的增加而逐渐提高,腺苷含量与对照组相比也有所升高,当废弃培养基添加量为100%时达到最高;虫草素含量比对照组提高2.10倍,腺苷含量比对照组提高1.75倍。     

滨梅茎段组织培养研究

以滨梅(Prunus maritima Marshall)带腋芽茎段为外植体进行了组织培养技术的研究。结果表明,植物生长调节物质种类及浓度、碳源、光照度对滨梅不定芽增殖和生长均有显著影响。综合分析单因素试验和正交试验结果表明,在滨梅组织培养中,最佳初代培养基为MS+0.5 mg·L-1TDZ;最佳继代增殖培养基为MS+0.3 mg·L-1TDZ+0.1 mg·L-12,4-D;最佳生根培养基为1/2 MS+0.2 mg·L-1NAA。培养基以质量浓度为30 mg·L-1的葡萄糖为碳源,光照度为3 000 lx。     

生长调节剂对‘砀山酥梨’脱萼果率和果实品质及新梢生长的影响

以‘砀山酥梨’为试材,于盛花期喷施不同浓度的保花保果剂(PBO)、多效唑(PP333)、氟硅唑(Flusilazole),研究生长调节剂对‘砀山酥梨’脱萼果率、果实品质和新梢生长的影响。结果表明:高浓度PBO、PP333虽能提高‘砀山酥梨’脱萼果率、果实固形物与可溶性糖含量,降低了有机酸含量,但使果实石细胞明显增多、硬度增加、果点增大。2 500 mg.L-1 PP333、2 000 mg.L-1 PBO处理果实石细胞含量分别为1.52%和1.47%;果肉硬度分别为6.34和6.36 kg.cm-2;果点直径分别为1.97和1.87 mm,均显著高于喷施清水对照。PBO和Flusilazole对果实品质和新梢生长影响较PP333小,花期喷施其适宜浓度为200 mg.L-1和100 mL.L-1。2 500 mg.L-1 PP333处理果点明显增大,超微结构观察表明,PP333处理使细胞排列紧凑、细胞壁变薄、木栓化程度提高,且表皮裂痕增大。     

垂花蕙兰种子无菌播种和快速繁殖

以垂花蕙兰种子为试验材料,采用种子→原球茎→完整植株的途径,研究基本培养基、植物生长调节剂、有机添加物和活性炭等关键因素对垂花蕙兰种子萌发、原球茎增殖、分化和生根等各培养阶段的影响,探讨垂花蕙兰无菌播种和快速繁殖的关键技术。结果表明,种子在1/2MS ＋ 6-BA 1.0 mg·L-1 ＋ NAA 1.0 mg·L-1 ＋ AC 0.5 g·L-1 ＋蔗糖20 g·L-1 培养中培养60 d可形成原球茎,种子萌发数可达90粒;原球茎在1/2MS ＋ 6-BA 1.0 mg·L-1 ＋ NAA 0.5 mg·L-1 ＋ KT 1.0 mg·L-1 ＋ AC 0.5 g·L-1 ＋ 蔗糖20 g·L-1 培养基上增殖效果好,增殖系数为6.8;原球茎在1/2MS ＋ 6-BA 0.5 mg·L-1 ＋ NAA 0.1 mg·L-1 ＋ AC 0.5 g·L-1 ＋ 蔗糖20 g·L-1 上培养分化效果好,分化率高达89.2%;幼苗在1/2MS ＋ IBA 1.0 mg·L-1 ＋50 g·L-1 土豆泥＋蔗糖20 g·L-1 上培养30 d可生根,生根率为94.5%,苗高可达5.6 cm。     

枸杞组织培养快速繁殖技术

以枸杞、新疆枸杞、宁夏枸杞的种子为外植体进行组织培养快速繁殖技术研究,结果表明：枸杞最适宜的初代培养基为MS＋6BA1.5 mg.L-1＋IBA0.2 mg.L-1,宁夏枸杞和新疆枸杞最适宜的初代培养基为MS＋6BA2.5 mg.L-1＋IBA0.2 mg.L-1;3种枸杞最佳的继代培养基均为MS＋6BA0.5 mg.L-1＋IBA1.0 mg.L-1,分化诱导率分别为60%、40%、44%,增殖倍数分别为4.5倍、3倍、3倍;在MS＋6BA0.5 mg.L-1＋IBA0.1 mg.L-1培养基上3种枸杞的幼苗生长均表现为粗壮;生根培养基以1/2 MS＋IBA0.1 mg.L-1效果最佳.以腐殖土、蛭石、河沙等量混合配制的移栽基质效果最佳,移栽成活率为96%.     

紫花亚菊(Ajania purpurea)愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

以紫花亚菊(Ajania purpurea)组培苗茎段、叶片为外植体,在附加不同浓度植物生长调节剂6 BA和NAA的MS培养基上诱导培养,获得再生植株。对试验结果进行观察分析筛选出合适的配方: 愈伤组织诱导培养基为MS+10 mg·L-1 6 BA+01 mg·L-1 NAA,诱导率达956%;芽诱导培养基为: MS+10 mg·L-1 6 BA+02 mg·L-1 NAA,诱导率达82%;不定根最适诱导培养基为: 1/2 MS+015 mg·L-1 IBA,生根率达90%以上,再生植株移栽成活率达90%。     

三种桃砧木茎尖培养技术的研究

以砧选1号、东溪小仙桃、毛桃茎尖为试验材料进行组织培养,研究不同消毒处理、基本培养基、植物激素的种类和浓度对桃砧木茎尖初代、继代和生根培养的影响。结果表明：初代培养中最适宜消毒方法为75%酒精30 s和01%升汞（HgCl2）3 min,植株下部外植体成活率较高;MS（6-BA 0.5 mg·L-1,IBA 0.2 mg· L-1）为东溪小仙桃和砧选1号最佳初代培养基,成活率分别为73.33%和76.67%;适合毛桃和砧选1号的继代培养基为MS（6-BA 1.5 mg ·L-1,IBA 0.2 mg·L-1）,适合东溪小仙桃的继代培养基MS（6-BA 2.0 mg·L-1,IBA 0.5 mg·L-1）;1/2MS基本培养基对嫩梢生根诱导效果最好,适宜毛桃和砧选1号的生根培养基为 1/2MS（IBA 1.0 mg·L-1）,适宜东溪小仙桃的为1/2MS（IBA 0.5 mg·L-1）。     

毛稔叶片离体培养及植株再生研究

以毛稔叶片作为外植体, MS为基本培养基,研究不同种类激素的浓度配比对毛稔叶片离体再生的影响。结果表明,黑暗条件与光照12 h·d-1有利于毛稔愈伤组织形成,毛稔叶片愈伤组织最佳诱导培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12,4-D+0.1 mg·L-1 NAA,光照12 h·d-1诱导40 d,愈伤诱导率为96%;叶片形成的愈伤组织分化率极低,分化率随6-BA浓度升高而升高,愈伤组织分化最适培养基为MS+0.1 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-16-BA,分化率为10%;最适生根培养基为1/2 MS+0.1 mg·L-1 NAA,生根率为88.89%。     

豆瓣绿(Peperomia obtusifolia)的组织培养与快速繁殖研究

介绍了以豆瓣绿带芽茎段、叶片、花序为外植体的组织培养和快速繁殖研究.结果表明:可用于豆瓣绿组织培养的最适外植体为带芽茎段.诱导芽生长的最适培养基为MS+6-BA1.00 mg·L-1+NAA 1.00 mg·L-1+Vc 60 mg·L-1,诱导率为95%.诱导芽增殖的最适培养基为MS+6-BA 1.00 mg·L-1...     

参薯组织培养快繁技术

以参薯的带节茎段为外植体、MS为基本培养基,研究了参薯的组织培养快速繁殖技术。结果表明,不含任何激素的MS培养基能诱导外植体的腋芽萌发,萌芽率达100％;萌发的茎段在MS＋AD80mg·L-1的培养基上增殖效果较好,50d可增殖4倍;继代培养得到的带节茎段在MS＋6-BA1．0mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1＋AD80mg·L-1的培养基上能诱导出不定芽,将其芽点转接到MS＋80mg·L-1 AD培养基上,不定芽能抽生,且芽体健壮;不定芽在MS＋NAA0．1mg·L-1的培养基上能形成完整植株,生根率达100％;V土：V沙：V草木灰=2：2：1的混合基质移栽参薯组培苗的效果较佳,移栽存活率可达88．3％。     

葡萄未成熟胚诱导体细胞胚发生和植株再生与遗传鉴定

以二倍体和四倍体葡萄杂交获得的未成熟合子胚为材料,诱导体细胞胚发生。采用的初生胚诱导培养基(SE培养基)为:NN69+1.80 mg.L-1NAA+0.4 mg.L-1水解酪蛋白+2 g.L-1活性炭+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂;次生胚诱导培养基分别为:3/4MS+0.35 mg.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(扩繁培养基)和MS+1.5 g.L-16-BA+0.2 g.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(胚状体萌发培养基)。结果表明:初生胚诱导率为11.11%和16.67%,体细胞胚在扩繁培养基上再生植株。利用流式细胞仪和SSR标记检测源自同一未成熟合子胚(胚珠)的不同株系的遗传稳定性,结果显示,所测植株均为三倍体,且都来自杂交所得的未成熟合子胚。本研究所建立的体细胞胚诱导方法及遗传稳定性检测技术,能够为植物材料保存、扩繁,转基因应用和研究植物发育及极性建成等提供途径。