鸡毒支原体SC克隆致弱株免疫原性测试——开放动物模型的建立与应用

对罗斯鸡和 Ｓ Ｐ Ｆ来航鸡用鸡毒支原体强毒攻击时,以鸡致病性大肠杆菌 Ｏ７ ８ 血清型菌株 １６ 小时培养物 ０２ｍ ｌ／羽皮下注射作人工诱导发病,试验鸡出现明显气囊病变,初步建立了以鸡致病性大肠杆菌为诱导因子的 Ｍ Ｇ 野外环境人工发病的动物模型。以此开放模型检测 Ｓ Ｐ Ｆ来航鸡以鸡毒支原体 Ｓ６ 克隆致弱株 Ｆ１５６ 代培养物点眼、滴鼻免疫后 ３０ 日、６０ 日龄的攻毒保护率,结果保护率分别达 ９０％ （１８／２０）、８４％ （４２／５０）,而对照组为 ３０％ （６／２０）、５０％ （１５／３０）,中期免疫效果证明,鸡毒支原体 Ｓ６ 克隆致弱株有良好的免疫保护作用。     

MD疫苗免疫雏鸡vMDV攻击后体液免疫球蛋白含量的变化

本实验以马立克氏病（ＭＤ）三价苗（ＳＢ＿１＋８１４＋ＨＶＴ）和ＨＶＴ疫苗免疫１日龄肉用雏鸡，１５日龄时腹腔注射马立克氏病强毒（ｖＤＭＶ）进行攻击，在攻毒后５、２５、４５和７５天用间接ＥＬＩＳＡ法测定实验雏鸡血清、泪液、气管液、胆汁和肠液ＩｇＧ、ＩｇＭ和ｌｇＡ含量的动态变化，结果发现免疫雏鸡强毒攻击后，其血清、泪液和气管液的ＩｇＧ、ｌｇＭ和ＩｇＡ含量显著高于感染对照鸡，胆汁和肠液中ＩｇＡ以及ＩｇＧ、ＩｇＭ显著高于感染对照鸡，其中三价菌免疫鸡的３种免疫球蛋白含量明显高于ＨＶＴ免疫鸡；表明ＭＤ强毒攻击后，免疫雏鸡全身和消化道、呼吸道局部的体液免疫应答显著增强，三价苗免疫鸡的体液免疫反应明显高于ＨＶＴ免疫鸡，并与其较高的免疫保护率相关。     

鸡毒霉形体油乳剂灭活苗对实验攻毒蛋用鸡产量的影响

将３０只２０周龄鸡毒霉形体（ＭＧ）阴性的蛋用种鸡分为４组，攻毒有Ⅰ组于颈部皮下接种２次油乳剂灭活苗；Ⅱ组免疫接种１次；Ⅲ组于攻毒后１周免疫接种１次，Ｃ组不接种疫苗，为对照线。４组鸡均在２９周龄是攻击ＭＣ致病株ＢＧ４４Ｔ。攻毒后通过７周观察，发现３个免疫组鸡的产蛋量下降率均明显低于对照组。攻毒后第７周剖杀Ⅰ组和对照组的全部鸡进行ＭＧ的分离培养，结果从对照组鸡的气管、肺和气囊中均分离到了ＭＧ，而Ⅰ组仅在气管和肺中分离到ＭＧ。２组鸡的输卵管中均未分离到ＭＧ。     

蛋鸡鸡毒支原体与大肠杆菌混合感染的诊断及对产蛋率影响的分析

对湖北省某鸡场１１０只蛋进行了鸡毒支原体（ＭＧ）、滑液支原体（ＭＳ）血清平板凝集试验（ＳＰＡ）。具有明显临床症状的鸡（眶下窦炎、呼吸困难、口罗音等）均为ＭＧ－ＳＰＡ阳性（５４／５４），同舍６０只无症状鸡中有４６只为ＭＧ－ＳＰＡ阳性（７６．６％）。对４只病鸡及４只ＭＧ－ＳＰＡ阴性健康鸡进行了支原体及细菌的分离鉴定。结果从３只病鸡中分离到鸡毒支原体，从２只病鸡分离到大肠杆菌Ｏ２血清型，证明为鸡毒支原体与大肠杆菌的混合感染。在同等饲养条件下，对检测的病鸡、外表健康阳性鸡、健康阴性鸡分开饲养，并记录１８天的产蛋情况。结果，病鸡组产蛋率为１４．１１％，健康阳性鸡为５３．３５％，健康阴性鸡为７０．１７％，三组差异极显著。健康阴性鸡组产蛋率明显高于健康阳性鸡组和病鸡组。说明在隐性感染鸡群，即使未发病，也会给生产带来不可忽视的损失。     

对几种血清I型鸡鸡马立克氏病疫苗的比较性评估

本文比较了４种血清Ｉ型马立克氏病（ＭＤ）单价弱毒疫苗其及其与血清ＩＩ型和ＩＩＩ型病毒混合多价疫苗在安全性及效力方面的差异,以０．２ｍｌ的剂量皮下接种１日龄母源抗体阳性的雏鸡。接种后５天,所有的疫苗接种鸡及时对照鸡都用ＭＤ强毒株－Ｍｄ－５或ＲＢ１／Ｂ株攻毒。血清Ｉ型单价疫苗的保护指数由５６至８０以上不等。Ｉ型毒＋ＨＶＴ（ＩＩＩ型）疫苗的保护指数亦有很大的提高。用ＨＶＴ＋ＳＢ－１或ＨＶＴ＋３０１Ｂ／１     

鸡传染性支气管炎可疑病料的病毒分离及初步鉴定

１９份鸡传染性支气管炎（ＩＢ）可疑病料通过ＳＰＦ鸡和鸡胚感染试验、血凝（ＨＡ）试验、气管环培养（ＴＯＣ）感染试验、单克隆抗体（Ｍａｂ）ＥＬＩＳＡ和电镜形态学观察，初步证明其中１３份病料含ＩＳ病毒（ＩＢＶ）．在用其中９份接种８～９周龄ＳＰＰ鸡进行的发病试验中，全部呈现临床症状，其中３份引起病死亡率（６０～８０％），接种后５周从存活鸡采血作ＩＢＶ血凝抑制（ＨＩ）试验，结果均为阳性．     

鸡毒支原体油乳剂灭活苗对降低鸡毒支原体垂直传播作用的研究

本试验将30只MG阴性的20周龄的蛋种鸡随机分为4组，Ⅰ组于21和25周龄、Ⅱ组仍于25周龄时分别颈部皮下接种MG油乳剂灭活苗0.5ml/只，Ⅲ组于攻毒后1周接种1ml／只，另设一组对照，不接种疫苗。各组均在29周龄时用通过SPF鸡两次复壮的MG－BG44T株经左胸气囊和鼻腔攻毒。收集攻毒后1－7周内所产的蛋，用PCR方法检测鸡蛋卵黄膜中的MG。结果在攻毒后7周内各免疫组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）的垂直传播率显著低于对照组（P＜0.01），分别比对照组低26.37%、12.8%、13.64%。攻毒后各免疫组和对照组经4次采样均可从喉头拭子中分离到MG但免疫组的分离率较低。攻毒后第7周从对照组鸡的气管、肺、气囊中均可分离到MG，而试验Ⅰ组仅在气管和肺中分离到了MG。试验Ⅰ组和对照组鸡的输卵管、心、肝、脾和肾中均未分离到MG。     

雏鸡感染马立克氏病强毒后抗氧化酶活性和丙二醛水平的变化

对１０日龄雏鸡人工感染马立克氏病毒后，马立克氏病发病率为７８．０％，死亡率为７６．０％，在攻毒后２，４和６周，感染鸡血清中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），血液中过氧化氢酶（ＣＡＴ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性在总体上的均显著低健康对照组鸡（Ｐ〈０．０５），血清丙二醛水平极显著地高于健康对照组鸡（Ｐ〈０．０１）。结合对马立克氏病临床病例的研究结果认为，氧自由基介入了马立克氏病的发病过程。     

罗红霉素对鸡毒支原体感染的治疗试验

20日龄京白雏鸡210只,随机分成七组,其中六组用鸡毒支原体攻毒发病,五组分别饮用50ppm,25ppm,12.5ppm的罗红霉素、125ppm的硫氰酸红霉素、50ppm的氧氟沙星,连用5天,一组作阳性对照组,末攻毒组作阴性对照组,结果各试验组的死亡率分别为0、0、0、3.3％、3.3％、33％、0。对鸡毒支原体感染的治疗试验表明,罗红霉素能明显降低鸡气囊损伤,较好地提高鸡的成病率,其中以中、高剂量的效果最好,低剂量与对照药物硫氰酸红霉素和氧氟沙星相当。     

鸡毒支原体感染病理模型复制

以鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)S6标准菌株不同浓度接种16日龄雏鸡,5d后用鸡新城疫疫苗(I系)诱导发病,对以鸡新城疫为诱导因子的鸡毒支原体野外环境病理模型复制进行研究。结果表明:鸡毒支原体S6攻毒菌液浓度为109CCU/mL,攻毒后第5天,用鸡新城疫疫苗(I系)喷雾,5羽份/只,进行激发,可成功复制出鸡毒支原体感染病理模型。     

B亚型禽偏肺病毒对SPF鸡的致病性

利用分离的1株B亚型禽偏肺病毒,采用静脉注射和点眼滴鼻两种途径接种SPF鸡,并在接种同时免疫新城疫弱毒疫苗。在攻毒后3、6、9、12、15d,每组随机抽取3只翅下采血,检测血液生化指标,利用血凝和血凝抑制试验检测新城疫HI抗体效价;利用流式细胞术分析外周血CD40／CD8比值,ELISA试剂盒测定血清中IL-2、IFN7的含量;同时观察静脉注射组和点眼滴鼻组鸡的临床症状、剖检病变和病理组织学变化。结果表明,攻毒后9～15d,静脉注射组和点眼滴鼻组外周血CD4＋/CD8＋比值和血清II-2、IFN-γ的含量均显著低于对照组（P〈0．05）,而静脉注射组与点眼滴鼻组间无显著差异（P〉0．05）;静脉注射组和点眼滴鼻组的免疫器官指数低于对照组,但各组间差异不显著（P〉0．05）;各组间新城疫HI抗体水平无显著差异（P〉0．05）;血液生化指标仪谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）在攻毒后显著升高（P〈0．05）,其他指标在各组间无显著差异（P〉0．05）;静脉注射组和点眼滴鼻组在感染后3～10d出现轻微临床症状;病理组织学检测结果显示,静脉注射组和点眼滴鼻组的呼吸道和肝脏病变最明显。综上所述,B亚型禽偏肺病毒感染SPF鸡后,在一段时间内抑制机体细胞免疫,导致免疫机能下降,并引起轻微的组织病变;B亚型禽偏肺病毒通过两种不同的攻毒途径对SPF鸡的致病性无显著差异。     

人工诱发鸡新城疫的攻毒条件的比较研究

将4周龄淮南麻黄鸡80羽随机平均分成4组：口鼻接种组、皮下接种组、肌肉接种组和空白对照组，分别用不同稀释度的NDV攻毒，观察攻毒结果并统计死亡情况。结果不同攻毒途径的致病性有差异，肌肉注射致病性最强，皮下注射次之，滴鼻滴口最弱。不同攻毒途径所需的攻毒剂量各不相同，滴鼻滴口所需的剂量最大，皮下注射次之，肌肉注射量最小。本文对造成不同攻毒途径致病性差异的原因进行了深入探讨。人工诱发新城疫，建议采用注射途径。     

鸡传染性法氏囊病B_（－2），D_（78），TAD弱毒苗对青海流行野毒的效力试

对鸡传染性法氏囊病弱毒苗Ｂｕｒｓｉｎｅ－２，Ｄ_（７８），ＴＡＤ进行复制，免疫２１日龄雏鸡，１４天后ＡＧＤ抗体阳性率达９０％～１００％，用从本地分离的Ｓ_（－９３０２）强毒１：１０囊乳剂０．２ｍｌ／只滴鼻、点眼、口服攻毒，结果对照组１００％发病，５０％死亡，试验组１００％保护，获得较好的免疫效果。     

强型嗜内脏新城疫病毒对接种鸡支气管上皮的影响

速发性嗜内脏型新城疫(VVND)病毒对未接种鸡的气管上皮的影响,已有报道。在该项研究中,其电子显微镜的观察表明,出现的病变主要与纤毛细胞有关。在本实验中,为探明VVND 病毒如何影响接种鸡的气管上皮,用活的缓发性(UPM-AC/1)新城疫毒苗给21和42日龄的一群肉鸡滴鼻。在56日龄时,用 VVND 病毒对这些鸡进行攻毒试验,以接种过但未攻毒的鸡作为对照组。攻毒后每隔一天处杀4只感染鸡和2只对照组鸡,摘取其气管以分离病毒     

鸡毒支原体人工发病模型的建立

本文进行鸡毒支原体强毒R株攻毒方法的比较,采用气雾、气囊注射、肺部注射、气囊注射施以氨水逆境、肺部注射施以氨水逆境和单纯氨水对鸡的应激6种攻毒方法,攻毒后第15天剖检观察鸡的气囊损伤情况。结果发现,气囊注射施以氨水逆境攻毒效果最好,致病率达100%(10/10);气囊注射次之,致病率达90%(9/10);气雾攻毒效果最差。因此,我们选用气囊注射施以氨水逆境做为鸡毒支原体强毒R株人工发病的模型。     

鸡败血霉形体SC克隆致弱株免疫原性试验

在透明塑料隔离器中进行了鸡败血霉形体人工发病试验，结果３０日龄ＳＰＦ来航鸡在ＮＤＶ、ＩＢＶ弱毒诱导和７０／１００００００（质量分数）氨环境刺激的联合作用下，致病率可达１００％（７／７）。经鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣＦ１５６代培养物点眼、滴鼻免疫后１０，２０，３０ｄ的ＳＰＦ来航鸡再以ＭＧ强毒攻毒，结果，保护率分别达８０．０％（４／５），７５．０％（３／４）和８７．５％（７／８）。近期免疫效果证明，鸡败血霉形体Ｓ６克隆致弱株ＳＣ有良好的免疫原性。     

高原地区鸡病预防接种方案初探

１蛋鸡的免疫方案１日龄马立克氏病弱毒疫苗（出壳后２小时内完成接种）。３日龄新支联苗（克隆３０＋ＩＢＨ１２０）滴眼、滴鼻。７日龄传染性法氏囊炎弱毒疫苗点眼、滴鼻。１４日龄新支联苗（ＬａＳｏｔａ＋ＩＢＨ１２０）点眼、滴鼻。１８日龄传染性法氏囊弱毒疫苗点眼...     

鸡毒霉形体人工感染肉用仔鸡后呼吸系统的病理形态学观察

７日龄健康肉用仔鸡气囊接种毒霉形体ＨＳ２心株,３－５ｄ后出现典型的ＭＧ感染症状,其呼吸系统发生一系列病理组织学变化。采集感染鸡及对照鸡的气管经固定,脱水,临界点干燥,镀金后置于扫描电镜下观察,可见感染鸡气管粘膜明显水肿,纤毛部分或全部脱落等,而对照组鸡气管则无任何病变;光镜下可见感染鸡的气管粘膜水肿增厚１－２倍,粘膜下层单核白细胞聚集,其间有数量不等的淋巴细胞集团,粘液细胞减少或消失;气囊粘膜水肿     

鸡毒支原体F株的毒力回归试验

将鸡毒支原体Ｆ株经培养基连续传３６代后的菌株培养物以鼻内和胸腔内感染接种的方式在ＳＰＦ鸡体内连续回传５代,然后分别取各回传代次的Ｆ株接种无鸡毒支原体和滑液支原体感染的小雏和ＳＰＦ鸡胚,同时以没经回的原始代次作为对照,比较各代次Ｆ株的毒力变化情况。试验结果表明,经回传ＳＰＦ鸡５代的各代次Ｆ株培养物接种小雏对鸡不致病,所有接种鸡气囊 未出现病变,和未经回传ＳＰＦ鸡的Ｆ株结果完全一致;经过回传的各代次Ｆ     

氢化可的松诱导鸡毒支原体感染模型的建立

试验旨在建立鸡毒支原体人工感染动物模型,为鸡毒支原体致病的分子机制研究提供基础。首先在7日龄时使用氢化可的松建立鸡的免疫低下模型,15日龄时在左右胸气囊分别注射0.5 m L浓度为1×109CCU/m L的鸡毒支原体R株菌液,观察鸡的临床症状并进行剖检,采集咽拭子、气囊和肺进行PCR检测,采用血清平板凝集试验(SPA)检测血清抗体,对气管和肺进行光镜检查。结果显示,攻毒4 d后,鸡表现出明显的呼吸道症状,解剖发现气囊浑浊、增厚并有黄色干酪样渗出物,PCR和SPA检测呈阳性,光镜下观察到气管中纤毛脱落,上皮细胞增生,黏膜下层淋巴细胞浸润,肺出血并有炎性细胞渗出。表明鸡毒支原体感染病理模型造模成功。