马传染性贫血弱毒疫苗免疫马与自然感染马酶联免疫吸附试验血清抗体耐热性比较研究

本试验对马传贫血清抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)的耐热性进行了比较研究.对2匹弱毒疫苗免疫马跟踪检测17个月,在接种3周后ELISA检测均呈阳性,其中一匹马ELISA抗体阳性持续到接种后10个月,另一匹马ELISA抗体阳性可持续到接种后一年.对两匹马的所有不同时期采集的血清样品经75℃加热5 min处理后,用ELISA检测均为阴性.另选6匹马传贫弱毒疫苗免疫马血清且ELISA检测抗体呈阳性的30个样品,经75℃加热5min处理后,均由阳性转变成阴性.4匹经马传贫病毒辽毒株(LN-EIAV)实验感染马且ELISA检测抗体呈阳性的血清样品,经75℃加热5 min处理后,结果仍为阳性.23匹ELISA检测抗体呈阳性的自然感染马血清样品,经加热处理后,19匹马血清样品仍为阳性,4匹马血清样品由阳性转变成阴性.结果表明弱毒疫苗免疫马较自然感染马血清抗体耐热性稍差.     

黑龙江省大庆市猪O型口蹄疫疫病动态及免疫效果分析

为了解黑龙江省大庆市猪O型口蹄疫流行动态及免疫效果,试验随机采集辖区内不同地域、不同时段、不同群体、不同饲养方式的猪血清样品2 464份,屠宰场和病猪场淋巴结样品278份,应用RT-PCR和非结构蛋白ELISA方法检测病原,液相阻断ELISA方法检测免疫抗体。结果显示,RT-PCR方法检测的淋巴结样品全部阴性,非结构蛋白ELISA方法检测的746份血清样品全部阴性,液相阻断ELISA方法检测的全部血清样品中免疫抗体合格样品1 942份,合格率为78.81%;其中规模场、散养户和屠宰场免疫抗体合格率分别为84.89%、76.54%和68.42%。该试验为大庆市的区域疫病流行动态和疫病净化提供参考、为免疫防控提供数据支持。     

同源血浆及血清中蓝舌病病毒抗体ELISA检测结果比较

为简化动物血液样品中蓝舌病病毒（BTV）检测及研究方法,采用2种酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自云南省德宏州芒市一家肉牛养殖场的30对牛同源血浆及血清样品进行BTV总抗体及VP7抗体检测。BTV总抗体ELISA检测结果显示,同源血浆与血清之间的阳/阴性结果一致率为100%,ΔPI在±5%以内的样品占87%;VP7抗体ELISA检测结果显示,同源血浆与血清之间的阳/阴性结果一致率为93%,ΔOD在±0.05范围内的样品占87%。结果表明：利用ELISA检测动物血样中BTV抗体时,血浆样品可替代血清样品;血浆样品的溶血程度不影响检测结果,但粗制血浆中的非溶解性杂质可能影响检测结果,需要使用离心除杂后的血浆样品。     

基层监测采样问题的解决措施

采样监测是兽医实验室检测工作的基础,样品质量是否符合要求直接关系到检测结果的准确度,基层采样过程中存在着血清溶血、样品受污染、样品采集保存不规范等问题进行分析,建议使用负压采血管、严格采样规程等措施加以改进。     

不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒-p27抗原结果的影响

为探讨不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒(ALV)-p27抗原结果的影响,试验首先对180日龄地方品种母鸡的泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原进行ELISA检测,选取部分阳性鸡和阴性鸡进行分组试验,采用ELISA对试验鸡血清、蛋清和病毒分离的细胞培养液进行ALV-p27抗原检测,采用RT-PCR方法检测血液ALV特异性基因。结果显示,阳性组中以血清、蛋清和细胞培养液作为ELISA ALV-p27抗原检测材料,其检测阳性率均低于泄殖腔棉拭子,血清检测的阳性个体包含全部蛋清和细胞培养液ELISA检测的阳性个体。ELISA检测数据的相关性分析显示,只有血清和细胞培养液检测数据间存在显著性相关,线性关系方程为Y(细胞上清)=1.8439X(血清)-0.1469,R²=0.937;阳性组中ALV-p27基因检测阳性率低于泄殖腔棉拭子,但高于血清、蛋清和细胞培养液,其包含所有血清ELISA检测的阳性样品;外源性ALV-J gp85基因阳性率仅为29.17%,且阳性样品均属于血清ELISA阳性样品。综上所述,成年鸡以泄殖腔棉拭子作为ELISA ALV-p27抗原检测材料存在假阳性结果,蛋清和细胞培养液作为检测材料存在漏检的可能,血清作为ELISA检测材能够更准确地反映成年鸡群ALV感染状态。     

溶血对O型口蹄疫抗体检测结果的影响

为了解溶血对O型口蹄疫抗体检测结果的影响,通过冻融法制备了牛和绵羊的中度溶血和重度溶血样品,并设立了未溶血组作为对照,采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法进行检测后分析。结果显示,46份样品中,中度溶血样品组平均吸光度值最高,与其它3组均有显著性差异(P0.05),而重度溶血组与未溶血的2组均无显著性差异(P0.05)。假定未溶血-冷藏组检测结果为真值,将O型口蹄疫抗体的吸光度值换算成阻断率并判定阴阳性后再进行分析,结果发现:22份牛血样中4组检测结果均呈现阳性;24份绵羊血样中有3份样品在未溶血-冷藏组为阳性,而在未溶血-冷冻组、中度溶血组和重度溶血组中均呈现阴性,假阴性率为15.79%。     

牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究

采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。     

东乡绿壳蛋鸡卵黄与血清中IgY水平相关性研究

鸟类血清和卵黄中的总卵黄免疫球蛋白Y(IgY)含量可以作为健康状态的一个标志,同时卵黄抗体也是生物制药的重要材料。为了阐明鸡卵黄抗体和血清抗体总量的关系,以30只43周龄单笼饲养的东乡黑羽绿壳蛋鸡为试验动物,采集每只鸡的翅下静脉血样以及其所对应的鸡蛋,分离出血清并制备IgY样品。通过间接ELISA的方法对卵黄与血清中的总IgY水平进行了检测,并分析了两者之间的Pearson相关。结果表明:卵黄中总IgY水平与血清中总IgY水平之间具有显著的相关性(r=0.619;P0.01)。研究结果为通过检测血清中的IgY水平来对卵黄中IgY水平或者后代的获得性免疫水平进行预测提供了一个重要参数。     

几种检测猪弓形虫病ELISA诊断试剂盒的对比

以人工感染弓形虫的猪阳性血清及感染前的阴性血清为样品,比较3个国产(A、B、C)和2个国外(D、E)ELISA试剂盒检测猪弓形虫病的敏感性。用这5种ELISA试剂盒,检测人工感染弓形虫的猪阳性血清42份及感染前的阴性血清45份,并参考PCR扩增结果,比较这5种ELISA试剂盒检测猪弓形虫病的敏感性。5种试剂盒中,1种国产试剂盒的检测结果与PCR结果完全一致,其余4种试剂盒的检测结果都与PCR检测结果差别较大。结果表明,国产试剂盒A的检测效果最佳,国外试剂盒与部分国内试剂盒的检测结果相当,临床选用试剂盒时,可选择检测效果最佳的试剂盒A,不必盲目选择国外试剂盒。     

福建莆田地区猪圆环病毒病的血清学调查

为了解莆田地区猪圆环病毒病的流行状况,2013—2014年间在莆田笏石、埭头、灵川、仙游地区等部分养猪场(户)共采集了322份未经PCV2疫苗免疫的猪血清样本,采用ELISA(酶联免疫吸附试验)方法对送检血清样品进行PCV2抗体水平检测。结果表明,322份被检血清中检出117份阳性血清,总阳性率为36.33%,其中以6~12周龄的小猪感染率最高,阳性率为55.56%。说明猪圆环病毒病在莆田市多数猪场中存在。     

新疆北疆地区牛、羊病毒性腹泻—黏膜病的血清学调查

为了了解新疆北疆部分地区的牛、羊病毒性腹泻一黏膜病的感染情况,采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）对随机采自新疆伊犁、塔城等地区的105份牛血清样品和49份羊血清样品进行BVDV抗体检测。结果显示,牛血清样品中有19份阳性,阳性率为18．1％;而羊血清样品中有45份阳性,阳性率为91．8％。结果显示,BVD在该地区较为流行,尤其是羊的感染率比较高。     

上海地区猪和奶牛血清中TTV（Torque Teno virns）感染的检测

于2009年3～5月采集上海地区的200份牛血清和400份猪血清,采用ELISA和荧光PCR方法检测其TTV（Torque Teno virus）感染状况。经ELISA检测,牛血清样品中检出阳性数2份,阳性率1．0％;猪血清样品中共检出阳性数15份,阳性率3．75％,其中生产母猪和育肥肉猪的阳性率分别为5．5％和2．0％,而荧光PCR检测结果均为阴性。结果表明上海地区猪和牛TTV感染现状处于较低水平。     

非洲猪瘟检测样品的选择

为了选择非洲猪瘟病毒感染早期、中期和晚期3个阶段诊断的最佳样品,试验选取50头临床表现为采食量下降或不食、发烧、流产的母猪为研究对象,采集其环境样品、咽拭子、鼻拭子、肛拭子、静脉血和尾根血等6种样品共900份,采用定量PCR方法检测非洲猪瘟病毒核酸,比较6种样品中核酸的阳性率和Ct值。结果表明,感染早期的咽拭子非洲猪瘟病毒核酸阳性检出率最高为42%;中期血液中非洲猪瘟病毒核酸阳性检出率为25%;后期环境样品中非洲猪瘟病毒核酸阳性检出率最高为54%,血液病毒载量最高。综合现场操作,认为非洲猪瘟诊断中,不同时期选择的最佳样品分别是:感染前期采集咽拭子进行检测,中期采集尾根血进行检测,后期采集环境样品进行检测。     

一起黑山猪圆环病毒病、猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的诊断

2018年12月,广西河池市天峨县某黑山猪养殖场发生了疫病,采集11份血清样品进行ELISA抗体检测,采集2份组织样品进行PCR检测,经过综合临床诊断和实验室检测结果,确诊为猪圆环病毒病、猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染。     

血清样品质量对抗体检测结果的影响

为了研究血清样品质量对抗体检测结果的影响,随机采集不同生长阶段猪群血液样品,制备成标准、未分离、轻度溶血、重度溶血4种血清样品状态,根据血清样品颜色深浅和红细胞破裂程度判断血清样品的质量合格程度。用猪瘟、蓝耳病和伪狂犬病野毒抗体3种常试剂盒对4种不同状态的血清样品进行抗体检测,以标准血清样品检测得出的结果作为参考值,评估未分离、轻度溶血、重度溶血3种不合格血清样品对抗体检测结果的影响。结果显示,未分离、轻度溶血和重度溶血3种质量不合格血清致使猪瘟抗体阻断率、蓝耳病病毒抗体S/P值的升高和伪狂犬病野毒抗体S/N值的降低,导致抗体检测假阳性结果的出现,从而对整个猪群抗体水平造成影响。     

WCA-ELISA检测猪链球菌2型抗体

本试验应用菌体包被间接ELISA分别对70份假定阳性血清和70份假定阴性血清进行1:100、1:200、1:400、1:800稀释检测,利用血清流行病学原理对检测结果进行分析,确定了检测方法的最佳单一稀释度,以及判定阳性血清和阴性血清的OD值。并利用建立的间接ELISA对1997年采集的江苏地区的猪血清进行了检测。试验结果发现在1998年猪链球菌大暴发的前期,阳性率高达48%,尤其是双甸马塘地区,阳性率高达72.4%。     

新疆部分规模化奶牛场牛病毒性腹泻调查

为了了解新疆部分规模化奶牛场BVDV的感染情况,对采集的奶牛血清、流产死胎和鼻拭子等组织病料应用Ruminant BVD/BD p80-Serum阻断ELISA实验及牛病毒性腹泻(BVD)实时荧光RTPCR的方法进行检测,BVDV血清学检测阳性率为63.8%,组织病料样品中阳性率为13.46%,结果表明BVDV在新疆规模化奶牛场中已存在感染,因此应该对发病动物进行隔离或者淘汰,避免相互感染传播,降低感染率。     

青海天峻县半野血牦牛牛病毒性腹泻/黏膜病流行病学调查

为了研究青海天峻县半野血牦牛中牛病毒性腹泻-黏膜病的存在情况,试验采用牛病毒性腹泻抗体ELISA检测试剂盒,对天峻县的92份半野血牦牛血清进行了抗体的检测和分析。结果表明:检测样品中有35份为阳性,血清阳性率占38.04%,从35份阳性血清中随机抽取样品进行PCR扩增,均能扩增出病毒E0特异性片段。说明该县野牛群中存在牛病毒性腹泻-黏膜病的流行,应引起高度重视。     

青海省人与动物弓形虫病的血清学检测

应用ELISA诊断方法,对来自青海省的部分孕妇、藏系绵羊、马、藏狗、骆驼、喜马拉雅旱獭、高原鼠兔、中华鼢鼠、藏羚羊和实验小鼠的1 090份血清样品进行弓形虫特异性抗体的检测。结果检出75份阳性血清,阳性率为6.88%。     

珠江三角洲部分地区鸡传染性贫血的血清学调查

对珠江三角洲部分地区鸡传染性贫血的血清学调查，共采取血清样品201份进行ELISA检测，总阳性率为38．31％。