羊流产衣原体的分离鉴定及间接免疫荧光法检测

对收集的疑似衣原体感染的羊流产胎儿样本接种鸡胚卵黄囊进行分离培养,通过PCR-RFLP(限制性片段长度多态性分析)方法鉴定为流产衣原体。将收集到的流产衣原体阳性样本接种Hela229细胞,应用基于流产衣原体MOMP单克隆抗体的间接免疫荧光法,在Hela229细胞浆内可见呈绿色荧光的衣原体包涵体,进一步在病原学水平上确定发生在甘肃省肃南县羊流产的病原为流产衣原体。     

布鲁菌外膜蛋白OMP10表达及其抗原性的研究

设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330 bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致.将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功.将此重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠埃希菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2 ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Western blot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别.     

脉冲放电杀菌技术及其应用研究进展

脉冲放电杀菌技术是一种利用电压瞬间发生变化而对细菌产生不可逆损失,进而导致死亡的一种非热杀菌技术。论文综述了脉冲电场的杀菌机理、特点和杀菌效果以及其在国内外应用的研究进展,提出脉冲放电杀菌技术有望取代传统的化学试剂灭活病原体方法,为动物传染病病原体的灭活和疫苗的制备带来革新。     

规模化猪场猪衣原体病的监测

由鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)感染猪引起的猪衣原体病,在临诊上表现出不同症状,包括怀孕母猪流产、死产、胎儿干尸化,产弱仔,公猪睾丸炎,仔猪肺炎-肠炎,结膜角膜炎,多关节炎及脑炎等,如果病原的毒力较弱,受感染的动物也可能不表现症状而呈隐性感染状态.但随着时间推移,毒株在猪体自然传代,毒力增强,在外界气候突变,饲养密度高,通风不良,卫生条件差等不利应激因素的刺激下,猪群可能突然暴发衣原体病[1],造成较严重的经济损失.     

我国部分地区肉用牛群衣原体病的血清学调查

１９９７￣１９９８年从山东、河北、河南、陕西、宁夏、甘肃、青海和四川等８省（区）部分地区采集肉用牛、肉役兼用黄牛及牦毛血清样品６４２份，用间接血凝试验检测衣原体抗体。结果：肉用牛平均阳性检出率为３２．６％（１３．６％￣７２．７％）；牦牛为１８．７％（１０．－     

我国禽衣原体病流行情况及防制措施

禽衣原体病(avian chlamydiosis,AC)是由鹦鹉热嗜性衣原体(Chlamydophila psittaci)感染禽类引起的一种接触性传染病。同义名有鹦鹉热、鸟疫,前者指鹦鹉感染的AC;后者主要指鹦鹉以外的鸟类感染的AC。实际上,从鹦鹉及非鹦鹉鸟类分离出的致病性衣原体株可以交叉感染,引起同     

流产布鲁氏菌BCSP31基因在大肠杆菌中的可溶性高效表达

设计1对引物,突变除去布鲁氏菌BCSP31(细胞表面蛋白31)基因的N端信号肽氨基酸序列,经NotⅠ和EcoRⅠ酶切后与相同处理的表达载体pGEX-4T-1连接,转化BL21(DE3)感受态细胞。酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性克隆,测序证明其阅读框完全正确。用IPTG诱导表达构建成功的阳性克隆,对产物进行SDS-PAGE和Western-blotting检测,发现表达产物出现预期分子量57 kD的融合蛋白,该蛋白能与牛流产布鲁氏菌阳性血清发生反应,进一步证明目的蛋白主要以可溶性形式存在,表达量约占总蛋白的40%,应用GST琼脂糖凝胶FF纯化可得到纯度较高的表达产物。     

奶牛布病与衣原体病混合感染的PCR诊断

本文采用PCR技术对发生在甘肃某奶源基地一奶牛场的群发性怀孕母牛流产进行病原检测,证明是此次流产由布鲁氏菌和衣原体混合感染所致.     

乳牛布鲁氏菌病病原DNA快速检测技术的研究

在国内首次建立了乳牛原乳中布鲁氏菌外膜蛋白(OMP)25ku基因套式聚合酶链反应(nested—PCR)检测技术。结果显示，本方法的特异性好，只能扩增布鲁氏菌DNA，而不能扩增同样能引起乳牛流产的鹦鹉热衣原体、弓形虫、胎儿弯杆菌DNA；乳样的检测灵敏度达50CFU／mL，重复试验35次，可重复性和稳定性均十分理想；对4批331头凝集试验阳性(24份)或阴性(307份)乳牛的乳样用本方法检测，符合率为100％。在48h内即可获得诊断结果。本方法同样可用于血液或其他流产病料中布鲁氏菌DNA的检测。     

青海牦牛BVDV E0基因的表达与抗原性检测

将青海牦牛病毒性腹泻病毒(BVDV) QHZK株的E0基因亚克隆人原核表达载体pET-32(α),构建了重组表达载体pET-32 (α)-E0,然后用重组质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞,并利用IPTG诱导蛋白表达.表达的蛋白用His-Band镍柱进行亲合层析纯化,Western-blot鉴定表达蛋白.结果显示,E0基因可在大肠杆菌中获得表达,表达产物的分子质量约为44ku,与预计的蛋白分子质量大小一致.Western-blot分析表明,该蛋白可以与BVDV标准阳性血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为BVDV亚单位疫苗的研究奠定了基础.