鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的制备及鉴定

用纯化的鸡传染性支气管炎病毒免疫BALB／c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Ag8．653融合。对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,成功获得3株能稳定传代并分泌抗鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F4F7D9、3E9G3D4、48883F8。通过间接ELISA、血凝抑制以及琼脂糖扩散等方法检测,3株单克隆抗体的腹水间接ELISA效价达10^6以上并且具有良好的特异性。     

抗番鸭呼肠孤病毒(MDRV)单克隆抗体的制备及应用

【目的】制备抗番鸭呼肠孤病毒（MDRV）的单克隆抗体,建立番鸭呼肠孤病毒病的间接免疫荧光（IFA）快速诊断方法。【方法】制备MDRV抗原,用之免疫Babl/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用IFA和ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备单克隆抗体,检测其生物学特性,应用制备的单克隆抗体建立MDRV IFA快速诊断方法。【结果】筛选到237-11,45-12和3-H3 3株特异性好并能稳定分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中45-12株单抗为IgM亚型,237-11和3-H3株单抗为IgG3亚型。45-12和3-H3 2株单抗具有ELISA特性,效价分别为10-4和10-5;237-11株单抗具有IFA特性,效价达10³。特异性测定结果显示,3株单抗仅与MDRV反应,而与正常细胞培养物（MDEF）、番鸭细小病毒（MPV）、鹅细小病毒(GPV)、禽呼肠孤病毒(ARV) 、鸭副黏病毒（PMV）和鸭肝炎病毒（DHV）均无交叉反应。应用抗MDRV单抗建立的IFA方法与病毒分离法（VI）的符合率为91%。【结论】筛选到2株具有ELISA特性、1株具有IFA特性且能分泌抗MDRV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了MDRV IFA快速诊断方法,为番鸭呼肠孤病毒病的快速诊断奠定了基础。     

血清4型禽腺病毒Fiber-2蛋白截短表达及单克隆抗体制备

【目的】获得截短表达的血清4型禽腺病毒（FAdV-4） Fiber-2重组蛋白及其单克隆抗体，为建立快速灵敏的病毒检测方法提供基础材料。【方法】对Fiber-2基因序列进行密码子优化，截取Fiber-2蛋白抗原性集中片段， PCR扩增其基因序列，连接至pET-32a（+）构建原核表达载体。将表达的重组蛋白进行纯化，并通过Western blotting验证其在大肠杆菌中的表达情况。将重组蛋白免疫BALB/c小鼠后取脾细胞与SP2/0细胞融合，利用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法筛选阳性细胞株，再利用秋水仙素裂解法、间接ELISA法和间接免疫荧光法（IFA）对其进行鉴定。【结果】成功构建Fiber-2基因截短片段的原核表达系统，获得大小约为67 kD的 Fiber-2截短蛋白，以包涵体的形式出现，经纯化后可获得单一的特异性条带，经Western blotting鉴定证明其可与FAdV-4阳性血清结合从而产生一条特异性条带。经过4次亚克隆后筛选到5株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株（2C2、 4F6、 5A5、 6G10和10B5），其抗体分泌稳定性、特异性好，诱生的细胞上清液抗体效价为1:1600~1:6400，腹水抗体效价为1:320000~1:1280000，秋水仙素裂解检测染色体数目为94~110条。2C2、 4F6和10B5杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG2b亚型，轻链为Kappa链； 5A5和6G10杂交瘤细胞分泌的抗体重链为IgG1亚型，轻链为Kappa链。5株杂交瘤细胞株与感染FAdV-4的鸡肝癌上皮细胞系 （LMH）进行IFA检测，结果均为阳性。【结论】制备的Fiber-2截短重组蛋白及单克隆抗体具有良好的反应原性和特异性，可用于FAdV-4病毒检测试剂盒研发。     

鸡IgG单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]制备鸡免疫球蛋白单克隆抗体,提高诊断鸡特异性抗体的水平。[方法]应用盐析法粗提和葡聚糖G200凝胶层析分离纯化鸡血清IgG,免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合和ELISA筛选。[结果]间接ELISA法检测C44、C45、C67和C68共4株鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞的腹水效价分别为1∶640000、1∶320000、1∶640000和1∶80000。Westernblot分析显示,C44和C45株单克隆抗体识别鸡IgG轻链,而C67和C68株单克隆抗体识别鸡IgG重链,它们与鸭、猪等血清Ig均没有反应。小鼠Ig亚类分析表明,4株细胞分泌的抗体均为IgG1型。[结论]成功获得了4株稳定分泌鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。     

牛乳铁蛋白单克隆抗体的制备

以LF(牛乳铁蛋白)为抗原对BALB/C小鼠进行免疫,利用杂交瘤技术进行融合,制备了3株抗牛LF的杂交瘤细胞,并对其浓度、上清效价、腹水效价、抗体亚类、分泌单克隆抗体稳性定、单克隆抗体分子量等进行鉴定。结果表明,抗体分泌稳定,腹水效价达到106,间接ELISA、Western blot结果显示3株单抗均与FL发生特异性结合;Ig亚类鉴定均为IgG,且轻链均为K链。     

抗犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

[目的]筛选出稳定分泌抗犬瘟热病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]用纯化的犬瘟热病毒(CDV)抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA和有限稀释法克隆杂交瘤细胞。研究了杂交瘤细胞的稳定性和染色体数,测定了单克隆抗体的效价并鉴定其特异性和亚型。[结果]经反复筛选和亚克隆后,共获得3株能稳定分泌抗CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3株单抗对CDV均有较高的特异性,与犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒均不反应。3株杂交瘤细胞的腹水效价为1∶(8 000~128 000),细胞培养上清效价为1∶(256~512),染色体数为80~100。3株单克隆抗体重链均属于IgG1,轻链均属于κ链。[结论]该研究为研制CDV快速检测试剂盒奠定了基础。     

鸡MHCⅡ类分子部分基因的原核表达及单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]制备鸡MHCⅡ类分子的单克隆抗体。[方法]在分析鸡MHCII类分子蛋白序列基础上,选取鸡MHCⅡα链基因第2～6外显子和β链基因第3～6外显子进行原核表达,以纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆和间接ELISA筛选阳性细胞株。[结果]共得到1株分泌鸡MHCⅡα链抗体和2株MHCⅡβ链抗体的杂交瘤细胞,分别命名为MHCⅡα-4、Ⅱβ6-2和Ⅱβ6-31,其腹水效价分别为1∶256000、1∶256000和1∶1280000。Western blotting分析表明其特异性强,能与相应蛋白结合。[结论]成功获得了3株稳定分泌抗鸡MHCⅡ类分子抗体的杂交瘤细胞。     

“新吉富”罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫效果评价上的应用

制备了"新吉富"罗非鱼血清免疫球蛋白IgM单克隆抗体(McAb)并进行了特性分析,以血清IgM McAb为基础,建立了IgM捕获ELISA检测方法.采用亲和层析法纯化健康"新吉富"罗非鱼IgM,纯化蛋白经SDS-PAGE检测,重链、轻链的相对分子质量分别为75~78、23~25 ku;以纯化的IgM为抗原制备IgM McAb,制备McAb杂交瘤细胞株系3株,分别命名为2H5、2D4、2B11,抗体亚型均为IgM,小鼠腹水效价分别为1.0×10~(-5)、1.0×10~(-4)、1.0×10~(-5),对IgM敏感度测定表明,2H5、2D4、2B11检测灵敏度分别为31.25、125.00、62.50 ng.以抗罗非鱼IgM McAb包被酶标板,建立IgM捕获ELISA检测方法.以无乳链球菌灭活疫苗免疫罗非鱼,受免血清按建立的IgM捕获ELISA方法检测特异性抗体,结果表明,建立的IgM捕获ELISA检测方法可应用于免疫应答抗体水平分析.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体的制备与免疫学特性测定

利用重组真核质粒pcDNA3-GP5免疫BALB／c小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0融合,经间接ELISA筛选和3次有限稀释法克隆,得到3株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株,分别命名为4C9、5D10、5F12,其中5D10的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液抗体的效价为1：64～1：1024,腹水的效价为1：3200～1：10240,IFA和IPMA的检测结果均为阳性。Western-blot检测证明,这3株McAb均针对PRRSV的GP5蛋白。中和试验表明,5D10和5F12具有病毒中和活性,中和效价分别为1：40和1：80。5D10相对亲和力大于5F12,3株细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体,表明抗GP5蛋白中和性McAb制备成功。     

重金属钼离子单抗的制备及其免疫学特性研究

为了检测水质、土壤、食品中的重金属钼离子的残留,故制备用于钼离子检测用的单克隆抗体。采用已合成的钼离子人工抗原Mo6+-ITCBE-BSA免疫Balb/C小鼠,用间接ELISA和间接竞争ELISA法筛选出备用小鼠,用细胞融合技术筛选制作单克隆抗体。结果表明:筛选出4株特异性强、敏感度高的杂交瘤细胞,其中4B3杂交瘤细胞株间接ELISA检测培养上清抗体效价为1∶(3.6×102);体内诱生法制备腹水效价为1∶(5.12×105);杂交瘤核型鉴定结果显示4B3杂交瘤细胞株染色体数目平均为99.4。4B3杂交瘤细胞株用间接竞争ELISA结果显示,IC50值为23.4μg/L,与Cr3+-EDTA的交叉反应率为81.8%,与其他金属螯合物无交叉反应。说明Mo6+-EDTA-mAb可用于Mo6+污染检测的免疫学试验。     

全价颗粒饲料饲养舍饲山羊试验

试验山羊分为3组。预试期7d，正试期60d。第1组10只大白山羊，全饲全价颗粒饲料，平均每天每只采羊食0．79千克。第2组10只波尔山羊与大白山羊杂交一代，舍饲条件与1组完全相同，平均每天每只羊采食0．91千克全价颗粒饲料。第3组10只大白山羊，每日放牧6－8h（主要牧草品种为水草），平均每天每只补饲混合精料175g。第1组增重比第3组提高118．5％（P＜0．01）。第2组料肉比比第1组低29．24％（P＜0．01）。第2组只月收入是第1组的4．02倍，第1组是第3组的18．5倍（P＜0．01）。试验结果证明，山羊完全可以舍饲，舍饲山羊的经济效益大大超过放牧山羊，同时品种改良可以大大提高饲料利用率。     

中西医结合治疗儿童咳嗽变异性哮喘62例临床研究

目的观察中西医结合治疗儿童咳嗽变异性哮喘的疗效作用.方法62例咳嗽患儿随机分为西药对照组和中西医结合治疗组,两组均采用布地萘德、特布他林雾化吸入治疗,治疗组在此基础上给予中药治疗,疗程为2周.结果两组治疗结果比较,治疗组总有效率为93.75%,对照组为83.33%,经比较,有统计学意义（P〈0.05）.治疗后复发率治疗组为9.68%,对照组为23.08%,治疗组明显低于对照组（P〈0.05）,提示治疗组疗效稳定,且优于对照组.结论中西医结合治疗可提高咳嗽变异性哮喘的疗效.     

小麦氮高效基因型的蛭石盒筛选

为探索一种简便易行的小麦氮高效基因型筛选方法,以塑料盒为栽培容器,以浇施营养液的蛭石为栽培介质,对黄淮麦区24个小麦基因型在3种氮素水平下进行了氮高效基因型的筛选。结果表明,这种蛭石盒筛选法,能有效筛选出不同氮素水平的氮高效基因型,利用该方法筛选出的低氮高效基因型有石家庄8号、邯6172和科农199,高氮高效基因型有矮抗58和092-38,氮不敏感基因型有092-39,其中石家庄8号为典型的低氮高效型品种,矮抗58为典型的高氮高效型品种,筛选结果与材料的田间表现比较一致。这种蛭石盒筛选法不但操作简单,而且筛选效果明显,可应用于小麦营养高效研究。     

ND疫苗免疫益生素雏鸡vNDV攻击后外周血液免疫变化

应用免疫SPA菌体花环法、间接ELISA法、酸性非特异性酯酶染色法较全面系统地检测了新城疫(ND)疫苗免疫应用益生素雏鸡新城疫强毒(vNDV)攻击后,其外周血液的T、B淋巴细胞数量,IgG、IgM、IgA含量的动态变化及免疫保护率。结果表明,ND免疫应用益生素雏鸡vNDV攻击后,不但其外周血液的上述被检指标较未饲喂益生素的相应对照雏鸡不同程度增加,而且其免疫保护率也明显提高,表明益生素可增强雏鸡外周血液对ND疫苗免疫的体液和细胞免疫应答。并且益生素Ⅰ组又略强于益生素Ⅱ组,说明益生素Ⅰ的免疫增强效果优于益生素Ⅱ。     

红藤煎加减灌肠联合小剂量甲硝唑治疗滴虫性阴道炎75例临床分析

目的观察红藤煎加减灌肠联合小剂量甲硝唑治疗滴虫性阴道炎的临床疗效。方法 150例滴虫性阴道炎患者随机分为治疗组和对照组,每组75例。对照组应用小剂量甲硝唑治疗,治疗组在对照组基础上应用红藤煎加减灌肠治疗,7d一个疗程。比较2组治疗前后阴道乳酸杆菌阳性率、阴道分泌物改善、临床疗效和复发率。结果治疗后阴道乳酸杆菌检测阳性率高于本组治疗前(P0.05),且治疗组治疗后高于对照组治疗后,差异有统计学意义(P0.05);治疗组阴道乳酸杆菌阳性率、阴道分泌物改善率、临床疗效均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);治疗组复发率低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论红藤煎加减灌肠联合小剂量甲硝唑治疗滴虫性阴道炎可提高治愈率,降低复发率,值得临床推广。     

滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶的研究

[目的]探索滤纸壳聚糖膜固定乙酰胆碱酯酶(AChE)的最佳条件。[方法]以滤纸壳聚糖膜为载体,戊二醛为交联剂,牛血清白蛋白(BSA)为保护剂,进行AChE的固定。并对固定化酶的理化性质进行研究。[结果]固定AChE的最佳条件为将50μl 150 U/mlAChE液,50μl 5%(V/V)戊二醛溶液,100μl 1%(W/W)BSA,pH 8.0的0.2 mol/L的PBS缓冲液配制成1 ml酶液,滤纸壳聚糖膜浸于该酶液4℃固定8 h。固定化酶的最适反应温度为37℃,最适pH为8.0,能够重复利用4次以上。[结论]该研究为利用AChE快速检测蔬菜水果中有机磷农药残留提供了理论依据。     

Coping with fraud

The tardiness of actions by Harvard officials when faced with confessed fraudulent research conducted by John Darsee is contrasted with the more rapid responses by authorities in the cases of William T. Summerlin (Sloan-Kettering) and Vijay Soman (Yale).