基于3种抗原的融合表达蛋白建立牛分枝杆菌抗体ELISA检测方法

为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌Rv3403c、CFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PCR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-Rv3403c-CFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：通过SDS-PAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白Rv3403c-CFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。     

母猪繁殖障碍疾病防制措施的效果观察

母猪繁殖障碍疾病主要由伪狂犬病、细小病毒感染、非典型猪瘟、日本乙型脑炎、猪繁殖障碍与呼吸综合征、布氏杆菌病和衣原体等引起。对A、B 2种猪场进行免疫抗体检测、制定合理的免疫程序和采取其他防制措施之后 ,母猪受胎率分别提高了 1 6 3 %和 2 8% ;流产率下降了6 8%和 4 % ;死胎率下降了 6 6 %和 3 3 % ,每窝产仔数提高了 2 7头和 0 2头     

不同来源鸡大肠杆菌致病性比较研究

分别从鸡场环境、正常鸡体和病死鸡中分离大肠杆菌 ,进行致病性试验 ,并鉴定致病性较强的菌株的血清型。结果表明 ,来源于死鸡、死胚中的大肠杆菌致病性最强 ,其次是来源于鸡体喉部和空气中的大肠杆菌 ,而来源于泄殖腔、精液及种蛋表面的大肠杆菌致病性最弱。分离的致病性大肠杆菌共有 1 8个血清型     

禽流感新型疫苗的研究进展

上个世纪末,亚洲一些国家与地区家禽中爆发了高致病性禽流感,并能感染人群,引起了社会的恐慌和极大的关注,造成了养禽业的巨大损失,也进一步推动了禽流感疫苗的研究。本文从基因工程疫苗、DNA疫苗、反向遗传技术的应用等方面对目前新型禽流感疫苗的研究进行综述。     

两性霉素B对猪流行性腹泻病毒入胞的抑制作用研究

通过测定两性霉素B(amphotericin B,AmpB)的细胞毒性、半数抑制浓度以及利用Western blot、间接免疫荧光、空斑形成、内吞等试验方法探究AmpB对猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的抑制作用及其分子机制。结果显示：20μmol/L浓度范围内,AmpB对Vero-E6和Marc145细胞毒性极低;在Vero-E6细胞,AmpB对PEDV HLJBY和CV777毒株的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为0.5和0.3μmol/L,在Marc145细胞,AmpB对HLJBY和CV777的IC₅₀均为0.3μmol/L;AmpB处理几乎能阻断病毒感染细胞;AmpB主要抑制PEDV入胞和细胞巨胞饮作用。本研究为研制抑制PEDV或广谱抑制冠状病毒药物提供了新线索。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白中和性单克隆抗体的制备与免疫学特性测定

利用重组真核质粒pcDNA3-GP5免疫BALB／c小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2／0融合,经间接ELISA筛选和3次有限稀释法克隆,得到3株能稳定分泌抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的单克隆抗体（McAb）杂交瘤细胞株,分别命名为4C9、5D10、5F12,其中5D10的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液抗体的效价为1：64～1：1024,腹水的效价为1：3200～1：10240,IFA和IPMA的检测结果均为阳性。Western-blot检测证明,这3株McAb均针对PRRSV的GP5蛋白。中和试验表明,5D10和5F12具有病毒中和活性,中和效价分别为1：40和1：80。5D10相对亲和力大于5F12,3株细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体,表明抗GP5蛋白中和性McAb制备成功。     

特异性识别K1荚膜大肠杆菌的噬菌体PNJ1809-36生物学特性及全基因组分析

本研究以K1荚膜大肠杆菌DE058（avian pathogenic Escherichia coli）为宿主菌,从鸡粪中分离烈性噬菌体PNJ1809-36并对其进行生物学特性的研究和基因组测序及分析。将噬菌体PNJ1809-36进行分离纯化,通过形态学观察、最佳MOI测定、一步生长曲线测定、温度和酸碱耐受性测定、体外裂解能力测定以及全基因组测序及分析来研究该噬菌体的生物学特性和基因组特征。结果显示：噬菌体PNJ1809-36能够形成清晰透明的噬菌斑,其电镜照片显示为具有收缩尾部的肌尾科噬菌体;宿主谱分析结果显示,该噬菌体能够特异性裂解具有K1荚膜的大肠杆菌;最佳MOI为0.01;一步生长曲线结果显示,其潜伏期为10 min,爆发期为40 min;噬菌体PNJ1809-36在40和50℃下存活良好,60℃ 30 min可使噬菌体完全失活;噬菌体在pH3~11之间均可存活,最适pH为6;体外裂解试验表明,该噬菌体可在6 h内完全抑制宿主菌的生长。经基因组测序与分析,噬菌体PNJ1809-36基因组全长为152 343 bp,GC含量为39.11%,含有277个开放阅读框（ORF）,11个tRNA基因。同源性分析显示其与早期发现的K1特异性的短尾噬菌体（如K1F、K1E）的同源性较低,而与噬菌体nepoznato、PVP-SE 1和phAPEC8等K1特异性噬菌体同源性较高,基因序列相似性达90%。噬菌体PNJ1809-36是一株特异性识别K1荚膜大肠杆菌的烈性噬菌体,属于肌尾科噬菌体新的系统发育分支。其针对K1荚膜的特性,提示该噬菌体在鉴定K1型大肠杆菌和治疗K1型大肠杆菌引起的疾病方面存在潜力。     

鸡源大肠杆菌胞外蛋白酶的检测

用脱脂奶琼脂平板法检测了 1 0 0株大肠杆菌的胞外蛋白酶。结果 ,在 88株鸡源株中 ,阳性者为 2 2株( 2 5%) ,1 2株参考株中有 3株为阳性 ( 2 5%) ,显示较高比例的大肠杆菌产生胞外蛋白酶这一致病因子。另外 ,用嗜水气单胞菌 J-1株的胞外蛋白酶 ( ECPase54)抗血清作 Dot-ELISA,检测上述 1 0 0株大肠杆菌 ,3株鸡源株表现阳性 ,其脱脂奶琼脂平板法检测结果亦为阳性。     

如何在新形势下做好大学生党员发展工作

新形势下学生党员发展工作成为高校党建工作中的重点，各高校必须提高对学生党员发展工作的重要性的认识，规范发展程序，营造良好的培养氛围，建立多样化的培养渠道。     

食源性人兽共患病病原活菌检测技术研究进展

食源性人兽共患病已成为威胁人类健康、食品安全和畜牧业发展的重要因素,因此发展快速、准确、高效的人兽共患病病原活菌检测技术非常必要。目前已有多种针对活菌的检测方法。本文比较分析了目前正在使用或开发的人兽共患病病原活菌检测技术。同时,利用PMA-q PCR检测技术,进行了副溶血性弧菌检测效果验证,认为该检测技术兼具检测速度快、灵敏度高、特异性强、成本低等优点,作为一种新型的活菌快速检测技术,具有广阔的应用前景。另外,一种新型的铂化合物检测技术也被证明可用于活菌检测。