新城疫病毒La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒M41株低免疫鸡胚同胚培养研究

为研究新城疫病毒(NDV)La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株在低免疫鸡胚中进行同胚接种培养的可行性,通过将不同稀释倍数的La Sota株和M41株接种同一低免疫鸡胚,分别测定收获尿囊液La Sota株和M41株含量,确定最佳的稀释倍数以及适宜的培养温度和培养时间。结果显示:La Sota株和M41株以10 000∶5 000的比例稀释,培养96 h病毒含量和收获量最佳,La Sota株含量可达到109.17EID50/0.1 m L,HA效价为1∶1 024,M41株含量可达到106.50EID50/0.1 m L。接种后孵育温度为36.5℃时,每胚收获量比37℃培养增加了1.0～1.2 m L。按照此工艺生产病毒制备疫苗免疫SPF鸡,NDV和IBV抗体均符合国家标准要求。试验探索并优化了La Sota株和M41株在低免疫鸡胚中同胚接种的培养条件,为大规模抗原生产提供数据支持。     

不同来源鸡传染性支气管炎病毒M41株病毒特性的分析比较

为了比较2株不同来源的鸡传染性支气管炎病毒(M41)毒株的生物学特性、免疫原性及S1基因同源性。将TONG-IBV和MOU-IBV分别接种10日龄SPF鸡胚,观察鸡胚病变特点、计算病毒含量(EID50)、制备灭活疫苗进行免疫抗体效价检测,进行S1基因测序分析。试验结果表明:接种TONG-IBV株后鸡胚出血较严重,蜷缩程度较轻,接种MOU-IBV的鸡胚呈典型的蜷缩状;MOU-IBV组抗体效价高于TONG-IBV组抗体效价;同源性分析结果显示,MOU株S1与M41参考株S1(GenBank序列号MK937830.1)的同源性为99.7%,高于TONG株S1与M41参考株S1的同源性99.0%。以上结果显示,不同来源M41疫苗株的病毒特性出现了多样性变化。     

鸡传染性支气管炎H120、W93株活疫苗生产工艺的改进

分别以鸡传染性支气管炎病毒(In-fectiousbronchitisvirus,IBV)H120株、W93株不同病毒量接种10、12日龄SPF鸡胚,并改变后孵化温度生产抗原液,接种后不同时间收获胚液,根据鸡胚的早死率以及胚液的收获量、病毒滴度,选择最佳的生产工艺。结果表明,IBVH120株、W93株以102.7EID50/0.1mL的病毒量接种12日龄鸡胚尿囊腔,在34.5℃孵育35h,可较为显著地降低早死胚率,提高产毒量,且抗原液病毒滴度符合疫苗制备规程的要求。     

鸡胚母源抗体对鸡新城疫病毒增殖影响的研究

试验用SPF鸡胚和普通鸡胚分别测定鸡新城疫LaSota两种不同毒株的EID50:LaSota株Ⅰ在SPF鸡胚的EID50为10-7.75,普通鸡胚的EID50为10-7.25;LaSota株Ⅱ在SPF鸡胚的EID50为10-4.75,普通鸡胚的EID50为10-4.25。两种不同LaSota毒株在SPF鸡胚中的毒力普遍比在普通鸡胚中的毒力强,说明鸡胚母源抗体能影响鸡新城疫病毒的增殖,进而指导疫苗的生产。试验用SPF鸡胚和普通鸡胚分别测定鸡新城疫LaSota两种不同毒株的EID50:LaSota株Ⅰ在SPF鸡胚的EID50为10-7.75,普通鸡胚的EID50为10-7.25;LaSota株Ⅱ在SPF鸡胚的EID50为10-4.75,普通鸡胚的EID50为10-4.25。两种不同LaSota毒株在SPF鸡胚中的毒力普遍比在普通鸡胚中的毒力强,说明鸡胚母源抗体能影响鸡新城疫病毒的增殖,进而指导疫苗的生产。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制

为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。     

一株H9N2亚型禽流感病毒鸡胚培养工艺研究

为了探讨H9N2亚型禽流感病毒在鸡胚上最佳培养工艺,试验采用H9N2亚型禽流感病毒分离株以不同稀释倍数接种不同鸡胚(SPF及普通鸡胚)、不同日龄鸡胚及不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备出的鸡胚尿囊液的产量及病毒效价。结果表明:H9N2亚型禽流感病毒接种无禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~(4 )～1×10~5倍,接种带有禽流感病毒(H9亚型)HI母源抗体鸡胚的最佳病毒稀释倍数为1×10~3～1×10~4倍,最佳接种日龄为10日龄,最佳培养时间为96～120 h。说明采用优化的鸡胚培养方法生产H9N2亚型禽流感病毒可以得到高质量、高产量的病毒液。     

鸡传染性支气管炎病毒对新城疫病毒的干扰作用观察

为观察鸡传染性支气管炎病毒（IBV）HN99株对新城疫病毒（NDV）增殖的干扰作用,该试验采用不同浓度的IBV标准株M41和地方株HN99与鸡新城疫病毒（NDV）分别按不同接种顺序同胚增殖,利用病毒血凝试验（HA）测定NDV的效价,观察IBV对NDV的干扰作用,从而为检测IBV地方株HN99提供方法,也为同胚增殖两种病毒提供一系列的数据参考。试验结果表明,鸡传染性支气管炎病毒地方株HN99对NDV的干扰作用与其浓度和接种顺序有关。     

传染性支气管炎病毒在不同日龄SPF鸡胚上的增殖效果

目前预防传染性支气管炎(IB)最佳方法是传染性支气管炎疫苗免疫,因此,高质量的疫苗是控制该病关键所在。本试验采用10日龄、11日龄、12日龄3组不同日龄SPF鸡胚增殖传染性支气管炎病毒(IBV),以确定鸡IBV增殖最适宜的鸡胚日龄,为生产高质量疫苗、降低成本、提高效益提供参考。1材     

一株鸡传染性支气管炎病毒的鉴定及S1基因序列分析

将分离到的一株疑似鸡传染性支气管炎病毒接种SPF鸡胚增殖,通过致鸡胚矮小化试验、红细胞凝集试验、对新城疫病毒增殖干扰试验、动物回归试验及RT-PCR分子鉴定,结果证实该病毒为鸡传染性支气管炎病毒(IBV)。应用MEGA5分析软件,与Gen Bank上IBV常见疫苗株、流行毒株和部分参考株进行序列比对,其S1基因序列与近年来我国流行毒株同源性较高,为95%~99%,与传统疫苗株H120、H52、M41和W93同源性较低,仅为77%~79%。     

科技动态

可用于鸡胚接种的传染性支气管炎病毒疫苗近来,英国科研人员研究了采用重组传染性支气管炎病毒(IBV()表达Beaudette突出蛋白(Beau-R)的Beaudette株和M41毒株(BeauR-M41(S)))制备的疫苗接种18日龄鸡胚的应用效果,以期开发出可用于卵内接种的IBV商业疫苗。通过观察接种后的孵化率,雏鸡鼻渗出物的产生以及气管纤毛活性来了解这两种重组病毒的病原性。与商业化IBV疫苗相比,当采用卵内接种时,Beau-R和BeauR-M41(S)两个疫苗株都没有导致孵化率下降,并且雏鸡鼻内无渗出物排出,气管纤毛上皮仅出现轻微损伤。在一定剂量的M41株病毒攻击下,…     

鸡肾型传染性支气管炎(HK株)活疫苗生产条件的探讨

采取不同浓度的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)接种不同日龄的鸡胚,在不同时间内收获鸡胚液。根据收获时鸡胚的死亡情况、胚液的收获量及胚液的病毒含量,优选IBV活疫苗生产的最佳条件。结果表明,将IBV调整为102.0~103.0EID50/0.1ml,尿囊内接种于12日龄鸡胚中,每胚0.1ml,37℃孵育33h收获,胚液的产毒量和收获量最高。     

鸡传染性支气管炎病毒LH2/01/10的分离鉴定

2001年在我国黑龙江省某鸡场疑似鸡传染性支气管炎的发病鸡群中，分离到一株病毒，将该病毒接种10日龄SPF鸡胚，取72h的尿囊液进行电镜观察并用1％胰酶处理，结果发现尿囊液中存在典型的冠状病毒，用胰酶处理过的尿囊液能凝集SPF鸡的红细胞，初步鉴定为鸡的传染性支气管炎病毒。将该病毒尿囊液再次接种10日龄SPF’鸡胚，通过病毒对鸡胚的致病作用、病毒超微形态特征以及病毒凝集鸡红细胞的特性等对该毒株进行研究，结果表明：经胰酶处理后的病毒尿囊液可凝集鸡红细胞。鸡胚的第二代病毒尿囊液(命名为LH2,／01／10)分别接种1日龄和15日龄的SPF鸡，发现对不同日龄的鸡表现不同的致病性，对1日龄接种鸡和同笼饲养的同居对照鸡致病力高，发病率为11／11，致死率分别为4／6和2／5；15日龄接种和同居感染鸡发病率为9／9，致死率分别为1／5和1／4。实验应用反转录一聚合酶链式反应技术对LH2／01／10的膜蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定，结果表明该基因具有IBVM基因的共有分子特征．与IBV标准株M41的M基因核苷酸的同源性为90％，氨基酸的同源性为91％。这从分子水平进一步证实引起鸡群死亡的病毒为鸡传染性支气管炎病毒。     

不同病毒在SPF鸡胚与普通鸡胚繁殖性能的比较

利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平,利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明:普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高,在SPF鸡胚上新城疫LaSota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍,尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上熏且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。     

不同病毒在SPF鸡胚与普通鸡胚繁殖性能的比较

利用HI和AGP方法检测普通种蛋中ND和IBD的卵黄抗体水平，利用HA和EID50检测方法比较多种病毒(如NDV、IBV、IBDV及AEV)在SPF鸡胚与普通鸡胚上繁殖性能的差异。研究结果表明：普通种蛋中ND及IBD的卵黄抗体水平普遍较高，在SPF鸡胚上新城疫La Sota病毒繁殖量是普通鸡胚的5～20倍，尿囊液血凝效价平均高2.0～2.5滴度。MA5毒株在SPF胚病毒液EID50为普通鸡胚的10倍以上，且每次检测的结果比较接近。IBDV、AEV等病毒在普通鸡胚上几乎不能增殖。     

悬浮培养和鸡胚尿囊液抗原制备的H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较试验

为了探讨悬浮培养和鸡胚尿囊液培养得到的H9亚型禽流感病毒(AIV)抗原制备的疫苗的免疫效力,试验用3株H9亚型AIV株分别接种微载体悬浮培养的MDCK细胞制备3种悬浮培养的细胞疫苗抗原,以3株H9亚型AIV株接种10日龄SPF鸡胚制备3种鸡胚尿囊液抗原,测定6种抗原液HA效价和鸡胚半数感染量(EID50);分别使用6种抗原液制备灭活疫苗,免疫21日龄SPF鸡,并在免疫后第21天采血测定HI抗体水平,采血后进行攻毒并在攻毒后第5天进行病毒分离试验。结果表明:两种方式制备的AIV抗原HA效价为7~9 lb,鸡胚半数感染量为1×106.9~7.9EID50,疫苗免疫后第21天用同源毒株作为工作抗原测定的免疫鸡HI效价差异不大,用异源毒株测定时有一定差异;两种方法得到的抗原制备的疫苗均能获得很好攻毒保护。     

1株肾型鸡传染性支气管炎病毒的鉴定

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)具有不同致病特性,将IBV XDC-2株接种9日龄SPF鸡胚培养,可引起鸡胚死亡和出现侏儒胚,病毒EID50达5×10-5.33/mL。将IBV XDC-2株接种18日龄SPF鸡,饲养观察14 d,病鸡临床症状表现为:精神沉郁,羽毛凌乱,双翅下垂,轻微腹泻,多数拉白色水样稀粪。病死鸡出现肾肿大、呈花斑状、大量尿酸盐沉积。鸡发病率为100%,死亡率为25%。死亡鸡肺脏、肾组织制作组织切片,发现病理变化明显,主要为:肾小管扩张,上皮细胞呈玻璃样变性,部分管腔内可见坏死脱落之上皮细胞,于肾间质可见大量单核细胞浸润,肾间质有充血、出血现象;肺内动脉、毛细血管充血,淋巴细胞浸润。死亡鸡肺脏、肾组织接种鸡胚分离病毒,RT-PCR检测结果为阳性,表明该分离株为鸡传染性支气管炎病毒,具有很强的嗜肾性。     

鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LHLJ/04V的分离鉴定及致弱的初步研究

从黑龙江省某鸡场发病鸡群的肾脏中分离到一株病毒,通过病毒致SPF鸡胚病变特征、对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征以及RT-PCR鉴定等方面的研究,表明该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,并命名为CK/CH/LHLJ/04V。通过对该病毒基因型分析以及对SPF鸡致病性试验发现该病毒为我国近年来流行的一类重要IBV的代表。将该毒株在SPF鸡胚连续传代110代(P110),取不同代次毒进行动物实验。结果显示,该毒株对SPF雏鸡的致病力随鸡胚传代次数的增加而逐渐降低。P110代毒以105.0 EID50/0.1 mL的剂量通过点眼滴鼻接种15日龄SPF雏鸡,鸡群发病率和死亡率均为0。不同代次毒接种SPF鸡对同源毒株P3代强毒的攻击均具有100%保护性。实验表明,IBV毒株CK/CH/LHLJ/04V P110对SPF雏鸡已无致病性,但仍具有良好的免疫原性,可作为研制IB弱毒疫苗的候选毒株。     

表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用

将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4 、TCRγδ T淋巴细胞比例显著高于对照组,而CD8 T淋巴细胞比例低于对照组。免疫后4周用1×103.0EID50的传染性支气管炎病毒LX4株进行攻毒,结果表明,重组鸡痘病毒免疫组与IB弱毒疫苗免疫保护率分别为12/16和13/16;攻毒后喉拭子IBV分离结果表明,IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组的IBV气管排毒时间比对照组缩短了2 d,病毒的分离率显著低于对照组;肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾和肝脏的病理损伤也较对照组轻,而且病变持续时间缩短。     

鸡传染性支气管炎H株和D株疫苗比较研究

鸡传染性支气管炎是严重危害养鸡业的疾病之一，在广东对本病的主要兽医防疫措施是接种H株或D株疫苗。本文对这两株疫苗及其应用效果进行比较，现将结果报告如下。1试验材料1．1鸡传染性支气管炎疫苗病毒（IBV）H120株（自中国兽药监察所）、D41株（自广东兽医研究所）和B1系新城疫毒（自南京药械厂），种毒原液均10倍稀释后经尿囊腔接种SPF鸡胚0．2ml／只，37℃培养36小时，收取尿囊液备用。1．2鸡胚蛋购自中国兽药监察所（SPF蛋）和仲凯农技学院（非免疫蛋）。1．3试验小鸡为非免疫1日龄石歧杂黄鸡，购自广州市郊。2方法和结果2．1…     

肾型鸡传染性支气管炎病毒新疆株的生物学特性研究

通过致病力试验和免疫原性检测对肾型鸡传染性支气管炎病毒新疆株(IBVXJ-2株)进行生物学特性的研究。致病力检测结果证实,IBVXJ-2株可以致SPF鸡胚卷缩、僵化,EID50达10-8.3/0.1 mL;鸡胚肾细胞在接毒后96 h出现皱缩、脱落等明显的细胞病变;对20日龄非免疫鸡攻毒后第2天,试验鸡出现甩鼻、伸颈张口呼吸等症状。将IBVXJ-2株抗原经乳化后接种1月龄非免疫鸡,在接种后22 d和44 d用ELISA和HI检测到了IBV特异性抗体。