流式细胞仪在猪性别控制中的应用初探

在国内首次报道使用流式细胞仪对猪进行性别控制研究。猪精液通过流式细胞仪进行X、Y精子分离,分离精子经过数小时保存后,用于陆川母猪输卵管授精,最后产出健康仔猪。试验结果表明:①第1次(2005-10-14)精子分离的纯度为:X88%、Y83%;活力为X35%、Y21%。第2次(2006-01-13)纯度为:X70%,Y68%;活力为:X52%,Y36%。②该试验中母猪受孕率为25%,未受孕者仍然可在生产条件下继续繁殖。③受孕母猪(1头)产出健康仔猪5头,出生成活率100%,大小均匀,活力良好,哺乳期(28 d断奶)平均日增重与生产群极为接近(151.43 g1、48.93 g),但产活仔数低(生产群为8.4头/窝)。④仔猪雌性率为60%。试验结果初步表明:在该实验室现有条件下,使用流式细胞仪分离的X、Y精子,母猪通过输卵管受精可以产出健康仔猪;精子分离对仔猪哺乳期生长无明显影响;对性别比例有一定调控作用。     

PAF对长白猪精子活率及顶体反应率的影响

将人工采集的长白猪精液分为六组,其中一组为空白对照组,其余五组为实验组,分别加入5、10、25、50和100ns/ml的血小板活化因子(plarelet—activating factlr,PAF),于37℃恒温水浴锅中温育5,15,25,35,45,60min。显微镜下检测精子活率,同时作精子涂片,经固定染色后测算顶体反应率(Acrosomcreactloll,AR)。结果表明,(1)、PAF浓度为10ng/ml的实验组与对照组相比,在温育15—60rain期间,精子活率都极显著提高(P<0．01)；(2)、PAF浓度为5ng/ml的实验组与对照组相比,在温育25～45min期间,精子活率都极显著提高(P＜0．01)；(3)PAF浓度为5、10、25和50ng/ml组的精子在温育60min内顶体反应率均极显著高于对照组(P＜0．01)；(4)浓度为100ng/ml的PAF组与对照组相比,顶体反应率差异不显著(P＞0．05),表明一定浓度的PAF可提高长白猪精子的活率及顶体反应率。     

马鹿XY精子分选及冷冻精液制备试验

为获得分选马鹿X、Y冷冻精液,对电刺激采集的15只马鹿精液经过7h长距离运输,流式细胞仪分离、冷冻,解冻后精液重分析和品质鉴定。结果显示,常规冻精和X、Y型冻精性别比分别为50%、93.11%和95.18%,常规冻精与X、Y型冻精组间差异显著(p<0.05);活率分别为0.45±0.04、0.55±0.04和0.53±0.03,常规冻精与X、Y型冻精组间差异不显著(p>0.05);存活指数分别为0.05、0.05和0.25,常规冻精与X、Y型冻精组间差异显著(p<0.05);顶体完整率分别为72.6±1.0%、74.6±0.5%和72.2±0.6%,常规冻精与X、Y型冻精组间差异不显著(p>0.05)。结论:马鹿XY分选冷冻精液性别比和品质达到性别控制人工授精的要求。     

F小体检测奶牛XY精子纯度

为了建立F小体检测奶牛精子纯度的方法,试验采用正交设计检测精子F小体不同的胰酶消化时间（40min,60min,80min）、喹吖因染色浓度（0．4％,0．5％,0．6％）和染色时间（10min,20min,30min）的优化方案,并且对分选X、Y精子及常规精液的F小体进行染色检测,评价分选X、Y精子的纯度。结果显示分选x、Y精子及常规精液在0．25％胰酶消化20min后0．5％喹吖因染色10min的条件下,纯度分别为92．7％、92．5％、48．3％与对应精子的理论纯度（93．3％,93．7％,50％）差异均不显著（P〉0．05）。因此本实验建立的F小体检测法可用于XY精子纯度的检测。     

除精浆提高冷冻精液品质的实验研究

采用离心洗涤法去除精浆后,对精液进行冷冻处理。发现:1、除精浆精子冻后的活率、Ⅰ类顶体率和精子畸形率与未除精浆组存在显著差异(P<0．05);2、除精浆使稀释后精液精浆中GOT和LDH活性明显升高(P<0．05)。从平衡后到解冻后各组GOT和LDH活性都呈上升趋势。但除精浆试验组比未除精浆试验组上升缓慢;3、除精浆试验组精子的穿卵率、卵内平均精子数都显著高于未除精浆试验组(P<0．05);4除精浆离心洗涤液用生理盐水和脱脂乳-卵柠液．两者之间无显著差异(P>0．05)。     

流式细胞仪分离工作犬XY精子的研究

[目的]探索适用于犬性别控制的流式细胞仪分离精子的方法。[方法]采集昆明犬和德国牧羊犬的精液,采用不同浓度(6、8、10、12μl/ml)的Hoechst 33342对精液进行染色,探讨不同浓度的荧光染料Hoechst 33342及公犬个体对精子分离效果的影响。[结果]当Hoechst 33342浓度分别为6、8、10μl/ml时,X和Y精子的DNA差异不能被分辨成双峰,只有当Hoechst 33342为12μl/ml时,X/Y双峰能有效并稳定地分离。不同公犬的鲜精死精率与X/Y精子分离速度呈明显负相关性,而分离准确率则与鲜精死精率无明显相关性。[结论]当Hoechst 33342浓度为12μl/ml时,流式细胞仪能将警犬X、Y精子成功分离。选择适宜的种公犬对提高精子的分离效率和分离精液的品质都有重要意义。     

实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响

【目的】探索实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【方法】采用实时精子分离系统对精液进行分离优选,液氮冷冻法制作细管冻精,以未分离精液为对照,检测实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【结果】分离优选精子解冻后,精子活率、顶体完整率、质膜完整率、正常染色质率均明显高于对照组(P<0.01);分离组精子的正常形态率也显著高于对照组,且未受冷冻-解冻过程的影响(P>0.01);分离过程对精子密度也未产生显著影响(P>0.01)。【结论】实时精子分离系统可以显著改善猪冷冻精液的品质。     

人工诱导盘鲍异源雌核发育多倍体的初步研究

通过预实验,观察和了解在24．8℃下九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,及其受精卵第一极体和第二极体出现的时间．采用不同浓度的乙烯脲失活九孔鲍精子的遗传物质,确定其最佳处理浓度和处理时间．遗传物质失活的九孔鲍精子和盘鲍卵子授精,用CB进行不同持续处理时间抑制受精卵第一极体和第二极体出现的方法诱导多倍体．实验结果表明,在水温24．8℃下,作为失活九孔鲍精子遗传物质的乙烯脲,当其质量分数为0．5‰和处理时间为10min是比较适宜的;用遗传物质失活的九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,在授精后10min,用浓度为1．0mg·dm-13的cB持续处理受精卵24min,表观三倍体率达65％以上,表观四倍体率达5％左右．稚鲍的倍性检查中,雌核发育多倍体占总多倍体数的80％,杂交多倍体占20％．盘鲍异源雌核发育的三倍体率达到93％,四倍体率为3％左右．     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

大豆卵磷脂替代卵黄的稀释液低温保存绵羊精液效果

为研究大豆卵磷脂稀释液对绵羊精液低温保存效果,用5个浓度的大豆卵磷脂(A1,1. 25%; A2,2. 5%; A3,5%;A4,7. 5%; A5,10%)替代TRIS专利稀释液(C组)中的卵黄进行绵羊精液低温保存试验,在保存第0 d、1 d、3 d、6 d、9 d、12 d对精子活率和顶体完整率进行检测,大豆卵磷脂稀释液效果最优组和C组的保存第9 d的精液进行人工授精试验。结果表明:A1组精液保存效果自保存第6 d起显著高于其他添加组(P 0. 05),且在保存第9 d精子活率为0. 53±0. 06,符合鲜精输精国家标准; A1组与C组在各时间点精子活率、顶体完整率差异均不显著(P 0. 05),且A1组与C组精子在第9 d活率都高于0. 5,顶体完整率高于60%; A1组与C组的受胎率64. 3%(72/112)、65. 6%(80/122)差异不显著(P 0. 05)。证明添加1. 25%浓度大豆卵磷脂的稀释液能够进行绵羊精液低温长时间有效保存。     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传．     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的纯化技术

应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

黑豆不同部分馏油的体外抗氧化性比较

[目的]通过体外抗氧化体系比较黑豆不同部分馏油抗氧化性活性。[方法]通过正交试验优化索氏提取黑豆馏油的最佳工艺,提取黑豆不同部分馏油;研究黑豆不同部分馏油对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)的清除能力。[结果]在样品浓度为1.0 mg/mL时,黑豆不同部分馏油对·OH的清除率分别为全豆馏油83.9%、豆黄(黑豆去皮部分)馏油64.8%、豆皮馏油17.3%,对DPPH·的清除率分别为全豆馏油41.3%、豆黄馏油33.2%、豆皮馏油77.9%。[结论]黑豆不同部分馏油均具有较好的抗氧化性,是良好的天然抗氧化剂。黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油,对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。     

干旱对合丰42不同部位叶片发育的影响

在垄作、密植两种栽培方式的条件下,研究干旱对大豆不同部位叶片发育的影响。结果表明：无论垄作还是密植,干旱严重影响大豆叶片不同部位叶绿素含量、叶面积及周长的大小、不同部位叶长、叶宽及比值、叶片形状因子等。影响整个植株的生长发育,进而影响作物产量。     

参与式农业基地建设行动方案设计

为了编制实用性强的基地建设行动方案,首先,确定参与式发展的主体,搭建一个“决策框架”;其次,针对行动目标,提出不同参与主体,如管理者、农民、消费者等团队与个人的目标及行动内容;最后,工作应向重塑伙伴式合作关系,挖掘农民自我发展潜力,完成三大角色的转换,打造农业基地文化等方向推进。     

切花菊耐热性鉴定方法研究

以8个切花菊品种为材料,通过对离体叶片进行50℃高温胁迫后,采用电导法、电阻抗图谱法测定电导率、电阻,并对大田栽培植株进行田间高温胁迫试验,比较品种间的耐热性。结果表明:电导法测得的50℃直接相对电导率、修正相对电导率和电阻抗图谱法测得的胞外电阻在品种间有明显差异,但与田间高温胁迫法测定的热害指数不完全一致。电导法和电阻抗图谱法都可以作为测定切花菊耐热性的方法,但需要结合田间耐热性观察。     

探究板栗的科学贮藏方法

板栗属壳斗科栗属(Castanea mollisima Blume),其种子属于顽拗型种子,不耐贮藏。基于近年来板栗贮藏保鲜技术研究成果,从合理采收、贮前处理、贮藏方法等方面进行论述。