鸡减蛋综合征、新城疫二联灭活苗的免疫性试验

在本试验中，比较了每头份疫苗含不同血凝单位病毒的免疫效果，结果每头份合ＥＤＳ病毒２０００血凝单位、ＮＤ病毒分别含２５０血凝单位和３６０血凝单位的疫苗，免疫后ＮＤ抗体峰值分别达１１．５ｌｏｇ２和１１．８ｌｏｇ２，ＥＤＳ抗体峰值达９．５ｌｏｇ２和９．８ｌｏｇ２。用每头份合ＥＤＳ病毒２０００血凝单位和ＮＤ病毒２５０血凝单位的疫苗，免疫接种不同ＮＤ抗体水平的三群试验鸡，结果各试验鸡群的ＮＤ抗体峰值无明显差别，ＥＤＳ抗体峰值也无明显差别。     

鸡减蛋综合征,新城疫二联灭活苗的免疫性试验

在本试验中，比较了每头份疫苗含不同血凝单位病毒的免疫效果，结果每头份含ＥＤＳ病毒２０００血凝单位，ＮＤ病毒分别含２５０血凝单位和３６０血凝单位的疫苗，免疫后ＮＤ抗体峰值分别达１１．５ｌｏｇ２和１１．８ｌｏｇ２，ＥＤＳ抗体峰值达９．５ｌｏｇ２和９．８ｌｏｇ２用每头份含ＥＤＳ病毒２０００血凝单位和ＮＤ病毒２５０血凝单位的疫苗，免疫接种不同ＮＤ抗体水平的三群试验鸡，结果各试验鸡群的ＮＤ抗体峰值无明显差别     

抗独特型单克隆抗体在鸡中诱导的抗新城疫病毒保护性免疫——新城疫单克隆抗独特型疫苗研究(Ⅲ)

用AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id两株新城疫病毒(NDV)的抗独特型单抗(MAb_2)分别免疫接种一组(18只)无HI抗体鸡,并以一组(7只)Lasota苗常规免疫鸡和一组(12只)不免疫的易感鸡分别作为免疫阳性和阴性对照。在两株MAb_2末次免疫后8天,用微量血凝抑制(HI)试验检测了4组鸡的血清中HI抗体水平。结果:两株MAb_2和Lasota苗免疫的鸡全都产生了HI抗体,非免疫鸡均未测到HI抗体。AFE_8Id_(16-6)免疫鸡的HI滴度为1～5log_2;ALA_(15-6)Id免疫鸡的HI滴度为1～4log_2;Lasota苗免疫鸡的HI滴度高达7～10log_2。在HI抗体检测后2天,用100LD_(50)F_(48)E_8株NDV强毒攻击4组鸡,隔离观察10天,AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id免疫鸡的保护比值分别为17/18和10/18,Lasota苗免疫鸡保护比值达7/7,而非免疫对照鸡在攻毒后6天全部死亡。试验结果证明,上述两株MAb_2是NDV保护性抗原的模拟物,在多次注射后可诱导鸡产生抗NDV的血凝抑制抗体,并能使鸡抵抗NDV强毒的人工感染。因此,这两株抗独特型单抗,尤其AFE_8Id_(16-6)有希望用作新城疫抗独特型疫苗。     

鸡产蛋下降综合症(EDS—76)灭活油乳剂苗的研究 Ⅰ.灭活油乳剂苗的制备

在本试验中,司本-80和硬脂酸铝加入油相,吐温-80加入灭活的EDS-76尿囊毒为水相制备成油乳剂苗。福尔马林灭活病毒制备的疫苗其免疫效果高于热灭活病毒制备的疫苗,免疫后三周,前者的HI抗体水平达9.5log_2,而后者仅为4.0log_2.福尔马林灭活病毒制备的疫苗于腹腔、皮下注射小白鼠、豚鼠、兔子和10倍剂量接种产蛋鸡,结果均无不良反应;该疫苗为完全油包水剂型、不导电,滴于冷水表面不扩散,亲水亲油平衡值(HLB)为6.67;镜下所见疫苗颗粒为0.5μ直径大小。4℃存放6个月稳定,有效期至少6个月。     

灭活后无血凝价的禽流感H_5亚型病毒的免疫原性研究

0. 4 %甲醛灭活后血凝价为 0的 2株禽流感H5亚型病毒制备的油乳剂疫苗免疫 14 0日龄蛋鸡 ,疫苗免疫 10天后HI抗体水平分别升到 8. 0Log2、6 . 2Log2以上 ,免疫后 17～ 2 4天HI抗体水平升到高峰 (8. 8Log2、7. 8Log2 ) ,免疫 38天后能抵御剂量为 4ELD50 的同种强毒的攻击。结果表明 ,灭活后血凝价为 0的禽流感H5亚型病毒与灭活后血凝价为 5的病毒抗原的免疫原性无显著差异     

猪细小病毒病灭活疫苗佐剂筛选及配苗乳化工艺研究

为了筛选制备猪细小病毒病灭活疫苗(L株,悬浮培养)的佐剂,用注射用白油和法国赛比克公司生产的MontanideTMISA 206 VG佐剂(简称206佐剂)分别配制灭活疫苗,通过对两种疫苗的配苗乳化工艺、疫苗性状、无菌检验、安全检验、效力检验和免疫期等方面进行比较。结果显示:与注射用白油配制的疫苗相比,使用206佐剂配苗乳化工艺相对简单;制备疫苗剂型为水包油包水型,易注射,吸收良好;局部和全身均无不良反应,安全性良好;免疫后第7天猪细小病毒206佐剂疫苗免疫猪产生HI抗体效价显著高于白油佐剂疫苗,免疫后第60天猪细小病毒206佐剂疫苗免疫猪HI抗体效价达到峰值;免疫期为6个月。综上,确定206佐剂作为制备猪细小病毒病灭活疫苗的佐剂。     

免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对禽用联苗的免疫增强作用,将VA5分别与市售鸡新城疫-传染性法氏囊(新法)二联苗合用免疫SPF鸡和蛋鸡、与新城疫-H9亚型禽流感(新流)二联苗合用仅免疫SPF鸡,评价免疫后的抗体效价和SPF鸡攻毒后的保护效力。结果显示,SPF鸡或蛋鸡免疫含VA5的新法二联苗、新流二联苗后,新城疫血凝抑制(HI)抗体效价比常规苗组提前1周达到6 log2,禽流感HI抗体效价比常规苗组提前1周达到7 log2,法氏囊血清琼扩抗体和中和抗体比常规苗组均提前1周合格,且3种抗体持续高于常规疫苗组。免疫含VA5疫苗组的SPF鸡对新城疫强毒攻毒,以临床症状判断,可达全保护;以囊病变和临床症状判断,对法氏囊的攻毒提供全保护;H9变异株攻毒后不排毒。对上述3种病毒的保护力均高于常规苗。上述结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新法二联苗、新流二联苗对鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。     

H5亚型禽流感灭活疫苗的研制

以H5N1亚型禽流感病毒接种鸡胚，收取鸡胚液为抗原研制了禽流感灭活疫苗，并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验。结果表明，获得了较高效价的制苗抗原．灭活前后HA分别为2^10.0-11.0和2^9.0-10.0。试制疫苗物理性状符合要求，安全性良好。试验鸡在免疫14d后血清抗体达到2^7.5，210d血清HI抗体仍维持在2^5.0左右；免疫后18d使用高致病性H5亚型禽流感病毒攻毒，获得100％的保护。分别使用0．1，0．3和0．5mL免疫鸡，发现0．3～0．5mL剂量组免疫后血清抗体达到2^7.4-8.0。疫苗在2～8℃保存540d，疫苗物理性状没有改变，免疫后血清HI抗体可以达到2^7.5。这提示研制的疫苗可以有效控制禽流感H5亚型的流行。     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的免疫效力

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡，通过比较免疫后血凝抑制(HI)抗体应答水平、攻毒后发病率和死亡率等指标评价其免疫保护作用。免疫后21d，重组鸡痘病毒免疫组仅有13％～20％鸡的HI抗体检测呈阳性。在同亚型禽流感病毒攻击后，重组鸡痘病毒疫苗免疫组产生了100％的保护率，而未免疫组全部死亡。结果表明：重组鸡痘病毒疫苗不能激发高滴度HI抗体应答，但可抵御同亚型禽流感病毒致死性攻击，保护效果达到或优于目前应用的灭活苗，显示出良好的应用前景。     

鸡新城疫血凝和血凝抑制试验实训实习效果分析

[目的]对某养鸡场的鸡新城疫抗体进行血清学检测,以有效评估鸡群的免疫状态,制定合理免疫程序。[方法]对永州市某养鸡场病鸡进行鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验,检测鸡新城疫抗体水平。[结果]在检测的60份血样中鸡新城疫抗体效价为1：8—1：4。鸡新城疫抗体效价≥1：16（410g2）的占13．3％,鸡新城疫抗体效价≥1：8（3lo2）的占21．7％,鸡新城疫抗体效价〈1：4（2log2）的占65％。[结论]该鸡场鸡群鸡瘟疫苗免疫失败。     

人工合成禽流感M2e/HA0多肽的免疫原性分析

为了解流感病毒M2及HA保守肽段的免疫原性,参照流感病毒M2及HA的氨基酸序列分别设计合成多肽并免疫SPF鸡,设H5和H9亚型禽流感灭活疫苗及空白组作对照。对免疫后2、4、6和8周的血清进行HI和ELISA抗体、MDCK细胞的病毒血清法中和抗体效价和间接免疫荧光抗体检测,8周采血结束后用H9病毒进行攻毒检测。结果表明两种多肽疫苗均不产生HI抗体,针对各自多肽的ELISA抗体效价均显著高于H5/H9常规灭活疫苗对照组。M2e/HA0多肽苗免疫血清最高中和抗体效价为1∶16,远低于H9血清中和效价(1∶256)。间接免疫荧光检测结果显示多肽苗(M2e/HA0)组含荧光颗粒的MDCK细胞比例约20%左右,低于H5和H9灭活疫苗组含荧光颗粒细胞数(分别为50%和70%)。H9亚型禽流感病毒攻毒结果表明,两组多肽免疫后都可以有效抑制排毒,其中M2e免疫组抑制效果略好于HA0免疫组。以上结果提示M2e/HA0多肽具有较好的免疫原性,但其免疫原性弱于常规疫苗。     

不同猪瘟疫苗类型及剂量的抗体反应特性研究

随机选择3个猪场, 从9头母猪生下的仔猪中挑选81头仔猪。随机分成9组,每组又分为3个小组,每小组3头,分别免疫猪瘟组织苗(A)、猪瘟细胞苗(B)和猪瘟脾淋苗(C),各疫苗分别采用1头份、2头份和3头份3个剂量。于25日龄首免疫前后不同时间点采血,分离血清。应用ELISA和IHA两种方法分别对采集的540份血清检测猪瘟抗体。不同类型的猪瘟疫苗免疫试验结果表明：猪瘟脾淋苗免疫效果较好,但不同疫苗之间的抗体水平差异不显著。不同免疫剂量的试验结果显示：3种疫苗以3头份的剂量免疫后抗体反应略高于1头份和2头份,二免后都能获得较高的抗体水平。     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后免疫保护效应及其机理研究

 雏鸡 1日龄人工感染鸡贫血病毒 (CAV) ,于 8日龄接种 L asota疫苗 ,免疫后 2 8d进行新城疫强毒 (v NDV)攻击 ,以同龄未感染 CAV和用 L asota疫苗免疫并经 v NDV攻毒雏鸡为对照 ,检测其免疫保护效应 ,胸腺和脾脏 T细胞数量及 T细胞增殖反应 ,法氏囊和脾脏 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量 ,血清免疫球蛋白 Ig G、Ig M、Ig A含量 ,血凝抑制抗体 (HI)滴度等。结果表明 ,CAV人工感染并用新城疫 (ND)疫苗免疫雏鸡经 v NDV攻击后的免疫保护率为 6 0 % ,对照组雏鸡 v NDV攻击后免疫保护率为 10 0 % ,胸腺和脾脏 T细胞数量和 T细胞增殖反应、法氏囊和脾脏Ig G+ 、Ig M+ 、Ig A+ 抗体生成细胞数量、血清 Ig G、Ig M、Ig A含量及 HI抗体滴度 ,均较对照组雏鸡显著降低。说明感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后的免疫保护效应及免疫功能明显降低。     

猪细小病毒灭活疫苗NJ株毒种分离及鉴定

为防控猪细小病毒病,进行了猪细小病毒灭活疫苗毒种研究。将南京某猪场初产母猪流产胎儿的脾、肺等组织病料处理后接种ST细胞培养,获得了1株猪细小病毒强毒,将分离毒株适当稀释接种ST细胞,经3轮蚀斑纯化获得1株纯净的猪细小病毒NJ株(PPV-NJ株),作为疫苗毒株。将NJ株接种ST细胞培养连续传15代,每代次病毒效价均不低于1 ml 107.25TCID50、血凝素效价不低于29。选择第5代病毒液,灭活后与矿物油佐剂混合乳化制成灭活疫苗,以不同剂量分别免疫豚鼠和后备母猪,用血凝抑制试验(HI)和ELISA检测抗体效价。分别用剂量0.125 ml、0.250 ml和0.500 ml疫苗免疫豚鼠28 d后,各免疫组HI抗体效价均高于28,0.5 ml组HI抗体效价高达211,ELISA抗体均显示阳性(OD630≥0.32),分别用剂量0.5 ml、1.0 ml和2.0 ml疫苗免疫后备母猪后,HI检测结果显示,3个剂量组免疫后1周HI抗体效价高于26,3周后达峰值,至免疫后4个月略有下降,2.00 ml剂量组HI效价最高(211.75)。ELISA检测结果显示,各剂量组在免疫后1周均转阳(OD630≥0.32),免疫后4～18周均维持较高水平。HI抗体效价和ELISA抗体水平与免疫剂量均呈正相关性。结果显示,利用NJ株病毒制备的灭活疫苗具有抗体产生快、效价高等特点,显示出良好的疫苗开发前景。     

不同基因型NDV灭活油乳苗与La Sota株灭活油乳苗的免疫效果比较

用地方分离的基因Ⅵ型和Ⅶ型代表株 (LD - 3- 0 0株和LD - 7- 0 2株 )配以传统的LaSota株所制备的灭活油乳苗与LaSota株单价灭活油乳苗进行的免疫效果比较显示 :前者在接种后各个时期所产生的HI抗体效价与LaSota株灭活苗免疫鸡所产生的HI抗体效价无明显差异 ,至接种后第 4 2天两者均具有 7.3log2 的HI效价。在对具有不同HI抗体水平的试验鸡进行的攻毒试验中 ,对F4 8E9标准强毒株的攻击 ,无论是LaSota株疫苗免疫鸡 ,还是不同基因型灭活苗免疫鸡 ,在HI抗体效价为 6log2 以上时均能 10 0 %地被保护 ;但对不同基因型野毒株的攻击 ,尤其是基因Ⅶ型野毒株的攻击 ,2种疫苗则呈现出明显的差异。在LaSota株疫苗免疫鸡HI效价为 6log2 时 ,对不同基因Ⅶ型野毒株的攻击 ,保护率只有 0～ 2 0 % ;而具有 6log2 效价的不同基因型疫苗免疫鸡则对不同基因Ⅶ型野毒株的攻击具有 6 0 %～ 70 %的保护率 ;当HI效价达 8log2 左右时 ,LaSota株疫苗免疫鸡对基因Ⅶ型野毒株的攻击也只有 80 %的保护率 ,而不同基因型疫苗免疫鸡已能 10 0 %地被保护 ;LaSota株疫苗免疫鸡只有在HI效价在 9log2 以上时 ,方可 10 0 %地抵抗基因Ⅶ型野毒株的攻击。     

禽流感疫苗免疫鸡群后HI抗体消长规律及免疫保护临界值的测定

禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)SD-1株(H5N2亚型)接种10日龄SPF鸡胚,收获24h后死亡的鸡胚尿囊液,按照《兽医生物制品规程》制备油乳剂灭活苗,并对200只14日龄雏鸡进行免疫,免疫后每隔1周抽取20只鸡测定HI抗体,并分别选择HI抗体水平为3log2、4log2、5log2、6log2和7log2时进行攻毒。结果表明,疫苗免疫鸡群后第8周抗体达到高峰(8log2),而后逐渐下降,第16周抗体降至5log2。攻毒试验表明,能够抵抗致死剂量AIV攻击的HI抗体临界值为5log2。     

免疫鸡血清与卵黄中EDS-76抗体水平比较

分别采取接种前和接种后的36只处于产蛋期的试验鸡血液分离血清及收集鸡蛋提取卵黄。卵黄分别用16%NaCl、8%柠檬酸钠和氯仿处理后,与血清一起检测减蛋综合症(EDS-76)病毒间接血凝抑制(HI)抗体。试验结果表明,血清HI抗体效价和卵黄HI抗体效价具有较好的一致性。由卵黄代替血清检测减蛋综合症HI抗体效价,作为鸡群诊断,免疫水平评估和疫苗质量评价的手段是可行的,在减蛋综合症防制中具有实际意义。     

免疫增强剂提高禽用多联疫苗在蛋鸡的免疫效力

评价VA5免疫增强剂对禽用多联苗的免疫增强作用。将VA5与新城疫-传染性支气管炎-减蛋下降综合症-H9亚型禽流感(新-支-减-流)四联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡和罗曼蛋鸡、与新-支-流三联疫苗合用免疫海兰褐壳蛋鸡,评价免疫后的抗体效价和攻毒后的保护效力。海兰褐壳蛋鸡或罗曼蛋鸡免疫含VA5的四联疫苗、三联疫苗后的第2、第3和第4周,针对新城疫、传支、减蛋综合征和禽流感的血清血凝抑制(HI)抗体效价均持续高于不加增强剂的常规疫苗组,且第3和第4周HI抗体效价均差异显著(P0.05);针对新城疫、传支、减蛋综合征和禽流感的粘膜HI抗体效价均亦高于不加增强剂的常规苗组,且差异极显著(P0.01)。免疫含VA5四联疫苗组的海兰褐壳蛋鸡,在新城疫强毒攻毒后,以临床症状判断,可以100%保护;在禽流感H9变异株攻毒后,可完全抑制不排毒。对上述2种病毒的攻毒保护力均高于常规疫苗。结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新-支-减-流四联疫苗、新-支-流三联疫苗对蛋鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。     

AA鸡禽流感母源抗体和免疫抗体消长变化的研究

[目的]为AA鸡的禽流感预防提供依据。[方法]用不同剂量的2种禽流感疫苗免疫8日龄AA鸡,通过血凝抑制(HI)试验研究AA鸡禽流感母源抗体和免疫抗体的消长变化。[结果]AA鸡禽流感母源抗体在1~7日龄时缓慢下降,之后迅速下降,表明其半衰期约为2 d。2种禽流感疫苗均可用于AA鸡的预防接种,免疫后15 d,免疫抗体HI效价达到保护临界值,20 d时达到峰值,然后缓慢下降,43日龄时仍在临界值以上。2种不同剂量的禽流感灭活油乳剂疫苗接种后所产生的HI抗体效价的峰值差异极显著。[结论]选用禽流感灭活油乳剂疫苗,免疫剂量为0.5 ml/只,免疫时间为8日龄,整个饲养期免疫1次,即可预防商品代AA鸡禽流感。     

H_5N_1亚型Re-4株禽流感疫苗免疫的检测与分析

在2008～2009年石家庄地区,商品蛋鸡中采集754份血样,经过检测H5N1,Re-4株HI抗体可看出,均匀度较差,有11份HI抗体为0,179份HI抗体在6log2以下,易受到威胁。HI抗体平均为6.82log2;随着免疫次数的增加,HI抗体在逐渐增高,但多次免疫HI抗体不超过12log2;雏鸡母源抗体1日龄为5.09log2,在24日龄降为0;雏鸡15日龄免疫H5N1亚型Re-4株疫苗21天后产生较强免疫力。